1 試劑
1.1標(biāo)準(zhǔn)血漿
用3.8%枸櫞酸三鈉作抗凝劑，按1∶10比例采集全血（1份抗凝劑+9份全血)。4℃2000r/min離心20分鐘，分離血漿。取30份新鮮正常人血漿等量混合后，分裝于小塑料管內(nèi)（0.5ml/支)。置-30℃冰箱保存?zhèn)溆�。從采血到血漿凍結(jié)完畢不超過(guò)4小時(shí)。用時(shí)在37℃水浴中融化，然后置冰浴中備用，亦可制成凍干品。
1.2 基質(zhì)血漿
用1.34%草酸鈉人和抗凝劑，按1∶10比例采集健康人血（1份草酸鈉+9份全血)10℃以下2000r/min離心20分鐘，分離血漿，然后按10%（W/V)加入BaSO4，在37℃水浴內(nèi)攪攔吸附15分鐘，10℃以下2000r/min離心30分鐘，取上清分裝（3ml/支)。-30℃保存?zhèn)溆谩牟裳窖獫{凍結(jié)不超過(guò)6小時(shí)。使用時(shí)在37℃水浴中融化，然后置冰浴中備用。
1.3 凝血活酶溶液
取干兔腦粉120mg，加2ml生理鹽水，加0.1ml1.34%草酸鈉溶液，放入45～50℃水浴中攪拌15分鐘，2000r/min離心5分鐘，取上清液置冰浴中備用。當(dāng)日配制當(dāng)日使用，或存放于-30℃1個(gè)月內(nèi)使用。
1.40.025mol/LCaCl2溶液
稱2.775g無(wú)水氯化鈣（分子量110.98，AR)，加水溶解至1000ml。
1.5 稀釋液
生理鹽水調(diào)pH7.4，再加白蛋白使最終濃度為0.2%。
2 測(cè)定
2.1空白
取10×75mm試管2支，每管加0.1ml稀釋液，0.1ml基質(zhì)血漿，0.1ml凝血活酶，然后置37℃水浴中保溫1分鐘，再加0.1ml37℃預(yù)熱的0.025mol /LCaCl2溶液，記錄CaCl2加入至纖維蛋白形成的時(shí)間，應(yīng)大于payment-defi.com/job/3分鐘。
2.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)備
用稀釋液將標(biāo)準(zhǔn)血漿作1∶2至1∶32的2倍系列稀釋，然后取不同稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)血漿0.1ml代替空白稀釋液，其他按空白測(cè)定過(guò)程和要求進(jìn)行，兩管測(cè)定結(jié)果相對(duì)誤差應(yīng)≤10%。
2.3 樣品測(cè)定
用稀釋液將樣品作適當(dāng)?shù)?個(gè)稀釋度（使凝固時(shí)間落于標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi))，然后取不同稀釋度的樣品0.1ml，代替空www.med126.com白稀釋液，其他按空白測(cè)定過(guò)程和要求進(jìn)行。
2.4結(jié)果計(jì)算
用回歸方程計(jì)算：將不同稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)血漿凝固時(shí)間（秒)和稀釋度的對(duì)數(shù)值輸入到科計(jì)算器，得到一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，r值應(yīng)大于0.97。然后將稀釋樣品的凝固時(shí)間的對(duì)數(shù)分別輸入到計(jì)算器內(nèi)，得到相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)血漿的稀釋倍數(shù)，用樣品的稀釋倍數(shù)除以相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)血漿的稀釋倍數(shù)即為凝血酶原復(fù)合物的效價(jià)單位/ml（每一單位相當(dāng)于1ml正常人血漿血液凝固因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ的活性)。取樣品兩個(gè)稀釋度的效價(jià)單位的均值為本樣品效價(jià)單位/ml。
