自1983年Warren和Marshall報告,從胃炎患者胃粘膜分離幽門螺桿菌(Helicobacter pylori,Hp)以來,越來越多的資料表明,Hp與慢性胃炎,消化性潰瘍關(guān)系密切,歷此,為了有效的防治Hp相關(guān)慢性胃炎、消化性潰瘍等疾病,需要一種快速、準確而直觀的檢測Hp手段。目前,檢測Hp手段較多,包括:切片法、涂片法、刷檢法、培養(yǎng)法、尿素酶法、13C呼氣試驗法及抗體檢法等。這些方法歸納起來,有以下缺點:①需取材標—費事;②標本需要處理—費時間;③作者的新鮮胃切除標本實驗表明,Hp在胃內(nèi)的分布并非均勻,如局部取樣檢測,不可避免的出現(xiàn)假陰性。那么,能否將胃內(nèi)的Hp檢測直觀化呢?就此問題,我們進行基礎(chǔ)及臨床的探討。
1 基礎(chǔ)研究
1.1 原理
幽門螺桿菌是棲息在胃粘膜的革蘭陰性螺旋狀短桿菌,具有強的尿素酶科活性,將尿素分解成氨和二氧化碳,氨屬堿性,提高胃內(nèi)pH值,使含有酚紅的試劑由桔黃色變成粉紅色或紅色。
1.2 試劑的研制
確定一定濃度的Hp分解尿素,改變pH值,使試劑顏色改變的尿素和酚紅的濃度。方法是將一定濃度的幽門螺桿菌,即5×10CFU/ML分別加入不同濃度尿素和酚紅溶液中,觀察其顏色變化(表1)。
實驗結(jié)果表明,一定濃度的Hp分解尿素,改變pH值,使試劑顏色改變的尿素和酚紅的最適宜濃度分別為0.5mol/L及0.025%
表1 不同濃度素與酚紅溶液中Hp的顏色
尿素濃度(mol/L) |
酚濃度(%) |
顏色變化 |
0.1 |
0.005 |
- |
0.2 |
0.010 |
- |
0.3 |
0.015 |
- |
0.4 |
0.020 |
- |
0.45 |
0.025 |
+ |
1.3 Hp分解尿素的適宜pH
我們配成上述試劑后噴灑于胃粘膜,發(fā)現(xiàn)除極個別病例胃粘膜著粉紅色或紅色,絕大多數(shù)病例并不著色,這是什么原因呢?后來發(fā)現(xiàn)Hp菌體所含的尿素酶,分解尿素的最適宜pH值為5~8,而慢性胃炎,尤其是消化性潰瘍病人的pH值多在1~3,我們認為使Hp分解尿素,必須改胃內(nèi)的pH值,根據(jù)胃酸泵抑制劑奧美拉唑和胃H2受體阻滯劑Famotidine20mg或檢查前1h靜脈注射Famotidine 20mg,檢測慢性胃炎,消化性潰瘍共30例,用pH檢測慢性胃炎,消化性潰瘍共30例,用pH檢測導(dǎo)管從胃鏡活檢孔插入檢測胃pH值,結(jié)果pH值為5.0~5.5,2例;5.6~6.0,15例;6.1~6.5,8例;6.6~7.0,5例。
以上結(jié)果表明,檢查前1a晚上服奧美拉唑20mg,或檢查前1h靜脈注射famotidine 20mg,胃pH值達到5.0~7.0。
2 臨床研究
2.1 對象與方法
本組175例均經(jīng)GIF—100型電子胃鏡診斷,其中慢性胃炎100例,胃潰瘍25例,十二指腸潰瘍50例。檢查前1d晚上口服奧美拉唑20mg。插入胃鏡后先將胃液抽空,胃竇、胃角及胃體各取1塊活檢做切片,吉姆薩染色、檢測Hp,以作與噴灑法相對照。然后經(jīng)塑料管注入我消化實驗室研制的試劑噴灑于胃竇、胃角、胃體及潰瘍周圍,觀察顏色變化,胃粘膜被染成粉紅色或紅色為陽性。
3 結(jié)果 見表2,表3。
表2 試劑噴灑與切片法相對照結(jié)果
方 法 |
慢性胃炎(n:100) |
胃潰瘍(n:25) |
十二指腸潰瘍(n:50) |
切片法Hp陽性率(%) |
50.0 |
72.0 |
80.0 |
試劑噴灑Hp陽性率(%) |
68.0 |
80.0 |
90.0 |
表3 慢性胃炎、胃潰瘍、十二指潰瘍的染類型(%)
試劑反應(yīng) |
n |
彌慢性著色 |
局灶性著色 |
散在性著色 |
不著色 |
慢性胃炎 |
100 |
57(57.0) |
2(2.0) |
9(9.0) |
32(32.0) |
胃潰瘍 |
25 |
13(52.0) |
5(20.0) |
2(8.0) |
5(20.0) |
十二指潰瘍 |
50 |
34(68.0) |
4(8.0) |
7(14.0) |
5(100.0) |
4 討論
目前,檢測Hp的方法較多,包括切片法、涂片法、刷檢法、培養(yǎng)法、尿素酶法、13C呼氣試驗法及抗體檢測法等。這些檢查均需一定的時間,1988年作者研制的快速Hp檢測試劑,只需幾秒至1min以內(nèi)即可檢測Hp,但其缺點是取胃粘膜活檢的局限性可能出現(xiàn)假陰性。本方法是Hp菌體內(nèi)含有豐富的尿素酶—分解尿素—改變pH(偏堿性)—試劑由桔黃色變?yōu)榉奂t色或紅色的原理設(shè)計。伊藤報告Hp尿素酶活性的適宜pH值為5.0左右。我們從臨床試驗驗證,病人在受檢前一天晚上,服胃酸泵抑制劑奧美拉唑20mg或胃組織胺H2受體阻滯劑famotidine 20mg靜脈注射60min后,胃pH值達到5~7。
作者采用新鮮胃切除標本反復(fù)檢測Hp結(jié)果表明,Hp在胃粘膜的分布并非均一,提示胃粘活檢檢法檢測Hp可能出現(xiàn)假陰性,本方法可除假陰性。
本文慢性胃炎100例的著色率為68%,切片法Hp陽性率為60%,胃潰瘍25例的著色率為80%,切片法Hp陽性率為72%,十二指腸潰瘍50例的著色率為90%,切片法Hp陽性率為80%,提示切片法確有假陰性。
內(nèi)鏡下胃粘膜萎縮輕中度的17例中5例呈彌漫性著色,2例呈散在性著色,而胃粘膜萎縮明顯的4例均不著色。另外,本文還提示,胃內(nèi)Hp的分布以幽門腺領(lǐng)域為多,越向胃底腺區(qū),Hp的分布也越稀疏。胃潰瘍25例中13例呈彌漫性著色,5例呈局灶性著色,2例呈散在性著色,且在這些著色的部位中均檢出Hp,令人感興趣的是7例胃潰瘍周圍粘膜呈深著色,其中包括難治性胃潰瘍3例。十二指腸潰瘍50例中34例(68.0%)呈彌漫性著色,4例(8.0%)呈局灶性著色,7例(14.0%)呈散在性著色,在這些著色組織中均檢出Hp。
本文資料還表明,Hp陽性的胃及十二指腸潰瘍較陰性者治愈時間延長,且復(fù)發(fā)率也高。上述結(jié)果表明,在治療慢性胃炎和消化性潰瘍的過程中必須清除Hp,本文則提供了在內(nèi)鏡下直接清除Hp的廣闊前景。內(nèi)鏡下噴灑藥物直接清除Hp的臨床實驗正在進行。
李增燦 陳頻佳 侯鵬 陳田 李揚
解放軍211醫(yī)院消化內(nèi)科(哈爾濱 150080)