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抗幽門螺桿菌抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)的應(yīng)用

  由于幽門螺桿菌(H.pylori,Hp)人群感染率高,在正常人群中往往也存在一定的抗Hp抗體滴度,在抗體測(cè)定中因選擇的陰性參考血清不同,各檢驗(yàn)單位間的資料沒(méi)有可比性,同時(shí)也不利于病人抗Hp治療后對(duì)其抗體滴度變化的觀察。本實(shí)驗(yàn)在大量人群資料和實(shí)驗(yàn)室資料的基礎(chǔ)上,確定了抗Hp尿素酶抗體檢測(cè)中的陽(yáng)性判斷界值,建立了此抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng),完成了標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中特異性抗Hp尿素酶抗體的定量工作。

  1 材料和方法

  1.1 材料

  抗Hp抗體陽(yáng)性及陰性血清各50份,經(jīng)實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)和免疫印跡分析(Western blots)證實(shí)。10736份其它血清采自北京和河南的四個(gè)人群現(xiàn)場(chǎng)。Hp尿素酶抗原(HpU)由本實(shí)驗(yàn)室分離純化。酶標(biāo)板采用美國(guó)Linbro/Titertek酶標(biāo)板。IgG標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自百泰生物技術(shù)公司,為日本北里研究所產(chǎn)品,IgG含量為15.5g/L。參考血清由多份抗Hp抗體陽(yáng)笥血清混合而成。

  1.2 方法

 、儆6μgHpU/孔包被酶標(biāo)板。用常規(guī)ELISA方法測(cè)定各血血中的抗Hp抗體,用Linbro/Titertek酶標(biāo)儀讀取各孔吸光度(A)[舊稱光密度(OD)下同],用參考血清作板間校正后,用Foxpo及EPI軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析處理,確定血清抗Hp菌IgG抗體檢測(cè)結(jié)果與臨床Hp感染的高符后率判斷界值。②用100~0.001μgIgG標(biāo)準(zhǔn)品/孔不同濃度包被酶標(biāo)板(每種濃度包被3孔),用ILISA方法測(cè)定IgG標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)合量,觀察IgG標(biāo)準(zhǔn)品可全部結(jié)合時(shí)的適宜包被濃度用IgG標(biāo)準(zhǔn)品被量與吸光度(A)間存在線性關(guān)系的范圍。③用過(guò)量抗原(300μgHpU/孔)包被酶標(biāo)板,將能考血清按1:20~1280倍比稀釋后,用常規(guī)ELISA方法測(cè)定各稀釋血清中的抗HpU抗體(每滴度測(cè)定6孔),用Linbro/Titertek酶標(biāo)儀讀取各孔吸光度(A),繪制不同滴度與吸光度(A)間存在線性關(guān)系的范圍內(nèi),采用三點(diǎn)計(jì)算參考血清中抗HpU特異性抗體的含量,并按其均值推算標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中特異性抗HpU抗體的含量。

  2 結(jié)果

  統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,用參考血清及吸光度(A)的0.77倍[即將參考血清稀釋3.74倍時(shí)的吸光度(A)]作為判斷待測(cè)血清的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)時(shí),達(dá)到最高的檢測(cè)符合率,此時(shí)對(duì)100份抗幽門螺桿菌抗體陽(yáng)性及陰性血清的檢測(cè)符合率為100%。

  IgG標(biāo)準(zhǔn)品可全部結(jié)合時(shí)的適宜包被濃度為≤0.2μgIgG標(biāo)準(zhǔn)品/孔,IgG標(biāo)準(zhǔn)品包被量與吸光度(A)間存在線性關(guān)系的范圍為包被濃度為0.2~0.01μgIgG標(biāo)準(zhǔn)品/孔。

  在IgG標(biāo)準(zhǔn)品包被量與吸光度(A)間存在線性關(guān)徑流的范圍內(nèi),采用三點(diǎn)進(jìn)行參考血清HpU特異性抗體的含量測(cè)定結(jié)果分別為239、248和248μg /ml,平均245μg/ml。依此計(jì)算得出標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中特異性抗HpU抗體的含量為66μg/ml。

  3 討論

  本實(shí)驗(yàn)在大量人群資料和實(shí)驗(yàn)資料的基礎(chǔ)上,建立了抗體幽門螺桿菌血清抗體診斷標(biāo)準(zhǔn),并在國(guó)內(nèi)抗幽門螺桿菌素酶抗體檢測(cè)中首次采用判斷界值技術(shù),完成了標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中特異性抗幽門螺桿菌尿素酶抗體的定量工作,不但使檢驗(yàn)過(guò)程更加穩(wěn)定,使各檢驗(yàn)單位的資料具有可比性,也使基層單位應(yīng)用目測(cè)判斷結(jié)果也能達(dá)到檢驗(yàn)要求。此標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)用于慢性胃炎消化性潰瘍的協(xié)助診斷及流行病學(xué)調(diào)查,在北京天壇醫(yī)院、友誼醫(yī)院、北京腫瘤研究所、首都兒科研究所及廣東、江西、河北、內(nèi)蒙、河南等地的應(yīng)用取得了良好的效果。

張建中 陳晶晶 蔣秀高

中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院流行病學(xué)微生物學(xué)研究所(北京102206)

國(guó)家自然科不基金和工業(yè)部青年基金資助項(xiàng)目

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