幽門(mén)螺桿菌（Helicobacter pyloir，Hp)是慢性B型胃炎的主要原因，與非潰瘍性消化不良，胃和十二指腸潰瘍及胃癌關(guān)系密切。流行病學(xué)研究表明，在國(guó)人無(wú)癥狀或健康人群Hp總感染率在33.9％～49.6％；在慢性胃炎Hp檢出率為50％～80％，胃潰瘍為70％～80％，十二指腸潰瘍?yōu)?0％～100％。但Hp感染缺乏臨床表現(xiàn)的特征，因而目前仍主要靠實(shí)驗(yàn)室診斷。以前國(guó)內(nèi)外診斷Hp的方法無(wú)外三大類(lèi)，一是直接從胃粘膜中檢測(cè)Hp，包括細(xì)菌培養(yǎng)、組織涂片和切片染色；二是尿素酶試驗(yàn)或呼吸試驗(yàn)診斷Hp；三是免疫學(xué)方法，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)等。近年來(lái)通過(guò)多項(xiàng)研究和方法改進(jìn)，可克服某些不足之處，下面將國(guó)內(nèi)Hp感染的診斷方法研究近況作一簡(jiǎn)述。
1 通過(guò)胃鏡
1.1 病灶沖洗法下接涂片
組織涂片革蘭染色法檢測(cè)Hp感染簡(jiǎn)便、快速、敏感性可達(dá)80％以上，但也有低于50％的檢出率，除與檢驗(yàn)醫(yī)師經(jīng)驗(yàn)有關(guān)，還與取材部位和Hp數(shù)量有關(guān)。新近何松等對(duì)52例慢性胃炎患者在切取胃竇部病變區(qū)組織活檢的同時(shí)，內(nèi)鏡下用生理鹽水對(duì)病灶沖洗，將總洗液離心后制成涂片比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)涂片Hp陽(yáng)性率明顯高于切片方法（53.9％比38.5％)，認(rèn)為沖洗法覆蓋面大，可廣泛、反復(fù)沖洗，取材較活檢更全面，可提高Hp檢出率。
1.2 胃鏡下直接顯色法
Hp菌體內(nèi)含豐富尿素酶能分解尿素，改變pH值。根據(jù)這一原理，李增燦等用粉紅色素噴灑胃粘膜方法對(duì)100例慢性胃炎研究結(jié)果顯示，粉紅色素噴灑法著色率68％；傳統(tǒng)切片法HP陽(yáng)性率為60％；胃潰瘍25例著色法陽(yáng)性率80％，切片法72％；十二指腸潰瘍50例，著色法陽(yáng)性率90％，切片法為80％，表明切片法存在假陰性，而胃鏡下直接顯色法可提高Hp的檢出率。
1.3 尿素酶活性測(cè)定Hp
目前診斷Hp常采用的細(xì)菌培養(yǎng)，組織染色及尿素酶試驗(yàn)等方法均需內(nèi)鏡取材，且方繁瑣，費(fèi)時(shí)，并且結(jié)果受Hp斑片狀分布的影響。崔東來(lái)等根據(jù)Hp產(chǎn)生大量尿素酶的原理，采用尿素酶活性診斷Hp，Hp感染者尿素酶活性明顯高于無(wú)Hp感染者，以尿素酶活性0.31作為截?cái)嘀�，其診斷Hp的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性分別為95％、84％和93％，而且認(rèn)為尿素酶活性診斷Hp快速、簡(jiǎn)便，不受血尿素氮影響等優(yōu)點(diǎn)，也比測(cè)定胃液尿素氮方法優(yōu)越。
2 血清學(xué)
2.1 ELISA法
通過(guò)血清中Hp抗體測(cè)定Hp感染的方法比較多，有ELISA法、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、單克隆抗體測(cè)定法、免疫印跡試驗(yàn)、被動(dòng)血凝試驗(yàn)和細(xì)菌凝集試驗(yàn)等，尤其是ELISA法應(yīng)用最廣。Hp感染后很快會(huì)激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性體免疫，血清中出現(xiàn)IgG，IgA，IgM抗體，國(guó)內(nèi)外多采用ELISA法檢測(cè)HpIgG抗體。
2.1.1 HpIgG測(cè)定
在廣州地區(qū)一項(xiàng)流行病學(xué)調(diào)查Hp感染率研究中，經(jīng)1848例人群Hp感染分析，并經(jīng)組織病理學(xué)和細(xì)菌培養(yǎng)比較，認(rèn)為測(cè)定HpIgG抗體診斷Hp感染其敏感性和特異性分別達(dá)100％和91％。劉勤儉等對(duì)235例人群及20多個(gè)家庭Hp感染調(diào)查時(shí)，用間接ELISA法檢測(cè)血清HpIgG抗體，其敏感性和特異性分別達(dá)94％和85％。新近童明慶等介紹了一種斑點(diǎn)—ELISA技術(shù)，經(jīng)對(duì)18例慢性胃炎、消化性潰瘍患者，19例兒童和22例正常成人行HpIgG抗體測(cè)定，患者組抗體檢出率72.2％，與快速尿素酶法相比，符合率為83.3％，診斷的敏感性和特異性分別為91.7％和66.7％。認(rèn)為本法克服了快速尿素酶法需胃鏡取材的缺點(diǎn)，因而較適合臨床Hp感染的初篩檢查和流行病學(xué)研究。
2.1.2 HpIgA測(cè)定
最近王正祥等經(jīng)用間接ELISA法檢查血清HpIgG抗體和IgA抗體比較，結(jié)果在胃炎抗HpIgG陽(yáng)性率達(dá)82.3％(93/113);Hp現(xiàn)感染率74.3％(84/113);在抗HpIgG陽(yáng)性標(biāo)本中有11.8％(11/93)經(jīng)Hp培養(yǎng)和(或)涂片陽(yáng)性，而在抗HpIgA陽(yáng)性標(biāo)本中僅2.6％(2/78)經(jīng)Hp培養(yǎng)和(或)涂片陰性，因而認(rèn)為抗HpIgA升高比抗HpIgG升高更能反映機(jī)體正被Hp感染.可作為Hp現(xiàn)感染的診斷指標(biāo)，而抗HpIgG可作為胃炎患者初篩及Hp感染的流行病學(xué)研究的指標(biāo)。
2.1.3 尿素酶檢測(cè)
在行ELISA試驗(yàn)時(shí)最重要的是抗原的選擇，以前使用的一些抗原制備是應(yīng)用全菌或全菌超聲粉碎物作抗原，這種抗原制備含有多種菌體及鞭毛蛋白，其中有些物質(zhì)或不具備抗原性、或?yàn)槠渌N所共有，如Hp與空腸彎曲菌有血清交叉反應(yīng)等因素。因而試驗(yàn)的敏感性高，但缺乏特異性，酸提取法雖較純凈，但特異性和敏感性不理想。有研究人員，采用柱層析法純化了Hp的尿素酶，并用該尿素酶作ELISA測(cè)定包被抗原，對(duì)120例有消化不良癥狀的血清進(jìn)行檢測(cè)，平均光密度值在Hp陽(yáng)性組明顯高于Hp陰性組，如以0.3光密度值為標(biāo)準(zhǔn)，診斷的敏感性和特異性分別為95％和91％。因而認(rèn)為用尿素酶作為抗原應(yīng)用于ELISA試驗(yàn)具有良好的特異性和敏感性。
2.1.4 單克隆抗體測(cè)定法
有研究人員介紹了HpmAbs（單克隆抗體)免疫過(guò)氧化物酶染以法診斷Hp感染，用ELISA法將HpmAbs與已知細(xì)菌反應(yīng)，結(jié)果HpA值明顯高于其它細(xì)菌，因而認(rèn)為HpmAbs為Hp分離純化后的鑒定提供了手段。
2.2 聚合酶鏈反應(yīng)法
診斷Hp感染的方法很多，但他們有一共同特點(diǎn)是不能達(dá)到足夠的敏感性，尤其是不能準(zhǔn)確判斷治療后Hp是否被徹底清除。王蔚虹等采用聚合酶鏈反應(yīng)（Polymerase chain reaction，PCR)探討其在Hp診斷和評(píng)價(jià)治療后根治效果中的意義，結(jié)果PCR方法檢測(cè)胃粘膜活檢標(biāo)本中的Hp，簡(jiǎn)便、快速、具有高度敏感性，可檢出最小HpDNA量為0.1pg，特異性達(dá)100％，對(duì)其它細(xì)菌及無(wú)Hp感染人胃粘膜呈陰性反應(yīng)。PCR用于Hp感染診斷與尿素酶試驗(yàn)、細(xì)菌培及銀染色法比較，更敏感，而且PCR可檢出常規(guī)方法不能檢出的Hp。楊海濤等將巢式PCR在牙斑中檢出Hp，其特異性達(dá)100％，敏感性達(dá)到可檢測(cè)0.1fg細(xì)菌DNA的水平。
由于不同實(shí)驗(yàn)方法可得出不同結(jié)論，因而需要正確加以評(píng)價(jià)。如牙斑中存在Hp是否為主要傳染源意見(jiàn)尚不一致。1991年Desai等用尿素酶試驗(yàn)對(duì)43例消化不良患者的牙斑中、胃竇及胃粘膜標(biāo)本標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)陽(yáng)性率分別為98％，67％和70％，認(rèn)為牙斑中Hp是主要傳染源。宋群生等用尿素酶試驗(yàn)、細(xì)菌培養(yǎng)和免疫熒光抗體染色和電鏡觀察，也發(fā)現(xiàn)消化性潰瘍、慢性胃炎及胃癌等患者牙斑中可有大量Hp存在，其形態(tài)學(xué)、生化特性和免疫特性均與胃粘膜Hp相似。從牙斑的直接快速尿互酶試驗(yàn)和抗Hp免疫熒光抗體染色結(jié)果看，胃粘膜上有Hp，牙斑中也有Hp ；胃粘膜上未發(fā)現(xiàn)Hp者，牙斑中也有Hp寄生，且牙斑中的Hp數(shù)量、密度均高于胃粘膜。但相反意見(jiàn)認(rèn)為，Hp有尿素酶，可分解尿素，使pH升高，當(dāng)pH高于6.8時(shí)，酚紅由黃色變紅色，而單純口腔內(nèi)的pH值足以使尿素酶試驗(yàn)呈陽(yáng)性結(jié)果并不能肯定是Hp感染。根據(jù)對(duì)21例患者用N-PCR法測(cè)定胃粘膜Hp 陽(yáng)性者，8例牙斑中也檢出Hp，而胃粘膜陰性者，牙斑Hp均陰性，提示牙斑中僅有少量Hp存在。
3 核素標(biāo)記呼氣試驗(yàn)
Hp具有較強(qiáng)的內(nèi)源性尿素酶，能分解胃內(nèi)及核素標(biāo)記的尿素，產(chǎn)生CO2和NH3，CO2被吸收后經(jīng)肺呼出，因此只需分析呼氣中的14C或13C即可診斷Hp的存在。國(guó)內(nèi)也采用13C－尿素為示蹤劑診斷Hp感染，認(rèn)為具有較好診斷價(jià)值，但受技術(shù)條件和價(jià)格所限，不適合國(guó)內(nèi)，尤其基層醫(yī)院開(kāi)展。
綜上的述，Hp感染的診斷方法比較多，快速尿素酶試驗(yàn)、尿素酶活性試驗(yàn)、直接顯色法、涂片革蘭染色法、組織切片染色等簡(jiǎn)便、易行；血清學(xué)檢查尤適用于流行病學(xué)調(diào)查，而PCR主法對(duì)判斷治療后Hp的根除情況更為準(zhǔn)確，不同研究目的，采用不同方法似乎更妥善。
楊保忠 丁艷梅 陸瑞蘭
河北省邯邢治金礦山局玉泉嶺醫(yī)院（武安市 056301)
