自1983年國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌（Hp)以來，有關(guān)該菌的研究及其與上消化道疾病的關(guān)系研究取得了長足進(jìn)展，尤其是有關(guān)Hp檢測方面的研究，已經(jīng)逐步深入和普及，并取得委很多可喜的成果。
一般根據(jù)檢測同時(shí)是否需做胃鏡檢查分為：①侵入性診斷方法，必須在胃鏡下取材。包括：尿素酶試驗(yàn)、細(xì)菌培養(yǎng)、活檢標(biāo)本切片染片和直接涂染色等。②非侵入性診斷方法，不需胃鏡。包括：13C，14C呼吸試驗(yàn)、血清免疫學(xué)檢測，15N尿素排泄試驗(yàn)等。
1 尿素酶試驗(yàn)
該試驗(yàn)是所有檢測手段中最為簡便迅速的一種方法，在胃鏡檢查同時(shí)進(jìn)行，敏感性和特異性分別達(dá)91％和100％，數(shù)分鐘即可做出診斷。檢查結(jié)果與直接涂片法、分離培養(yǎng)法、組織病理結(jié)果一致或近似�；顧z標(biāo)本的尿素酶活性主要與感染的數(shù)量多少有關(guān)，量少時(shí)可能造成假陰性反應(yīng)，而其它產(chǎn)生尿素酶的細(xì)菌也可能造成假陽性。但仍不失為一種最初檢測Hp感染的有效手段。
2 細(xì)菌學(xué)檢測
2.1 細(xì)菌培養(yǎng)
胃粘膜組織的細(xì)菌培養(yǎng)是診斷Hp感染的最可靠方法，往往做為驗(yàn)證其他檢測手段的“金標(biāo)準(zhǔn)”。但不少因素可能會影響Hp的培養(yǎng)而致假陰性。如：胃粘膜組織中的Hp數(shù)量過少，細(xì)菌繁殖能力差等。
2.2 活檢標(biāo)本切片染色
將胃粘膜組織標(biāo)本用100％福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋、切片染色、染色的方法有很多種，主要有Warthin－Starry（WS)染色，改良Gitmsa染色，Gresyfast染色，阿的平染色，HE和熒光染色，其中WS染色效果最好，特異性和敏感性幾乎均達(dá)100％。但該法繁瑣費(fèi)時(shí)，且需一定技術(shù)，HE染色細(xì)菌清晰易辨，既可供組織學(xué)診斷用，又可檢查Hp。吖啶橙熒光染色，Hp易辨認(rèn)，且方法簡單、快速，尤其在Hp量少時(shí)優(yōu)于WS和Giemsa染色，不易漏診。
2.3 直接涂片染色
Pinlard用相差微鏡直接檢查涂于玻璃片上的胃粘膜Hp，敏感性達(dá)100％。有人用吖啶橙進(jìn)行染色，然后用熒光量微鏡觀察，診斷快速有效。還有人用單克隆抗體進(jìn)行免疫熒光染色，可提高特異性，特別是對形態(tài)不典型的Hp。
3 13C、14C呼吸試驗(yàn)
呼吸試驗(yàn)的原理是基于Hp在體內(nèi)產(chǎn)生大量的尿素酶，困此若給感染Hp的患者口服同位素標(biāo)記的碳的尿素溶液，則尿素被分解后產(chǎn)生的同位素標(biāo)記二氧化碳從肺呼出。可收集呼氣樣本，用液體閃爍計(jì)數(shù)器或用氣體同位素質(zhì)譜議檢測同位素標(biāo)記CO2的量，檢測Hp的敏感性和特異性分別達(dá)100％和88％，Hp清除后則呼出減少或消失。根據(jù)標(biāo)記物的不同，分為13C和14C呼吸試驗(yàn)。呼吸試驗(yàn)具有快速、可靠、安全、無痛苦的優(yōu)點(diǎn)。國外已將其作為追蹤觀察治療效果的最好辦法，且適合于大規(guī)模流調(diào)，它優(yōu)于血清學(xué)的一個(gè)明顯特征是表明目前是否有Hp感染，而是是曾否感染過。
4 血清免疫學(xué)方法
4.1 ELISA法
通過測定血清中的Hp抗體來檢測Hp感染，其方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA)、補(bǔ)體結(jié)合法、免疫印跡法（immunoblotting)和血凝試驗(yàn)，其中以ELISA法最為常用。但在進(jìn)行ELSIA試驗(yàn)時(shí)，最重要的是抗原選擇，較早期的一些抗原是應(yīng)用全菌或全菌超聲粉碎物作抗原，這種抗原制備含有多種菌體及鞭毛蛋白。其中有些物質(zhì)或不具備抗原性功者為其它菌種的共有結(jié)果是試驗(yàn)的敏感性雖高，但缺乏特異性，從而影響試驗(yàn)結(jié)果的判斷。要提高ELISA方法的敏感性和特異性，則需要對抗原進(jìn)一步純化。用Hp多種抗原制品的混合物純化尿素酶組分，抗原則可獲較高的特異性與敏感性。陳晶晶等采用ELISA法對676份人血清進(jìn)行了抗HpU抗體的檢測，以特異性抗HpU抗體的含量為66μg/l標(biāo)準(zhǔn)陽性血清做為判斷標(biāo)準(zhǔn)，其敏感性及特異性各為98％和96％，用純化尿素酶做為抗原應(yīng)用于ELISA試驗(yàn)屬于第二代血清學(xué)診斷抗原，適用于血清流行病學(xué)調(diào)查，還可用于藥物治療效果的觀察和篩選消化不良患者。
為提高血清學(xué)方法診斷Hp感染的敏感性和特異性，潘志軍等用免印跡法檢測血中抗HpIgG，結(jié)果敏感性為100％，特異性為90％，陽性預(yù)測值陰性預(yù)測值分別為97.2％和100％。與空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌無明顯交叉反應(yīng)。因此，目前一般認(rèn)為，免疫印跡法比ELISA方法具有更高的敏感性和特異性，可用來確診其他血清試驗(yàn)結(jié)果，尤其是對處于界值附近的患者血清。
4.2 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR)
該技術(shù)的敏感性比寡核甙酸探針增加了100倍，可以檢出至少100個(gè)Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已經(jīng)測出，為PCR特異性引特的選擇提供了依據(jù)。胡伏蓮等用PCR檢測了96例因上消化道癥狀而行胃鏡檢查的患者，結(jié)表明PCR檢查的Hp陽性率高于常規(guī)檢查法的Hp陽性率。另外還對17例經(jīng)不同方案治療后用常規(guī)方法檢查而被認(rèn)為Hp被根除的病人，用PCR檢查發(fā)現(xiàn)4例Hp陽性。以往對一些用常規(guī)方示未能檢了實(shí)際上還存在Hp的病人，誤認(rèn)為Hp被根除而放棄不徹底，而不是新菌株再感染。所以采用PCR技術(shù)能準(zhǔn)確評估治療后的Hp是否被真正根除，這對于指導(dǎo)Hp感染的治有十分重要的臨床意義。PCR的另一優(yōu)點(diǎn)是可以成功地檢出人胃粘膜以外的用常規(guī)方法不能檢出Hp，包括胃液、唾液、牙菌斑及糞便中的Hp。
4.3 PCR單鏈構(gòu)象多態(tài)技術(shù)（PCR—SSCP)
北醫(yī)大一院開展了應(yīng)用Hp基因組DNA203bpPCR產(chǎn)物的單鏈構(gòu)象多態(tài)（SSCP)分析和鑒定臨床分離的Hp菌株方法。該方法簡單快速、敏感性強(qiáng)、圖形簡單、易于比較。PCR—SSCP不僅可以用于大規(guī)模的Hp流行病學(xué)調(diào)查，而且能準(zhǔn)確評估治療后再現(xiàn)的Hp是復(fù)發(fā)還是再感染。
中山醫(yī)大一院應(yīng)用隨機(jī)引物擴(kuò)增的DNA多態(tài)指模技術(shù)鑒別不同菌株的Hp重復(fù)性良好。
5 15N尿素的排泄試驗(yàn)
上海二醫(yī)大新華醫(yī)院根據(jù)呼吸試驗(yàn)類似的原理，讓受試者口服穩(wěn)定性同位素15N標(biāo)記的尿素，然后測定尿素中排出的15NH3來判斷胃內(nèi)Hp的實(shí)際感染狀況，其敏感性為96％。
綜上所述，做為科學(xué)研究最好能同時(shí)使用幾種檢查方法，至少應(yīng)選擇其中兩種，取長補(bǔ)短，提高準(zhǔn)確性。由于Hp在胃內(nèi)分布不均勻，提倡多點(diǎn)取材，治療后長期隨訪，國外建議將連續(xù)二次呼吸試驗(yàn)陰性加上抗Hp抗體滴度進(jìn)行性下隆持續(xù)1a以上做為“金標(biāo)準(zhǔn)”。
劉志國1 龔福萍2 郭建學(xué)3 馬俊文4
1黑龍江省農(nóng)場總局機(jī)關(guān)醫(yī)院（佳木斯 154002)
2黑龍江省856農(nóng)場醫(yī)院（虎林 158418)
3黑龍江省農(nóng)場總局衛(wèi)生局（佳木斯 154002)
4佳木斯醫(yī)學(xué)院（佳木斯 154003)
