血吸蟲病免疫
1．血吸蟲抗原 血吸蟲是一個多細(xì)胞結(jié)構(gòu)的個體，有復(fù)雜的生活史，因而使抗原的結(jié)構(gòu)和蟲種、期甚至株的抗原表達(dá)復(fù)雜性。血吸蟲在宿主體內(nèi)的三個不同階段即童蟲、成蟲和蟲卵，每個時期的分泌物、排泄物均可作為抗原物質(zhì)引起宿主一系列的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。因此，研究和了解血吸蟲抗原及其與宿主的相互作用是血吸蟲病免疫學(xué)的一個重要部分。
血吸蟲抗原種類很多，根據(jù)不同研究目的將血吸蟲抗原加以分類，如依抗原的來源、抗原的性質(zhì)和誘發(fā)宿主免疫應(yīng)答的功能等來分類。近年來實驗研究已證明蟲卵抗原和腸相關(guān)抗原是有用的診斷抗原，并且也是誘導(dǎo)宿主組織免疫病理變化的重要因子。另外，血吸蟲表面抗原可能是誘導(dǎo)保護(hù)性免疫物質(zhì)，因此，對血吸蟲表面抗原的研究不僅可以了解血吸蟲病抗感染免疫力，而且對探討血吸蟲怎樣逃避宿主免疫攻擊都是很必要的。
2．伴隨免疫 動物實驗觀察伴隨免疫是初次感染的成蟲引起的、是針對再感染的免疫力。在伴隨免疫中，初次感染的成蟲能逃避宿主的免疫攻擊，因而能在已建立免疫應(yīng)答的宿主血管內(nèi)存活和產(chǎn)卵，這種現(xiàn)象稱免疫逃避（immune evasion)。這是由于蟲體表面結(jié)合有宿主的抗原，逃避了宿主免疫系統(tǒng)的識別，稱抗原偽裝（antigenic disguise)。因此，伴隨免疫是部分免疫，反應(yīng)了血吸蟲對宿主的適應(yīng)性，是一種宿主免疫效應(yīng)與血吸蟲逃避宿主免疫之間復(fù)雜的動態(tài)平衡的結(jié)果。經(jīng)流行病學(xué)的調(diào)查和大量證據(jù)，一般認(rèn)為人體感染血吸蟲也存在伴隨免疫。
3．免疫效應(yīng)機(jī)制 關(guān)于血吸蟲感染中獲得性免疫效應(yīng)機(jī)制的了解，一方面來自各種實驗動物模型的研究，另一方面取自于體外免疫效應(yīng)機(jī)制的研究。影響血吸蟲免疫效應(yīng)機(jī)制的因素很多，并且不同宿主的抗血吸蟲的免疫機(jī)制是不相同的，迄今尚無一種實驗動物模型能完全反應(yīng)人體感染時免疫力產(chǎn)生的情況。現(xiàn)有資料提示：參與免疫效應(yīng)的成分有抗體、補(bǔ)體和細(xì)胞；宿主獲得性免疫主要是直接作用于再次感染侵入的童蟲；在宿主體內(nèi)被清除的部位因動物的種而異，主要見于皮膚和肺；這種免疫力通常有種的特異性，并且免疫力是不完全的，有一部分攻擊感染的蟲體可逃避免疫攻擊，在宿主體內(nèi)完成發(fā)育。
近年來，對曼氏血吸蟲和埃及血吸蟲患者的研究，包括流行病學(xué)調(diào)查及治療后對再感染的抗力的研究，表明人體感染這兩種血吸蟲后，可以產(chǎn)生對再感染的免疫力，并且是年齡依賴的，10歲以下的兒童對再感染的免疫力低，隨著年齡增大表現(xiàn)出對再感染的抵抗能力增強(qiáng)，這種免疫力是緩慢形成的，不完全的。
實驗研究還證實了細(xì)胞毒性T細(xì)胞無殺蟲活性；而抗體與細(xì)胞協(xié)同產(chǎn)生的針對童蟲的細(xì)胞毒作用即抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC)是主要的殺傷童蟲的效應(yīng)機(jī)制。殺傷童蟲的過程，開始是曼氏血吸蟲早期童蟲的表面抗原與大鼠感染血清中的IgG2a或IgE結(jié)合，而后嗜酸性粒細(xì)胞的Fc受體與抗體的Fc片段結(jié)合，嗜酸性粒細(xì)胞與蟲體表面密切接觸，脫顆粒后，自顆粒中釋放出主要堿性蛋白（major basic protein，MBP)，分布于蟲體表面，損傷皮層、殺死蟲體。
實驗診斷
血吸蟲病的診斷包括病原診斷和免疫診斷兩大部分，具體方法詳見附錄。
1．病原診斷 從糞便內(nèi)檢查蟲卵或孵化毛蚴以及直腸粘膜活體組織檢查蟲卵。
⑴直接涂片法：重感染地區(qū)病人糞便或急性血吸蟲病人的粘液血便中�？蓹z查到血吸蟲蟲卵，方法簡便，使蟲卵檢出率低。
�、泼史趸ǎ涸斠姼戒�。可以提高陽性檢出率。在現(xiàn)場進(jìn)行大規(guī)模糞便檢查時，為了提高功效，產(chǎn)生了許多改良方法，如尼龍袋集卵法，可縮短集卵時間，降低損耗，便于流動性普查；為了便于觀察毛蚴，可采用塑料杯頂管孵化法，毛蚴集中，便于觀察，檢出率較高。為了提高糞便檢查效果，常常需要連續(xù)送檢糞便3次。
�、嵌客该鞣ǎ河米餮x蟲卵計數(shù)。常用的計算方法為kato厚片法�？蓽y定人群感染情況，并可考核防治效果。
�、戎蹦c粘膜活體組織檢查：慢性及晚期血吸蟲病人腸壁組織增厚，蟲卵排出受阻，故糞便中不易查獲蟲卵，可應(yīng)用直腸鏡檢查。血吸蟲病人腸粘膜內(nèi)沉積的蟲卵，其中有活卵、變性卵和死卵。對未治療病人檢出的蟲卵，不論死活均有參考價值；對有治療史病人，如有活卵或近期變性卵，表明受檢者體內(nèi)有成蟲寄生。若為遠(yuǎn)期變性卵或死卵，則提示受檢者曾經(jīng)有過血吸蟲感染。目前流行區(qū)血吸蟲病人大多已經(jīng)過一次或多次治療，檢查到活卵的病例很少，并且此方法有一定的危險性，故不適于大規(guī)模應(yīng)用。
2．免疫診斷
�、牌�(nèi)試驗（intradermal test，IDT)：一般皮內(nèi)試驗與糞檢蟲卵陽性的符合率為90％左右，但可出現(xiàn)假陽性或假陰性反應(yīng)，與其他吸蟲病可產(chǎn)生較高的交叉反應(yīng)；并且病人治愈后多年仍可為陽性反應(yīng)。此法簡便、快速、通常用于現(xiàn)場篩選可疑病例。
�、茩z測抗體：血吸病人血清中存在特異性抗體，包括IgM、IgG、IgE等，如受檢者未經(jīng)病原治療，而特異性抗體呈陽性反應(yīng)，對于確定診斷意義較大；如已經(jīng)病原治療，特異性抗體陽性，并不能確定受檢者體內(nèi)仍有成蟲寄生，因治愈后，特異性抗體在體內(nèi)仍可維持較長時間。目前檢測抗體的血吸蟲病血清學(xué)診斷方法很多，常用的有以下幾種（詳見附錄)。
1)環(huán)卵沉淀試驗（circunoval precipitin test，COPT)：通常檢查100個蟲卵，陽性反應(yīng)蟲卵數(shù)（環(huán)沉率)等于或 大于5％時，即為陽性。糞檢血吸蟲卵陽性者，COPT陽性率平均為97.3％（94.1%～100%)。健康人假陽性率為3.1％，與肺吸蟲病、華支睪吸蟲病可出現(xiàn)交叉反應(yīng)�；颊哂行е委熀驝OPT陰轉(zhuǎn)較慢。若血吸蟲病人距末次治療時間已3～5年，而COPT環(huán)沉率為3％或3％以上者，可結(jié)合臨床表現(xiàn)考慮給予重復(fù)治療。目前在基本消滅血吸蟲病地區(qū)，已廣泛應(yīng)用COPT作為綜合查病方法之一。為了操作規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化，并適合于現(xiàn)場應(yīng)用，對COPT方法作了許多改良，如塑料管法，雙面膠紙法等。
2)間接紅細(xì)胞凝集試驗（indirect haemagglutination test，IHA)：糞檢血吸蟲蟲卵陽性者與IHA陽性符合率為92.3%～100%，正常人假陽性率在2％左右，與肺吸蟲、華支睪吸蟲、旋毛蟲感染者可出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。IHA操作簡便，用血量少，判讀結(jié)果快，目前國內(nèi)已廣泛應(yīng)用。
3)酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)：此試驗具有較高的敏感性和特異性，并且可反應(yīng)抗體水平，陽性檢出率在95％～100％，假陽性率為2.6％，病人在吡喹酮治療后半年至一年有50％至70％轉(zhuǎn)為陰性。此試驗已應(yīng)用于我國一些血吸蟲病流行區(qū)的查病工作。近年來，在載體、底物及抗原的純化方面都作了改良，如快速－ELISA，硫酸銨沉淀抗原－ELISA等。
4)免疫酶染色試驗（immunoenzymic staining test，IEST)：見附錄。
在檢測血吸蟲特異抗體的方法中，尚有許多種，如間接熒光抗體試驗（IFAT)、膠乳凝集試驗（LA)、酶標(biāo)記抗原對流免疫電泳（ELACIE)等，這些方法有它們各自的優(yōu)點。
值得提出，近年來隨著科技的發(fā)展，某些高科技和新方法被逐步引用到血吸蟲病的診斷和研究領(lǐng)域。例如免疫印漬技術(shù)(immunoblotting)又稱（western blot)，是在蛋白質(zhì)凝膠電泳和固相免疫測定的基礎(chǔ)上建立的一種具有分子水平的免疫學(xué)新技術(shù)，有力推動了血吸蟲病血清學(xué)診斷方法的進(jìn)展，它不但能對血吸蟲抗原的限定組分蛋白進(jìn)行分析和鑒定，而且能用以診斷病人和區(qū)分血吸蟲病不同病期的新型血清學(xué)診斷方法。又如雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體（McAb)的應(yīng)用。采用特異的McAb純化血吸蟲抗原，用于血吸蟲病血清學(xué)診斷；也可應(yīng)用McAb檢測循環(huán)抗原，為血吸蟲病診斷提供新的途徑。
⑶檢測循環(huán)抗原：由于治療后抗體在宿主體內(nèi)存留較長時間，其陽性結(jié)果往往不能區(qū)分現(xiàn)癥感染和既往感染，也不易于評價療效。循環(huán)抗原是生活蟲體排放至宿體內(nèi)的大分子微粒，主要是蟲體排泄、分泌或表皮脫落物中具有抗原特性，又可為血清免疫學(xué)試驗所檢出。從理論上講，CAg的檢測有其自身的優(yōu)越性，它不僅能反映活動性感染，而且可以評價療效和估計蟲荷。
在感染血吸蟲宿主體內(nèi)CAg的種類較多，目前可檢出比較重要的3類游離循環(huán)抗原，即腸相關(guān)抗原（GAA)、膜相關(guān)抗原（MAA)和可溶性蟲卵抗原（SEA)。在檢測方法上，采用檢測不同靶CAg的探針，包括抗血吸蟲抗原不同表位──單克隆抗體、組合單克隆抗體以及多克隆抗體等。在檢測的具體方法有：班點ELISA（dot-ELISA)，雙抗體夾心ELISA等。近年來，國內(nèi)、外學(xué)者對CAg進(jìn)行了多方面的研究、進(jìn)展很快，并已取得了不少可供參考的結(jié)果。但是，要過渡到臨床實用階段仍有許多問題和影響因素急待探討與解決，如目前檢測的方法有待改進(jìn)和規(guī)范化；免疫復(fù)合物的形成和抗獨特型抗體存在對檢測結(jié)果的影響；循環(huán)抗原在感染宿主體內(nèi)消長規(guī)律及治療后的轉(zhuǎn)歸等。
�、染C合查�。荷鲜龈鞣N檢查方法各有優(yōu)缺點，如果將幾種方法合理搭配，由簡到繁，綜合查病，則可收到事半功倍的效果。一般在重流行區(qū)，糞檢尚能查出一定比例病人的地方，仍以糞檢為主，輔以其他方法檢查；而在基本消滅血吸蟲病地區(qū)，則應(yīng)以免疫診斷為主，取得多項數(shù)據(jù)，綜合判斷。
