五、免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果的判斷
對(duì)免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果的判斷應(yīng)持科學(xué)的慎重態(tài)度，要準(zhǔn)確判斷陽(yáng)性和陰性，排除假陽(yáng)性和假陰性結(jié)果，必須嚴(yán)格對(duì)照實(shí)驗(yàn)，對(duì)新發(fā)現(xiàn)的陽(yáng)性結(jié)果，除有對(duì)照試驗(yàn)結(jié)果之外，應(yīng)進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，要求用幾種方法進(jìn)行驗(yàn)證，如用PAP法陽(yáng)性，可再用ABC法驗(yàn)證。必須學(xué)會(huì)判斷特異性染色和非特異性染色，對(duì)初學(xué)者更為重要，否則會(huì)得出不科學(xué)的結(jié)論。特異性染色與非特異性染色的鑒別點(diǎn)主要在于特異性反應(yīng)產(chǎn)物常分布于特定的部位，如胞漿內(nèi)，也有分布在細(xì)胞核和細(xì)胞表面的，即具有結(jié)構(gòu)性。特異性染色表現(xiàn)為在同一切片上呈現(xiàn)不同程度的陽(yáng)性染色結(jié)果。非特異性染色表現(xiàn)為無(wú)一定的分布規(guī)律，常為某一部位成片的均勻著色，細(xì)胞和周圍的結(jié)締組織均無(wú)區(qū)別的著色，或結(jié)締組織呈現(xiàn)很強(qiáng)的染色。非特異性染色常出現(xiàn)在干燥切片的邊緣，有刀痕或組織折疊的部位。在過(guò)大的組織塊，中心固定不良也會(huì)導(dǎo)致非特異性染色。有時(shí)可見(jiàn)非特異性染色和特異性染色同時(shí)存在，由于過(guò)強(qiáng)的非特異性染色背景不但影響對(duì)特異性染色結(jié)果的觀察和記錄，而且令人對(duì)其特異性結(jié)果產(chǎn)生懷疑。
�。ㄒ�)陽(yáng)性細(xì)胞的染色特征
免疫細(xì)胞化學(xué)的呈色深淺可反映抗原存在的數(shù)量，可作為定性、定位和定量的依據(jù)。
�。�1)陽(yáng)性細(xì)胞染色分布有三種類型：①胞漿；②細(xì)胞核；③細(xì)胞膜表面。大部分抗原見(jiàn)于細(xì)胞漿，可見(jiàn)于整個(gè)胞漿或部分胞漿。
（2)陽(yáng)性細(xì)胞分布可分為煙性和彌漫性。
�。�3)由于細(xì)胞內(nèi)含抗原量的不同，所以染色強(qiáng)度不一。如果細(xì)胞之間染色強(qiáng)度相同，常提示其反應(yīng)為非特異性。
�。�4)陽(yáng)性細(xì)胞染色定位于細(xì)胞，且與陰性細(xì)胞相互交雜分布；而非特異性染色常不限于單個(gè)細(xì)胞，而是累及一片細(xì)胞。
（5)切片邊緣、刀痕或皺折區(qū)域，壞死或擠壓的細(xì)胞區(qū)，膠原結(jié)締組織等，常表現(xiàn)為相同的陽(yáng)性染色強(qiáng)度，不能用于判斷陽(yáng)性。
�。ǘ�)染色失敗的幾種原因
�。�1)所染的全部切片均為陰性結(jié)果：包括陽(yáng)性對(duì)照在內(nèi)，全部呈陰性反應(yīng)，原因可能是：①染色未嚴(yán)格按操作步驟進(jìn)行；②漏加一種抗體，或抗體失效；③緩沖液內(nèi)含疊氮化鈉，抑制了酶的活性；④底物中所加H2O2量少或失效；⑤復(fù)染或脫水劑使用不當(dāng)。
（2)所有切片均呈弱陽(yáng)性反應(yīng)：①切片在染色過(guò)程中抗體過(guò)濃，或干燥了；②緩沖液配制中未加氯化鈉和pH值不準(zhǔn)確，洗滌不徹底；③使用已變色的呈色底物溶液，或呈色反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；④抗體溫育的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；⑤H2O2濃度過(guò)高，呈色速度過(guò)快；⑥粘附劑太厚。
�。�3)所有切片背景過(guò)深；①未用酶消化處理切片；②切片或涂片過(guò)厚；③漂洗不夠；④底物呈色反應(yīng)過(guò)久；⑤蛋白質(zhì)封閉不夠或所用血清溶血；⑥使用全血清抗體稀釋不夠。
（4)陽(yáng)性對(duì)照染色良好，檢測(cè)的陽(yáng)性標(biāo)本呈陰性反應(yīng)，固定和處理不當(dāng)是最常見(jiàn)的原因。
對(duì)于陽(yáng)性結(jié)果的定量判斷常規(guī)方法是根據(jù)呈色深淺和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)量分類計(jì)數(shù)，以（-)、+、++、+++等分級(jí)和計(jì)數(shù)統(tǒng)計(jì)。現(xiàn)在已采用圖象分析計(jì)量，本書第九章 將詳細(xì)敘述這種使免疫細(xì)胞化學(xué)的定量成為可能的先進(jìn)的形態(tài)定量方法。另外，第十章 將詳細(xì)途述另一種先進(jìn)的免疫細(xì)胞化學(xué)計(jì)量分類術(shù)－流式細(xì)胞光度計(jì)技術(shù)。
