抗獨特型抗體及其在醫(yī)學研究中的應用

　　針對外來抗原的抗體分子（Ab1)可變區(qū)上Id可刺激機體產生相應的抗Id抗體（Ab2)。Ab2β具有與外來抗原相似的氨基酸排列順序或空間構型，它能夠在體內模擬始動抗原的作用。應用Ab2β的這一特性，可有目的地制備Ab2β，將其作為抗原的替代物用于基礎和臨床醫(yī)學研究。

　　一、抗獨特抗體的制備

　�。ㄒ�)抗原及其用量的選擇

　　由于Ab2是針對Ab2Id的抗體，因而制備Ab2時應選擇適當的Ab1作為免疫原。所用抗原的用量依照給予抗原的種類、次數、途徑以受體動物的耐受性而有所不同。一般來說，當受體動物為小鼠時，常用Ab1最為50-200μg；若受體動物為家兔時，使用的Ab1量可達100-200μg。

　　（二)免疫動物的選擇

　　抗獨特型抗體可在自身體內、同類系、同種異體以及異種動物中誘導產生，因此在制備抗獨特型抗體時可根據不同情況選用同類系、同種異體或異種動物（表9-1)。從制備技術上講，可以制備單克隆抗Id和多克隆（免疫血清)抗Id。

表9-1 不同宿主免疫系統識別的抗體決定簇及抗獨特型抗體的制備

　　1.同類系動物　用某一種抗原免疫某一品系的動物，分離純化的Ab1再免疫相同品系的另外一只動物，可獲得抗獨特型體。例如Uytdegaag等將Ⅱ型脊髓灰質炎病毒免疫BALB/c小鼠，經雜交瘤技術制備了單克隆抗體（Ab1),再用Ab1免疫BALB/c小鼠，制備了單克隆Ab2。

　　2.同種異型動物　Seto等從一只品系為a3b4家兔血清中純化出IgG作為Ab1，然后免疫B/J品系家兔，得到了含有Ab2的免疫血清。用此方法制備的抗血清中，除了含有抗Id外，還含有抗同種異型決定簇的抗體。

　　3.異種動物　例如用人IgM作為Ab1免疫小鼠制備單克隆Ab2。由異種動物免疫制備的Ab2血清中，除抗Id外還含有抗同種型的抗體。

　�。ㄈ�)抗獨特型抗體的檢測

　　抗Id抗體的鑒定至關重要。通常采用免疫學檢測方法如ELISA、RIA、免疫熒光和中和試驗等，可根據具體條件和需要加以選用�？笽d的鑒定必須設置充分的對照，確保檢測結果的可靠性。例如，在鑒定小鼠源性抗原特異性人IgM抗獨特型抗體時，用正常人IgM作為對照。將Ab1（抗原特異性人IgM)包被微孔板，然后加檢測樣品（小鼠源性抗Id)，再加抗鼠的標記抗體，為了克服非特異性鼠抗人IgM同種型Ig造成的假陽性，同時用非特異性人IgM包被微板作為對照（圖9-9)。當試驗孔為陽性、對照孔為陰性時可基本確定為抗Id抗體。

圖9-9 用ELISA間接法檢測鼠源性單克隆抗Id示意圖

　　二、抗獨特型抗體在醫(yī)學中的應用

　　抗獨特型抗體不僅對于免疫應答調節(jié)的理論研究具有重要意義，而且在傳染性疾病的預防、自身免疫性疾病發(fā)病機理研究和惡性腫瘤的治療等應用研究中也具有重要的價值。

　　（一)抗獨特型抗體與疫苗

　　抗獨特型抗體中Ab2β作為抗原的模擬物，可代替病原體的抗原，誘導機體產生抗病原體的特異性免疫應答，即所謂抗獨特型疫苗（anti-idiotype vaccine)。目前，抗獨特型疫苗研究仍處于動物實驗研究階段，疫苗的范圍主要有病毒、細菌和原蟲等引起的傳染病（表9-2)。

　　1.抗病毒的抗獨特型疫苗　針對病毒感染的抗獨特型疫苗是近年來較活躍的研究領域。Reagan將狂犬病毒糖蛋白特異的單克隆抗體免疫動物，制備出抗Id抗體，將這些抗體注射小鼠后，可誘導出具有病毒特異性中和活性的抗體應答。Kennedy等用抗HBsAg抗體制備出抗獨特型抗體，經親和層析純化后注射于BALB/c小鼠，誘導產生針對HBsAg的體液免疫應答。

　　Uytdehaag等用對Ⅱ型脊隨灰質炎病毒特異的保護性單克隆抗體（Ab1)免疫BALB/c小鼠,制備出單克隆Ab2，用Ab2免疫BALB/c小鼠后，可誘導出Ab3，產生抗脊髓灰質炎病毒的保護性免疫，這種單克隆Ab2可用于預防Ⅱ型脊髓灰質炎病毒的感染。Tanaka等在BALB/c小鼠中用抗新城疫病毒（NDV)血凝素的抗體誘導出抗Id抗體，在無病毒抗原存在的情況下，這種抗Id抗體可刺激小鼠產生抗NDV抗體。Lathey用單純皰疹病毒（HSV)糖蛋白D特異的McAb制備了抗Id抗體，并在小鼠中誘發(fā)對HSV的免疫應答。用人工合成HIV包膜抗耕牛的735-752氨基酸段的多肽免疫黑猩猩制得Ab1，再用Ab1免疫家兔制備Ab2，將Ab2免疫小鼠獲得Ab3，實驗表明，Ab3能與HIV多肽抗原發(fā)生特異性結合。

圖9-10 HBsAg抗Id的實驗研究（Kennedy,1984)

　　2.抗細胞菌和原蟲的抗獨特型疫苗　抗Id抗體也可用于誘導針對細菌和原蟲的保護性免疫應答。例如，用Ab2誘導動物針對肺炎球菌、大腸桿菌（K13)、血吸蟲和羅德西亞錐蟲等病原體的保護性免疫。其Ab2的制備和研究方法與病毒性抗Id疫苗研究類似。

　　抗Id作為疫苗有以下優(yōu)點：（1)不含有傳染性物質；（2)可大量制備抗Id的McAb；（3)某些保護性抗原決定簇為碳水化合物，不能用DNA重組技術獲得，而某些抗Id可模擬碳水化合物抗原決定簇；（4)能誘導比滅活病毒更為有效的T細胞應答；（5)誘導抗原決定簇特異性的抗Id疫苗。應該看到，抗Id疫苗的免疫應答水平一般較低，大劑量鼠源性免疫球蛋白可能刺激機體產生抗異種蛋白的免疫反應以及過敏反應。因此，在臨床實際應用中，制備人源性抗Id疫苗，應該看到，抗Id疫苗的免疫應答水平一般較低，大劑量鼠源性免疫球蛋白可能刺激機體產生抗異種蛋白的免疫反應以及過敏反應。因此，在臨床實際應用中，制備人源性抗Id疫苗，提高抗Id疫苗的免疫原性，以及細胞工程和基因工程相結合等方面有待進一步深入研究。

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