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1 實(shí)驗(yàn)材料
1.1 主要試劑
脫氧膽酸鈉:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號F20070521；丙硫氧嘧啶:廣東華南藥業(yè)有限公司,批號070501；膽固醇:天津大茂化學(xué)試劑廠,批號20070518； 吐溫80:上海申宇醫(yī)藥化工有限公司,批號061201；1,2丙二醇:廣州化學(xué)試劑廠,批號2005/2031； TC試劑盒: 中生北控生物科技股份有限公司,批號070471； TG試劑盒:中生北控生物科技股份有限公司,批號071761。
1.2 藥物
復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊:1.74 g生藥/粒,由廣東藥學(xué)院藥物研究所提供；非諾貝特:法國利博尼制藥公司,批號:90383。
1.3 儀器
FA2104型上皿電子天平:上海精密科學(xué)儀器有限公司；TG16GA高速離心機(jī):上海安亭科學(xué)儀器廠；UV1800型紫外可見光光度計:北京瑞利分析儀器公司；DKS26型電熱恒溫水浴鍋:上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；顯微鏡: Olympus cx21。
1.4 動物
SPF級SD大鼠,由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,合格證號:2007A003。
2 方法
2.1 高脂乳劑的制備
制備方法根據(jù)文獻(xiàn)［5］報道方法加以改進(jìn)。取25 g豬油,加熱到100 ℃左右使其溶解,加入10 g膽固醇,攪拌至完全溶解;再加入1 g丙硫氧嘧啶和25 mL吐溫80,充分?jǐn)噭�。在另一燒杯中加入蒸餾水30 mL和 1,2丙二醇20 mL,加熱至60 ℃,加入脫氧膽酸鈉2 g,充分?jǐn)嚢柚敝寥芙�。將兩種溶液充分混勻,制成高脂乳劑。
2.2 動物分組
取60只SD大鼠,體質(zhì)量180～220 g,隨機(jī)分為6組,每組10只，即正常組、模型組、復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊高劑量組（6.4 g生藥/kg)、中劑量組（3.2 g生藥/kg)、低劑量組（1.6 g生藥/kg)和非諾貝特組（40 mg/kg)。除正常組自由攝取普通飼料外,其余組分別在此基礎(chǔ)上每天上午按10 mL/kg量灌胃給予高脂乳劑,4 h后各給藥組分別灌胃相應(yīng)藥物,正常組、模型組給予等量生理鹽水,連續(xù)給藥8周。
2.3 檢測指標(biāo)及檢測方法
2.3.1 肝指數(shù)和肝組織病理形態(tài)學(xué)檢查 末次給藥1 h后,脫臼處死大鼠,立即摘取肝臟,用冰生理鹽水清洗,濾紙吸干,用分析天平稱其濕重后,計算肝指數(shù)（肝指數(shù)=肝濕重/體質(zhì)量×100)。再在肝左葉取一塊3 cm×3 cm肝組織,用10％（φ)甲醛溶液固定,常規(guī)石蠟包埋、切片、HE染色,光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞脂肪變性程度。肝臟細(xì)胞脂肪變性按以下標(biāo)準(zhǔn)判斷 ［6］：低倍鏡觀察含脂滴細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)，二者比值劃分為0,<1/3,1/3～1/2,1/2～2/3,>2/3,相應(yīng)脂肪病變等級為（-)、（+)、（++)、（+++)、(++++),若含脂滴細(xì)胞數(shù)與總細(xì)胞數(shù)之比值>1/3即診斷為脂肪肝，其中占肝小葉1/3～1/2為輕度脂肪肝；占肝小葉1/2～2/3為中度脂肪肝；占肝小葉2/3以上或肝細(xì)胞彌漫脂肪變性呈魚網(wǎng)狀為重度脂肪肝醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站payment-defi.com。
2.3.2 肝臟脂質(zhì)測定 稱取相同部位肝臟組織0.5 g,并剪碎,用提取液(氯仿∶甲醇=1∶1體積比)制成勻漿后，提取液定容至5 mL,混勻。經(jīng)24 h震蕩抽提, 3 000 r/min離心5 min得上清液,分別采用氧化酶法、磷酸甘油酶法測定肝臟中TC、TG。
2.4 統(tǒng)計學(xué)處理
用SPSS 10.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計,數(shù)據(jù)以±s表示,各組間比較采用方差分析,等級數(shù)據(jù)用Ridit分析,P<0.05為差異有顯著性。
3 結(jié)果
3.1 復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊對非酒精性脂肪肝大鼠肝臟病理的影響
3.1.1 肉眼觀察 正常組大鼠肝臟外觀正常,顏色鮮紅,有彈性,被膜光滑,無病變跡象。模型組動物肝臟體積明顯增大,包膜緊張,邊緣變鈍,表面無光澤,呈局灶性黃白色變性灶,切面有明顯油膩感,呈奶黃色，呈典型脂肪變。復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊高、中劑量組較模型組有明顯改善,肝臟顏色、質(zhì)地均接近正常。復(fù)方貞術(shù)調(diào)脂膠囊低劑量組較模型組有所改善,肝臟顏色偏黃,有一定光澤度,腫脹程度較模型組輕,切面有油膩感。非諾貝特組體積增大,質(zhì)地較脆。
3.1.2 光鏡觀察 正常組：大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)明顯,匯管區(qū)清晰可見,肝細(xì)胞索呈放射狀排列,肝竇正常,中央靜脈內(nèi)皮細(xì)胞清晰可見,肝細(xì)胞形態(tài)規(guī)則,呈多邊形整齊排列,胞漿染成紅色,均勻。肝細(xì)胞核位于細(xì)胞中央,胞核清晰。肝細(xì)胞無變性。模型組：肝組織有明顯脂肪變性和水樣變性，肝小葉結(jié)構(gòu)不明顯,肝索完全解離,肝竇狹窄或消失,中央靜脈擴(kuò)張,內(nèi)皮細(xì)胞缺失。肝細(xì)胞腫大,細(xì)胞核被擠壓變形,部分嚴(yán)重者脂滴融合,將細(xì)胞核擠到細(xì)胞一邊、部分消失。胞漿染色不均勻,部分消失,充滿大量脂肪空泡。間質(zhì)組織中有炎癥反應(yīng),局部有淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞的浸潤。
