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1.2 方法 將固定于70%乙醇中的腫瘤組織標(biāo)本經(jīng)0.9氯化鈉溶液沖洗后，放在150目的銅網(wǎng)上，下置一平皿，用眼科剪刀將組織剪碎，用眼科鑷子輕搓組織，邊搓邊用0.9氯化鈉溶液沖洗，經(jīng)300目尼龍網(wǎng)濾除細(xì)胞團(tuán)塊，收集濾下的細(xì)胞懸液。1 000 r/min，離心5 min，棄上清;加入1 ml PBS將細(xì)胞懸浮計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/ml時，此懸浮液為單分散細(xì)胞懸液。將單細(xì)胞懸液分裝3管(陰性、陽性對照組及實(shí)驗(yàn)組)，實(shí)驗(yàn)組加入雄激素受體抗體100 μl，充分振搖，36℃避光反應(yīng)30 min;實(shí)驗(yàn)組及陽性對照組各加入二抗100 μl，避光反應(yīng)，然后進(jìn)行FCM檢測。兔抗多克隆雄激素受體抗體購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。
1.3 結(jié)果判定 AR經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測后所得結(jié)果為具體數(shù)值，無需判定。對標(biāo)本組織同時行免疫組化檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)為：ER、PR陽性表達(dá)為細(xì)胞胞核呈棕黃色顆粒，Her2陽性染色位于胞膜，陽性標(biāo)準(zhǔn)為胞膜染色或胞膜、胞漿同時染色。每張切片中陽性細(xì)胞<25%或無陽性細(xì)胞為陰性，陽性細(xì)胞>25%為陽性。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以±s表示多組間比較用方差分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用直線相關(guān)和等級相關(guān)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 AR在乳腺癌中的表達(dá) AR值最小值為291.79，最大值為512.49，平均為(361±58)。
2.2 乳腺癌組織中的AR表達(dá)與臨床特點(diǎn)、病理參數(shù)的相關(guān)性 60例乳腺癌組織中AR的不同表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、月經(jīng)情況、ER、PR、HER2比較情況見表1。我們得到以下結(jié)果：AR的表達(dá)與腫瘤大小有關(guān)聯(lián)，腫瘤≤2 cm者，雄激素受體表達(dá)較高(427±42)，與2～5 cm腫瘤及﹥5 cm腫瘤(343±32，314±29)相比差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);其表達(dá)與組織學(xué)分級有關(guān)聯(lián)，組織學(xué)分級Ⅰ級者雄激素受體表達(dá)值較高(447±50)，與Ⅱ、Ⅲ級者(357±31，322±38)相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。與ER蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.347，P=0.000)。與TNM分期、絕經(jīng)與否，PR、Her2及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況不相關(guān)(P>0.05)。表1 AR表達(dá)與乳腺癌臨床特點(diǎn)、病理指標(biāo)的關(guān)系
3 討論
AR屬于核受體超家族成員，主要存在于靶細(xì)胞的核內(nèi)。人AR基因定位于X染色體長臂(Xq11～12)，含有8個外顯子和7個內(nèi)含子，全長約90 kb，編碼918個氨基酸。AR有4個功能結(jié)構(gòu)域，分別是低保守的氨基端結(jié)構(gòu)域、高保守的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域、鉸鏈區(qū)與高保守的羧基端配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，不同的結(jié)構(gòu)域有不同的功能[7]。AR調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄活化主要是通過氨基端和羧基端兩個結(jié)構(gòu)域來完成的醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站payment-defi.com。
本研究發(fā)現(xiàn)，AR表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級呈負(fù)相關(guān)。即腫瘤越小、組織學(xué)分級越低，AR的表達(dá)越高，我們的研究結(jié)果與Ogawa等[8，9]的研究一致。Ogawa等[8]應(yīng)用免疫組化法檢測227例原發(fā)性乳腺癌中AR的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)越小的腫瘤AR陽性率越高(P=0.045)，Monifar等[9]應(yīng)用抗AR單克隆抗體對乳腺癌標(biāo)本進(jìn)行檢測發(fā)現(xiàn)AR在Ⅰ級的腫瘤表達(dá)為88%，在Ⅱ級和Ⅲ級的腫瘤中分別為71%和47%。表明AR的高表達(dá)可能預(yù)示腫瘤惡性程度較低。
我們的研究還發(fā)現(xiàn)，AR的表達(dá)與ER的陽性表達(dá)率呈正相關(guān)，即ER陽性者AR的表達(dá)高，與文獻(xiàn)報(bào)道相似[8,9]。Ogawa等[8]研究發(fā)現(xiàn)AR與ER表達(dá)相關(guān)(P=0.027)。Monifar等[9]的研究表明：90%分化Ⅰ級的侵襲性癌與55%分化Ⅱ級的侵襲性癌表現(xiàn)為ER+/AR+，而絕大多數(shù)分化Ⅲ級的侵襲性癌表現(xiàn)為ER/AR。因?yàn)槟壳耙话阏J(rèn)為ER的表達(dá)是預(yù)后良好與否的指標(biāo)，即ER陽性者預(yù)后較好，而AR的表達(dá)又與ER呈正相關(guān)，所以AR的高表達(dá)也可能預(yù)示著預(yù)后良好。國外文獻(xiàn)已有相關(guān)報(bào)道[4，10] 。Agrawal等[10]研究表明AR陽性者5年內(nèi)的局部復(fù)發(fā)率為22.6%(48/212)，陰性者的局部復(fù)發(fā)率為52.2% (144/276)。在所有局部復(fù)發(fā)患者中，AR陽性者所占比率為25%，明顯低于AR陰性者(占75%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.023)。Shippinger等[4]的研究也有相似發(fā)現(xiàn)，即AR陽性患者復(fù)發(fā)后的平均生存時間(21.89個月)高于AR陰性患者(11.99月)。我們的研究還需進(jìn)行長期隨訪，才能得出預(yù)后結(jié)論。我們的研究沒有發(fā)現(xiàn)AR與Her2、PR、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況和絕經(jīng)與否有關(guān)。
