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3.2 CVB感染心肌細胞的模式 CVB感染HeLa細胞后會出現(xiàn)明顯的細胞病變(CPE)，在CVB攻擊24 h～72 h內，被感染的HeLa細胞變圓、聚堆、固縮，最終漂浮在培養(yǎng)液中，腫脹死亡，表現(xiàn)為急性感染模式。
但是嗜心肌的CVB3m攻擊原代心肌細胞24 h之后，那些梭形、分裂旺盛的成纖維細胞表現(xiàn)出變圓、聚集等細胞病變，并在48 h后死亡脫落，而心肌細胞仍然貼壁生長，并保持博動，相比未感染病毒的心肌細胞，感染CVB3m的心肌細胞的搏動稍慢且不規(guī)則，個別細胞在病毒感染后保持博動長達10天以上。透射電鏡觀察可見，被感染的心肌細胞超微結構基本完好，線粒體變化明顯，線粒體膜部分破裂，線粒體嵴呈絮狀改變或者腫脹而大小不一，胞質內可見到晶格狀的病毒顆粒，呈黑色點狀排列。RT-PCR可從感染CVB3m的心肌細胞擴增到CVB3 5′-UTR。這些結果證實心肌細胞已經被CVB3m感染，但被感染的心肌細胞沒有表現(xiàn)出類似HeLa細胞的急性細胞病變效應。
pNI4含有CVB1全長cDNA，轉染HeLa細胞后可以轉錄出CVB1全長RNA基因組，并在細胞中復制增殖出大量完整CVB1病毒，我們將pNI4轉染原代培養(yǎng)心肌細胞，結果雖然可以通過RT-PCR檢測到CVB1 5′-UTR，卻不能看到細胞病變類似CVB3m攻擊HeLa細胞的表現(xiàn)。
檢測感染或轉染的心肌細胞培養(yǎng)液，可見心肌酶的水平和對照細胞相比有變化，說明CVB感染對心肌酶有一定的影響，具體機制還不清楚，有待進一步研究。
上述實驗證據說明，CVB感染心肌細胞的模式不同于感染其他組織類型的細胞，CVB在心肌細胞內復制，但不明顯破壞心肌細胞，不直接迅速殺死心肌細胞，心肌細胞的活動能力雖然有所下降，但是并沒有出現(xiàn)類似其他組織類型細胞的細胞病變，心肌細胞仍然保持搏動能力，說明CVB與心肌細胞處于共生狀態(tài)，表現(xiàn)為持續(xù)感染模式。
我們的CVB感染離體心肌細胞的結果支持心肌炎、心肌病的分子流行病學研究結果。在那些研究中，利用核酸雜交、核酸擴增、蛋白免疫技術可以在心肌炎、心肌病的心肌組織中檢出CVB的核酸和抗原，也說明CVB可以長期在心肌細胞中持續(xù)感染。
Feuer等[8]發(fā)現(xiàn)，細胞周期狀態(tài)可以影響CVB3m的復制，該研究將HeLa細胞的狀態(tài)停留在G0期，可以看到HeLa的復制明顯抑制。心肌細胞是一種終末分化細胞，在成年人體中心肌細胞應為G0期細胞，我們懷疑，心肌周期的這種變化，影響了CVB在心肌細胞的感染狀態(tài)。
但是，本研究采用的乳鼠心細胞仍然具有分裂能力，這個因素在新建立的原代培養(yǎng)心肌細胞中尚不起作用，估計細胞周期因素之外，還有其他影響因素導致CVB在心肌細胞的持續(xù)感染。CVB致細胞病變的機制之一是CVB的2Apro、3Cpro蛋白酶切割宿主細胞的靶分子，如eGIF-4E、eGIF-4F等，這些分子與細胞的蛋白合成有關。我們推測，有可能是心肌細胞的這些靶分子的表達與其他組織類型細胞不同，導致CVB不顯著地破壞心肌細胞。我們將在后面的研究中專題探究這種可能性。
本研究的實驗還存在不足之處。由于時間限制，我們沒有對感染心肌的CVB基因組測序，CVB是RNA病毒，RNA的復制保真性差，當CVB感染心肌細胞時可能存在一定與心肌細胞相適應的突變信息，這些信息對解釋CVB在心肌細胞持續(xù)感染可能非常重要，希望在后續(xù)的研究中補上這部分工作。
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