方法名稱： |
止咳寶片—嗎啡的測定—高效液相色譜法 |
應用范圍： |
本方法采用高效液相色譜法測定止咳寶片中嗎啡的含量。 本方法適用于中西藥復方制劑止咳寶片。 |
方法原理： |
供試品, 除去包衣, 研細, 加氫氧化鈣與水少量, 研磨，轉(zhuǎn)移至量瓶中并稀釋至刻度,搖勻, 濾過, 續(xù)濾液加硫酸銨溶解,用苯振搖提取，提取液用水洗滌, 洗液并入水層后, 用氯仿-乙醇振搖提取，合并提取液, 用水-乙醇混合液洗滌后, 置水浴上蒸干, 殘渣加甲醇溶解并定容, 搖勻進入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器檢測嗎啡的吸收值，計算出其含量。 |
試劑： |
1. 甲醇（色譜純) 2 .乙酸銨溶液0.5% 3 .三乙胺（分析純) 4 .乙醇（分析純) 5 .氫氧化鈣（分析純) 6 .硫酸銨（分析純) 7 .苯（分析純) |
儀器設備： |
1 儀器 1.1 高效液相色譜儀 1.2 色譜柱 Nucleodur C18 Gravity柱(4. 0 mm×250 mm ,5μm)。 1.3 紫外吸收檢測器 2 色譜條件 2.1 流動相：甲醇 0.5 %乙酸銨溶液 三乙胺=40 60 0.02 2.2 檢測波長：254nm 2.3柱溫：室溫 |
試樣制備： |
1. 對照品溶液的制備 精密稱取在105 ℃干燥1h的無水嗎啡對照品適量, 加甲醇制成每1mL 含0.12mg 的溶液,搖勻,即得。 2. 標準溶液的制備 精密量取對照品儲備液2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL，置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為繪制標準曲線的系列濃度標準溶液。 3.供試品溶液的制備 取供試品30片,除去包衣,精密稱定,研細,取適量(相當于無水嗎啡6mg) ,精密稱定,加氫氧化鈣1g 與水少量,研磨成糊狀后,繼續(xù)研磨15min ,用水轉(zhuǎn)移至100mL 量瓶中并稀釋至刻度,搖勻,放置30min ,用干燥濾紙濾過,精密量取續(xù)濾液50mL ,加硫酸銨0.5g ,并使其溶解,用苯振搖提取2次(25 、15mL) ,合并苯液,用水10mL 洗滌,洗液并入水層后,用氯仿2乙醇(1∶1) 60mL 振搖提取1 次,再用氯仿2乙醇(2∶1) 提取3 次(45 、45 、15mL) ,合并提取液,用水10mL 與乙醇5mL 的混合液洗滌后,置水浴上蒸干,殘渣加甲醇溶解,轉(zhuǎn)移至25mL 量瓶中,并稀釋至刻度,搖勻,即得。 |
操作步驟： |
1.標準曲線的繪制 精密吸取上述標準溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器測定嗎啡的吸收值，以標準溶液濃度對峰面積繪制標準曲線，進行線性回歸，得到回歸方程。 2. 供試品的測定 精密吸取供試品溶液各10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器測定嗎啡的吸收值，計算出其含量。 |
參考文獻： |
古星妙，劉東輝，高英，黃意甜. HPLC法測定復方止咳寶片中嗎啡的含量. 中國實驗方劑學雜志, 2004, 10(5): 5-6. |
