萬氏牛黃清心丸—黃連的測定—薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測定萬氏牛黃清心丸中黃連的含量。

本方法適用于萬氏牛黃清心丸中黃連的測定。

供試品經(jīng)鹽酸-甲醇（1：100)加熱回流，過濾，用甲醇定量制成供試液，點(diǎn)樣，以苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2)為展開劑，在另槽中加入等體積的濃氨試液，預(yù)平衡15分鐘，展開，取出，晾干，照薄層色譜掃描法進(jìn)行熒光掃描，激發(fā)波長λ=366nm，測量供試品熒光強(qiáng)度的積分值與對(duì)照品熒光強(qiáng)度的積分值，計(jì)算其含量。

1. 鹽酸

2 .甲醇

3 .乙酸乙酯

4 .異丙醇

5 .苯

1 儀器

1.1 薄層掃描儀

1.2點(diǎn)樣器

一般采用微升毛細(xì)管或與之相應(yīng)的點(diǎn)樣器材。

1.3展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2材料

2.1玻板

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

1. 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加甲醇制成每1mL各含0.02mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取裝量差異項(xiàng)下本品適量，剪碎，取適量，精密稱定，精密加入等量的硅藻土，研勻，精密稱取約1.6g，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1：100)混合液適量，加熱回流提取至提取液無色，提取液移至100mL量瓶中，用少量鹽酸-甲醇（1：100)混合液洗滌容器，洗液并入同一量瓶中，加混合液至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

精密吸取供試品溶液4μL、對(duì)照品溶液2μL與6μL，分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開

將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以苯-乙酸乙酯-異丙醇-甲醇-水（4：2：1：1：0.2)為展開劑，在另槽中加入等體積的濃氨試液，預(yù)平衡15分鐘，展開，取出，晾干，取出，晾干。

4.含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長進(jìn)行掃描，波長：λS =510nm，λR=700nm，測量供試品吸收度積分值與對(duì)照品吸收度積分值，計(jì)算。

用外標(biāo)法測定時(shí)，若對(duì)照品各數(shù)據(jù)點(diǎn)在校正曲線上呈一通過原點(diǎn)的直線時(shí)，可用一點(diǎn)法校正，如不通過原點(diǎn)通常宜采用二點(diǎn)法校正，必要時(shí)用多點(diǎn)法校正。

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會(huì)編,化學(xué)工業(yè)出版社，2005年版，一部,p.331。