公開(公告)號(hào)
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CN1305902C
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公開(公告)日
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2007.03.21
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申請(qǐng)(專利)號(hào)
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CN200410052377.8
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申請(qǐng)日期
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2004.11.25
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專利名稱
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一種人白細(xì)胞介素29的生產(chǎn)方法及重組IL-29工程菌
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主分類號(hào)
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C07K14/54(2006.01)I
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分類號(hào)
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C07K14/54(2006.01)I;C12N15/09(2006.01)I;C12N15/24(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專利權(quán))人
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汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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何韶衡;李明才
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地址
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515031廣東省汕頭市新陵路22號(hào)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專利代理機(jī)構(gòu)
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廣州粵高專利代理有限公司
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代理人
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陳 衛(wèi)
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國(guó)省代碼
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廣東;44
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主權(quán)項(xiàng)
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一種人白細(xì)胞介素29的生產(chǎn)方法,其特征在于包括如下步驟: (1)合成PCR引物,并在合成的引物中導(dǎo)入LIC粘性末端, 上游引物:5-GACGACGACAAGATCCCCACTTCCAAGCCCAC-3 下游引物:3-GAGGAGAAGCCCGGTTTAGGTGGACTCAGGGTGGGTTG-5; (2)PCR擴(kuò)增: 以pcDNA3.1/V5-His-TOPO-IL-29質(zhì)粒為模板,通過(guò)PCR基因擴(kuò)增,獲得IL-29基因片段; (3)將上述PCR擴(kuò)增得到的IL-29基因片段與pET-44Ek/LIC載體連接,構(gòu)建重組載體pET-44Ek/LIC-IL-29; (4)將重組載體pET-44Ek/LIC-IL-29轉(zhuǎn)化細(xì)菌,構(gòu)建重組IL-29工程菌; (5)培養(yǎng)構(gòu)建的重組IL-29工程菌,誘導(dǎo)其表達(dá)生產(chǎn)IL-29。
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摘要
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本發(fā)明公開了一種人白細(xì)胞介素29的生產(chǎn)方法及重組IL-29工程菌。本發(fā)明包括人工合成引物;PCR擴(kuò)增IL-29成熟肽編碼區(qū);IL-29原核表達(dá)載體pET44-IL-29的構(gòu)建;轉(zhuǎn)化入大腸桿菌構(gòu)建重組IL-29工程菌;培養(yǎng)工程菌高效表達(dá)IL-29;IL-29的純化。本發(fā)明由于采用不依賴連接反應(yīng)的克隆方法(LIC),準(zhǔn)確、快速獲得IL-29基因的成熟肽編碼區(qū);使用大腸桿菌偏愛(ài)的終止密碼子提高表達(dá)效率,表達(dá)量高,用S蛋白親和層析柱一步純化即可獲得很純的產(chǎn)品。IL-29的制備,對(duì)臨床用于治療和預(yù)防感染性疾病及非感染性疾病具有重要的前景。
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國(guó)際公布
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