| 公開(公告)號(hào) | CN1297663C |
| 公開(公告)日 | 2007.01.31 |
| 申請(專利)號(hào) | CN03130685.3 |
| 申請日期 | 2003.05.07 |
| 專利名稱 | 一類重組基因產(chǎn)生的朊蛋白（PrPC)融合變構(gòu)體及其用途 |
| 主分類號(hào) | C12N15/62(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N15/62(2006.01)I;G01N33/68(2006.01)I;A61P31/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國科學(xué)院微生物研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 田 波;尹少滿;楊懷義 |
| 地址 | 100000北京市中關(guān)村北一條13號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 姜兆元 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種含有正常朊蛋白基因與酵母朊病毒Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的重組基因，所述朊蛋白基因選自人、牛或羊朊蛋白基因。2.一種由權(quán)利要求1所述的重組基因所表達(dá)的融合變構(gòu)體。3.按照權(quán)利要求1所述的重組基因，其中，酵母朊病毒基因片段融合在正常朊蛋白基因的N端或C端，酵母朊病毒基因片段和正常朊蛋白基因直接融合或加適當(dāng)?shù)倪B接區(qū)。4.權(quán)利要求3所述的重組基因，其中所述的連接區(qū)為八聚甘氨酸基因片段。5.一種制備權(quán)利要求2所述的融合物變構(gòu)體的方法，包括：1)正常朊蛋白基因與酵母朊病毒Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的融合，所述朊蛋白基因選自人、牛或羊朊蛋白基因；2)將1)的基因融合重組片段插入到原核表達(dá)載體pET30a(+)中，在大腸桿菌BL21中表達(dá)、表達(dá)產(chǎn)物用6M鹽酸胍溶解，進(jìn)行Ni親合層析和柱上復(fù)性，以16％SDS-PAGE電泳和考馬斯亮藍(lán)鑒定純度，得到大于95％純度的蛋白，所得組分濃度高于1mg/ml；3)將濃度至少為1mg/ml的重組蛋白在pH4.0-9.0的緩沖液中，0℃-37℃反應(yīng)至少7小時(shí)，獲得融合物變構(gòu)體。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的融合變構(gòu)體，在制備蛋白酶消化朊蛋白試劑中的應(yīng)用。7.權(quán)利要求2所述的融合變構(gòu)體，在制備朊病毒的檢測與診斷陽性對照試劑中的應(yīng)用。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一類由酵母朊病毒結(jié)構(gòu)域與動(dòng)物和人正常朊蛋白基因重組表達(dá)的融合變構(gòu)體，其中正常朊蛋白基因可來自人、牛、羊、鹿、貂、雞、貓等。酵母朊病毒結(jié)構(gòu)域基因?yàn)閁re2p1-65或Sup351-114。域Ure2p1-65或Sup35p1-114基因的重組及其表達(dá)的融合變構(gòu)體的制備方法。這種融合變構(gòu)體可作為陽性對照替代品應(yīng)用于瘋牛病等朊病毒病的檢測與診斷，其優(yōu)越性在于避免了用有病腦組織提取物作為陽性對照造成傳染的危險(xiǎn)，以及未發(fā)生瘋牛病等朊病毒病的國家獲得陽性對照。 |
| 國際公布 |
