| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1657632A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2005.08.24 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410061237.7 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.11.30 |
| 專利名稱 | 表達(dá)人類(lèi)CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法 |
| 主分類(lèi)號(hào) | C12N15/861 |
| 分類(lèi)號(hào) | C12N15/861;C12N15/53;A61K48/00;A61P35/00;C12N7/01 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 汪道文;蔣建剛;肖嘯 |
| 地址 | 430030湖北省武漢市解放大道1095號(hào)轉(zhuǎn)同濟(jì)醫(yī)院內(nèi)科汪道文 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 武漢開(kāi)元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 王和平 |
| 國(guó)省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種表達(dá)人類(lèi)CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒，其中該重組腺相關(guān)病毒包括的三種質(zhì)粒：1)pXX2：為包裝質(zhì)粒，含有編碼腺相關(guān)病毒Rep蛋白和Cap蛋白的編碼序列。并在上游和下游各插入一個(gè)p5啟動(dòng)子，使表達(dá)效率可以提高15倍，提供rAAV復(fù)制所必須的Rep蛋白；2)pXXUF1：真核表達(dá)載體，含CMV啟動(dòng)子，有較強(qiáng)的表達(dá)效率，其含有一多克隆NotI位點(diǎn)，可以連接不同的目的基因，pXXUF1反向連接人CYP表氧化酶基因，該載體含有rAAV轉(zhuǎn)基因表達(dá)所必須的末端重復(fù)序列(ITRs)，負(fù)責(zé)病毒的復(fù)制和病毒外殼的包被并攜帶目的基因；3)pXX6：為輔助質(zhì)粒，刪除了腺病毒的致病基因序列，保留了腺病毒E1A、E2A和VA1RNA基因，所表達(dá)的蛋白質(zhì)可發(fā)揮輔助作用以刺激rAAV基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，保證rAAV產(chǎn)量；4)以上三種質(zhì)粒經(jīng)磷酸鈣沉淀法共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞，即可在293細(xì)胞內(nèi)形成高滴度的含目的基因的rAAV顆粒。 |
| 摘要 | 一種表達(dá)人類(lèi)CYP2J2反義基因的重組腺相關(guān)病毒及其制備方法，本發(fā)明所提供的該重組腺相關(guān)病毒，是從人類(lèi)CYP2J2 cDNA長(zhǎng)1509bp，編碼含503個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)，利用PCR法從人類(lèi)白細(xì)胞DNA中克隆人類(lèi)CYP2J2 cDNA，通過(guò)三種質(zhì)粒磷酸鈣共轉(zhuǎn)染法包裝制備含反義目的基因的重組腺相關(guān)病毒并純化，制備的重組腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染不同種類(lèi)的人腫瘤細(xì)胞系，它能明顯抑制各種腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，抑制在體腫瘤瘤體的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。因此，確定，CYP2J2的選擇性抑制劑和表達(dá)反義CYP2J2基因的重組腺相關(guān)病毒是腫瘤治療的潛在藥物。 |
| 國(guó)際公布 |
