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將基因整合至哺乳動(dòng)物細(xì)胞特定位點(diǎn)的方法及所用載體

公開(公告)號 CN1175111C  
公開(公告)日 2004.11.10  
申請(專利)號 CN98804988.0  
申請日期 1998.03.09  
專利名稱 將基因整合至哺乳動(dòng)物細(xì)胞特定位點(diǎn)的方法及所用載體  
主分類號 C12N15/90  
分類號 C12N15/90;C12N15/85;C12Q1/68;C12N5/10;C12N9/12;C12N15/13;C07K16/28;C12N15/12;C07K14/705;G01N33/53;C12N15/62;C07K19/00  
分案原申請?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 1997.3.14 US 08/819,866; 1998.2.13 US 09/023,715  
申請(專利權(quán))人 艾德藥品公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 M·E·雷夫;R·S·巴內(nèi)特  
地址 美國加利福尼亞州  
頒證日  
國際申請 PCT/US1998/003935 1998.3.9  
進(jìn)入國家日期 1999.11.11  
專利代理機(jī)構(gòu) 中國專利代理(香港)有限公司  
代理人 盧新華;譚明勝  
國省代碼 美國;US  
主權(quán)項(xiàng) 在分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組的靶位點(diǎn)插入所需DNA的方法,所述方法包括下列步驟:(i)用標(biāo)記質(zhì)粒轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化分離的哺乳動(dòng)物細(xì)胞,所述質(zhì)粒含有下列序列:(a)對哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組而言為異源的DNA區(qū)域,當(dāng)該區(qū)域整合至哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組時(shí),可為同源重組提供獨(dú)一無二的位點(diǎn);(b)編碼第一個(gè)選擇標(biāo)記蛋白部分的第一部分的DNA片段;和(c)至少一種其它選擇標(biāo)記DNA,該DNA有助于選擇被標(biāo)記質(zhì)粒成功整合的哺乳動(dòng)物細(xì)胞;(ii)通過篩選至少一種其它選擇標(biāo)記而選擇含有標(biāo)記質(zhì)粒的細(xì)胞,所述質(zhì)粒已整合至該細(xì)胞的基因組中;(iii)用靶向質(zhì)粒轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化所述選定細(xì)胞,所述質(zhì)粒含有下列序列:(a)DNA區(qū)域,該區(qū)域與標(biāo)記質(zhì)粒中獨(dú)一無二的區(qū)域相同或與其具有足夠的同源性以使所述DNA區(qū)域能經(jīng)由同源重組與所述獨(dú)一無二的區(qū)域重組;(b)編碼標(biāo)記質(zhì)粒中所含同一第一選擇標(biāo)記的第二部分的DNA片段,其中僅當(dāng)所述第二部分與第一選擇標(biāo)記蛋白的第一部分聯(lián)合表達(dá)時(shí),才會產(chǎn)生第一選擇標(biāo)記蛋白;和(iv)通過篩選第一個(gè)選擇標(biāo)記蛋白的表達(dá)選擇出含有靶向質(zhì)粒的細(xì)胞,所述質(zhì)粒整合至靶位點(diǎn)。  
摘要 本發(fā)明涉及經(jīng)由同源重組將所需DNA位點(diǎn)特異性地整合至哺乳動(dòng)物細(xì)胞靶位點(diǎn)的方法,此方法能可再現(xiàn)地選擇細(xì)胞系,在所述細(xì)胞系中,所需DNA被整合至已用標(biāo)記質(zhì)粒標(biāo)記的預(yù)定的轉(zhuǎn)錄活性位點(diǎn)。此方法特別適用于產(chǎn)生哺乳動(dòng)物細(xì)胞系,所述細(xì)胞系可高水平分泌哺乳動(dòng)物蛋白質(zhì),尤其是免疫球蛋白。本發(fā)明也提供了此克隆方法中所用的載體和載體組合。  
國際公布 WO1998/041645 英 1998.9.24  
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