| 公開(公告)號(hào) | CN101096657A |
| 公開(公告)日 | 2008.01.02 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200710126178.0 |
| 申請(qǐng)日期 | 2007.06.14 |
| 專利名稱 | 抗Asial型口蹄疫病毒的單克隆抗體的制備方法及用途 |
| 主分類號(hào) | C12N5/18(2006.01)I |
| 分類號(hào) | C12N5/18(2006.01)I;C07K16/18(2006.01)I;G01N33/577(2006.01)I;G01N33/569(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | �；菔|;邵軍軍;林 彤;李克生;杜惠芬;獨(dú)軍政;叢國(guó)正;周廣青;謝慶閣 |
| 地址 | 730046甘肅省蘭州市鹽場(chǎng)堡徐家坪1號(hào) |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 蘭州振華專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 張 晉 |
| 國(guó)省代碼 | 甘肅;62 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 抗Asial型口蹄疫病毒的單克隆抗體的制備方法，其特征在于用Asial型口蹄疫病毒的總mRNA為模板，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，獲得Asial型口蹄疫病毒衣殼蛋白的基因VP1，再將VP1插入原核表達(dá)載體中得到重組表達(dá)質(zhì)粒，用重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌得到重組表達(dá)載體的大腸桿菌菌株，將菌體超聲破碎后除雜蛋白，層析法純化得到表達(dá)的重組蛋白，用重組蛋白給健康小鼠皮下注射進(jìn)行免疫，取免疫后小鼠的脾臟獲得脾細(xì)胞，再經(jīng)分散處理后離心得到脾細(xì)胞沉淀，取從小鼠中已得到的X-63、NS-1或SP2/0細(xì)胞系，在常規(guī)培養(yǎng)液中培養(yǎng)3～4天后，離心去上清液得到骨髓瘤細(xì)胞沉淀，用1640培養(yǎng)液懸浮上述脾細(xì)胞沉淀和骨髓瘤細(xì)胞沉淀，并將脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞按數(shù)量比5～10∶1混合兩種細(xì)胞，然后離心去上清液，充分分散沉淀物，沉淀物中按體積比1∶2加入濃度為50％的聚乙二醇PEG4000，靜置1～2分鐘后離心去上清液，在沉淀物中緩慢加入沉淀物體積的25～35倍的HAT培養(yǎng)液，再將融合細(xì)胞按100μl/孔加入至96孔培養(yǎng)板中，每孔中再加100μl用HAT培養(yǎng)液洗取的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞作為飼養(yǎng)細(xì)胞，得到抗Asial型口蹄疫病毒抗體的雜交瘤細(xì)胞，再將雜交瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移到另一塊96孔板中進(jìn)行克隆，得到雜交瘤細(xì)胞株，再用常規(guī)培養(yǎng)液培養(yǎng)上述所得到的雜交瘤細(xì)胞株，取培養(yǎng)液用硫酸銨沉淀和凝膠層析法進(jìn)行純化得到抗Asial型口蹄疫病毒的單克隆抗體。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開一種用于抗Asia1型口蹄疫病毒的單克隆抗體的制備方法，用這種方法制備的抗體，和這種抗體的用途。本發(fā)明的抗Asia1型口蹄疫病毒的單克隆抗體的制備方法是：用Asia1型口蹄疫病毒的總mRNA為模板，獲得Asia1型口蹄疫病毒衣殼蛋白的基因VP1，用VP1制備重組表達(dá)質(zhì)粒，用重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌菌株得重組蛋白，再用重組蛋白制備并獲得骨髓瘤細(xì)胞及雜交瘤細(xì)胞，將雜交瘤進(jìn)行克隆純化，最終得到抗Asia1型口蹄疫病毒的單克隆抗體。 |
| 國(guó)際公布 |
