禽支原體病,是怎么回事
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摘要：雞毒
支原體感染在雞主要表現(xiàn)為呼吸道癥狀，如氣管炎、氣囊炎等，所以曾 經(jīng)一度名之為慢性呼吸道病（Chronic respiratory disease,CRD)。在火雞除去氣囊 炎外主要造成傳染性竇炎（Infectious sinusitis)。這種感染是性分布的。國(guó)內(nèi)也 很普遍。下面是禽支原體病的詳細(xì)內(nèi)容：支原體與禽源支原體支原體是一種原核生物，在具有能力自體殖和合成自身大分子微生物中，體積最小，構(gòu)造也最簡(jiǎn)單。整個(gè)細(xì)胞由3種細(xì)胞器組成，即脫氧
核糖核酸、核糖體和細(xì)胞質(zhì)膜。這是報(bào)告自體繁殖和合成大分子任務(wù)所的最低限度的細(xì)胞器種類，缺一即不能完成此種任務(wù)。細(xì)胞直徑大約300－800nm，細(xì)胞形受到環(huán)境影響變化很大，在光學(xué)顯微鏡下呈多形，自球形到球桿狀或其他形狀不等。支原體雖然能合成自身的大分子，但由于其基因組分子量微�。�4．4－12×108道爾頓)，只比痘病毒最大基因組（1．6－2×108)大1－2倍，為立克次體的（1－1．5×109)的1／2，大腸埃氏菌的（2．2×109)的1／5，攜帶信息量不多，而且其核酸中鳥(niǎo)嘌呤＋胞嘧啶（G＋C)含量大多在30％以下，就更加限制了信息的含有量，因而生物合成能力有限。為了合成自體的大分子就必須從外界攝取一些比較復(fù)雜的基質(zhì)或前體，例如維生素、核酸前體、
氨基酸、脂肪酸以及膽固醇等。支原體本身能的供應(yīng)機(jī)構(gòu)效率不強(qiáng)，必須攝取大量供應(yīng)能量的物質(zhì)。按其能源物質(zhì)的不同，大體可將支原體分為3個(gè)類別，即發(fā)酵糖類的、水解
精氨酸的和自
尿素取得能源的。支原體的繁殖是：分襲式的，基因組復(fù)制半保留式。但細(xì)胞分襲與基因組復(fù)制版有時(shí)不同步，當(dāng)細(xì)胞分襲落后于基因組復(fù)制時(shí)就會(huì)出現(xiàn)多核形長(zhǎng)絲狀，當(dāng)胞漿質(zhì)不均等地分配于兩個(gè)尚未分離的細(xì)胞時(shí)就會(huì)出現(xiàn)“出芽”狀形態(tài)。支原體沒(méi)有細(xì)胞壁，也不含有任何細(xì)胞壁成分，所以對(duì)于
青霉素和其他有降解或抑制肽
葡萄糖合成能力的抗生素不敏感。胞漿膜在電鏡下呈現(xiàn)為暗－亮－暗3個(gè)層次的一層膜構(gòu)造。膜成分中蛋白質(zhì)大約占2／3，脂類大約占1／3。需要固醇的支原體，膜中含有大量的膽固醇。體表的膜蛋白、脂多糖是主要的抗原，由這些抗原引起的抗體能抑制支原體的生長(zhǎng)、代謝，并在補(bǔ)體的參與下溶解支原體。一些在支原體研究中專用的鑒定和檢測(cè)方法，例如代謝抑制試驗(yàn)、生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)和表面熒少抗體技術(shù)等，其立足點(diǎn)就在這里。由于沒(méi)有細(xì)胞壁，支原體細(xì)胞柔軟、有彈性。在瓊脂培養(yǎng)基上，支原體細(xì)胞通過(guò)毛細(xì)管現(xiàn)象滲入瓊脂表面下發(fā)育分襲，向四方擴(kuò)散生長(zhǎng)，當(dāng)?shù)竭_(dá)表面時(shí)沿表面向四周鋪開(kāi)，形成支原體物有的“煎蛋狀”菌落形態(tài)。液體培養(yǎng)基中支原體一般不呈現(xiàn)眼見(jiàn)混濁現(xiàn)象。＊．某些細(xì)菌L型的菌落為“煎蛋狀”。支原體主要營(yíng)寄生生活，寄生于人類、動(dòng)物、植物、昆蟲(chóng)以及細(xì)胞培養(yǎng)中。禽類的支原體發(fā)現(xiàn)的有十多種，其中雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum)、滑液支原體（Mycoplasma synoviae)和火雞支原體（Mycoplasma meleagridis)早已被證明是具有致病性的，最近國(guó)內(nèi)學(xué)者又證明鴨支原體（Mycoplasma anatis)是鴨傳染性竇炎的病原。此外，還有一些支原體種據(jù)認(rèn)為也具有一定的致病力，但還需要進(jìn)一步證實(shí)。不過(guò)，即使是致病性的支原體種，各個(gè)分離株之間的致病力也高低不一，差異很大。在國(guó)內(nèi)已經(jīng)鑒定證實(shí)的禽源支原體種：雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum)、滑液支原體（Mycoplasma synoviae)、雞支原體（Mycoplasma gallinarium)、雛雞支原體（Mycoplasma Pullorum)、禽支原體（Mycoplasma gallinaceum)、依阿華支原體（Mycoplasma iowae)、和鴨支原體（Mycoplasma anatis)等7個(gè)種。一、雞毒支原體感染雞毒支原體感染在雞主要表現(xiàn)為呼吸道癥狀，如氣管炎、氣囊炎等，所以曾經(jīng)一度名之為慢性呼吸道�。–hronic respiratory disease,CRD)。在火雞除去氣囊炎外主要造成傳染性竇炎（Infectious sinusitis)。這種感染是性分布的。國(guó)內(nèi)也很普遍。（一)病原學(xué)雞毒支原體在分類學(xué)上 于軟皮體綱（Mollicutes)支原體目（Mycoplasmatales)支原體科（Mycoplasmataceae)支原體屬（Mycoplasma)。到目前為止，這個(gè)種只發(fā)現(xiàn)1個(gè)血清型，但各個(gè)分離株之間的致病性和趨向性并不一致。一般分離株主要侵犯呼吸道。但也有對(duì)于火
雞腦有趨向性的，如S6株；有的對(duì)火雞足關(guān)節(jié)有趨向性，如A514株。雞毒支原體具有一般支原體形態(tài)特征，格蘭氏染色陰性，發(fā)酵
葡萄糖，不水解精氨酸，不從尿素取得能源，對(duì)毛
地黃皂苷敏感，還原四氮唑，吸附雞紅細(xì)胞，溶解
綿羊紅細(xì)胞，不形成膜與斑。雞毒支原體具有緩慢運(yùn)動(dòng)的能力，此種能力可能與其一種特殊微結(jié)構(gòu)有關(guān)系，即在細(xì)胞的一端偶爾在兩端有一小泡狀物，支原體以此小泡接觸于真核細(xì)胞，運(yùn)動(dòng)時(shí)順小泡方向移動(dòng)。雞毒支原體對(duì)環(huán)境抵抗力低弱。在水內(nèi)立刻死亡，在20℃的雞糞內(nèi)可生存1－3天。在卵黃內(nèi)37℃時(shí)生存18周， 在45℃中經(jīng)12－14h死亡。液體培養(yǎng)物在4℃中不超過(guò)1個(gè)月，在－30℃中可保存1－2年，在－60℃中可生存10多年，凍干培養(yǎng)物在－60℃中存活時(shí)間更.一各個(gè)分離株保存時(shí)間極不一致，有的遠(yuǎn)遠(yuǎn)達(dá)不到這么長(zhǎng)的時(shí)間。雞毒支原體致病力因株系不同而不一致。致病力又受到在無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基中傳代次數(shù)的影響，一些原來(lái)有致病力的株經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基中傳代會(huì)很快地失去致病力。即使是有致病力的株，在自然感染的雞體上也經(jīng)常引不起癥狀。火雞比雞更易感。有致病力的雞毒支原體經(jīng)過(guò)卵黃囊接種雞胚可能導(dǎo)致雞胚矮小、
水腫、出血和死亡。（二)
流行病學(xué)雞毒支原體感染流行于全世界雞場(chǎng)中。在國(guó)內(nèi)也很普遍，南自海南島北至黑龍江，西起新疆東到江蘇、福建都有發(fā)生的報(bào)告。根據(jù)血清學(xué)調(diào)查，感染率平均在70－80％間。國(guó)內(nèi)火雞飼養(yǎng)業(yè)雖然處于起步之時(shí)，但也已從火雞體內(nèi)分離到雞毒支原體，和火雞暴發(fā)雞毒支原體病的報(bào)道。在國(guó)內(nèi)曾報(bào)道過(guò)
鷓鴣的雞毒支原體與大腸菌并發(fā)感染。從其他一些禽類例如鴨、鵝、麻
雀等也分離出來(lái)過(guò)雞毒支原體，但其在流行病學(xué)上的作用還不清楚。影響到雞毒支原體感染流行的因素，除去支原體本身的致病性以外，雞折齡顯然也是一個(gè)因子，雞對(duì)支原體感染力隨年齡地增長(zhǎng)而加強(qiáng)。并發(fā)感染對(duì)雞毒支原體感染有相當(dāng)大的影響，即使是致病力不強(qiáng)的雞支原體隱性感染，也常會(huì)因接種新城疫疫苗或傳染性支氣管炎疫苗而暴發(fā)臨診的支原體病。這是由于這些病毒感染能促使支原體以百倍、千倍甚至更高的速度發(fā)育起來(lái)，終于導(dǎo)致疾病暴發(fā)。能促使雞毒支原體感染加劇的病毒除上述二者外，還有傳染性喉氣管炎病毒、禽腺病毒、甲型流感病毒和呼腸孤病毒等。在細(xì)菌中，大腸埃希氏菌與雞毒支原體的協(xié)同致病作用極為顯著，單獨(dú)雞毒支原體感染，雞群中少有或沒(méi)有死亡，如果同時(shí)有大腸菌并發(fā)感染，病狀異常嚴(yán)重，造成慘重死亡。綠膿桿菌和嗜血桿菌也能促進(jìn)支原體感染的嚴(yán)重性。環(huán)境因素也起著影響雞毒支原體感染流行的重要作用。雞群擁擠加劇了病原的傳播，同時(shí)擁擠是一種應(yīng)激，減低了雞的抵抗力。雞舍污濁、糞便集蓄，空氣中氨的含量增高刺激呼吸粘膜，方便了支原體的發(fā)育。當(dāng)空氣中氨含量為2×10－5時(shí)，雞氣管中雞毒支原體含量為正常的10倍，當(dāng)氨含量達(dá)到5×10－5時(shí)，支原體數(shù)量增加千倍。環(huán)境溫度對(duì)感染也有明顯的影響，在7－10℃中，實(shí)驗(yàn)感染雞的氣囊炎發(fā)病率為31－32℃的5倍，氣囊炎的嚴(yán)重性也大為加劇。營(yíng)養(yǎng)的不足會(huì)導(dǎo)致支原體疾病的發(fā)生，曾有由于
維生素A的缺乏，而招致支原體感染暴發(fā)的報(bào)道。支原體的傳播主要有兩種方式。其一是直接接觸的方式，是感染禽呼出的帶有支原體的小滴經(jīng)呼吸道傳染給同舍同籠的雞或火雞。另一種方式是經(jīng)卵傳播病原經(jīng)過(guò)感染雞的卵傳染給下一代，這種方式可能更為重要。在一些地區(qū)，尤其是發(fā)展中的國(guó)家，經(jīng)常使用普通雞蛋雞胚培養(yǎng)制造禽用活疫苗，經(jīng)卵傳播的支原體在雞胚中發(fā)育污染了疫苗，經(jīng)過(guò)疫苗接種傳染給被接種雞，這種污染的疫苗在傳染的作用上不可忽視。關(guān)于支原體感染的發(fā)病機(jī)制研究得很不充分。雞毒支原體的致病作用可能與其所產(chǎn)生的神經(jīng)氨酸苷酶、過(guò)氧化氫、溶血素、溶菌酶或者外毒素有關(guān)，支原體以其小泡狀體經(jīng)過(guò)宿這細(xì)胞的
葉酸受體吸附于上皮細(xì)胞上并侵入固有層，上述物質(zhì)使上皮細(xì)胞纖毛停止活動(dòng)、脫落，上皮細(xì)胞逐漸退化死亡，上皮脫落，組織出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，抗原性發(fā)生變化甚至出現(xiàn)自身免疫反應(yīng)。有些支原體存留于細(xì)胞表面達(dá)10個(gè)月以上。不同的菌株對(duì)細(xì)胞組織的趨向也不所不同，一般是趨向呼吸道，也有的趨向于腦組織或跗關(guān)節(jié)的，因而引起不同的癥狀。（三)癥狀雞毒支原體感染的出現(xiàn)，在自然情況下常常受到不利環(huán)境因素、應(yīng)激以及并發(fā)感染的影響，難以確定感染的潛伏時(shí)間。有報(bào)道說(shuō)，在5－7日齡雞中有因3－5日前接種新城疫疫苗而暴發(fā)雞毒支原體病的。人工感染1－3周后發(fā)病，但這個(gè)時(shí)間的長(zhǎng)短受到實(shí)驗(yàn)中支原體菌株本身致病力大小的影響。感染最常見(jiàn)的癥狀是呼吸道癥狀，表現(xiàn)
咳嗽、噴嚏、氣管羅音和鼻炎。鼻炎尤其常見(jiàn)于火雞，患禽一側(cè)或雙側(cè)眶下竇發(fā)炎、腫脹、嚴(yán)重時(shí)眼睛張不開(kāi)。常有鼻涕堵塞鼻孔，有時(shí)鼻孔被粘液混合物堵滿，病禽頻頻搖頭急于甩掉，有時(shí)用翅膀拂擦鼻液致使翅上涂著鼻液變污。常出現(xiàn)輕度
結(jié)膜炎，眼上有清性分泌物，但有時(shí)眼睛炎癥也很嚴(yán)重。有時(shí)關(guān)節(jié)發(fā)炎出現(xiàn)跛行，但少見(jiàn)有站立不起的。在火雞偶爾出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)失調(diào)，這是由于支原體侵入腦內(nèi)所致。也有報(bào)道引起
腹水癥狀的。受感染雞群生產(chǎn)性能下降。有報(bào)道說(shuō)，感染雞比正常無(wú)感染雞少產(chǎn)卵1－20個(gè)，孵化率下降10個(gè)百分點(diǎn)，肉雞存活率下降10個(gè)百分點(diǎn)，活重減少0．2kg，肉料比由1．85上升為2．2。也有報(bào)道說(shuō)，在發(fā)病期間出雛率下降到40％上下，雛雞有10％出現(xiàn)畸形。一般說(shuō)來(lái)死亡輕微，但也有時(shí)出現(xiàn)10－20％甚至更高的死亡率。這大概都是由于環(huán)境應(yīng)激或者并發(fā)感染所致。發(fā)病雖然常年都可能發(fā)生，但寒冷季節(jié)居多。幼雞群比成年雞群發(fā)病多，這與年齡有關(guān)，也可能與以往感染獲得免疫有關(guān)。（四)病理變化病理變化主要出現(xiàn)在呼吸道，有時(shí)也出現(xiàn)在輸卵管。呼吸道的變化也輕重不一。輕微的不易擦覺(jué)，鼻孔、鼻竇、氣管和肺中出現(xiàn)比較多的粘性液體或者卡他性分泌物，氣管略水腫。隨著感染的發(fā)展，氣囊逐漸渾濁，氣囊壁上出現(xiàn)干
酪狀滲出物，開(kāi)始時(shí)如珠狀，嚴(yán)重時(shí)成堆成塊�？粝赂]出現(xiàn)炎癥，在火雞眶下竇呈現(xiàn)粘性和干酪狀滲出物。有時(shí)會(huì)出現(xiàn)
心包炎和肝周炎變化，此時(shí)經(jīng)�？梢苑蛛x到大腸埃希氏桿菌。出現(xiàn)關(guān)節(jié)癥狀時(shí)，關(guān)節(jié)周圍組織刖脹水腫，關(guān)節(jié)液增多，開(kāi)始時(shí)清亮而后混濁，最后呈奶油狀稠度。組織學(xué)變化：呼吸道上皮組織肥厚增生，纖毛脫落。上皮下層組織出現(xiàn)淋巴細(xì)胞、綱狀細(xì)胞和漿細(xì)胞增生，而后逐漸變厚。淋巴濾泡中單核細(xì)胞聚集，粘液腺增生。氣管粘液腺長(zhǎng)而狹小伸展入整個(gè)變厚的粘膜中。肺組織有大量單核細(xì)胞和嗜異性細(xì)胞浸潤(rùn)。滑液囊表面細(xì)胞增生，滑液囊和臨近組織單核細(xì)胞浸潤(rùn)，淋巴濾泡形成。關(guān)節(jié)液中可出現(xiàn)大量嗜異細(xì)胞。（五)診斷雞毒支原體病非是特有的，其他一些呼吸道疾病也能出現(xiàn)類似的癥狀。因此，這些癥狀的出現(xiàn)只能說(shuō)明支原體感染的可能性，確實(shí)的診斷必須進(jìn)行剖解檢查、血清學(xué)檢測(cè)和病原分離。將這些檢查結(jié)果共同考慮分析，始能作出最后確診。血清學(xué)反應(yīng)：最常的血清學(xué)反應(yīng)是平板凝集反應(yīng)、試管凝集反應(yīng)、血凝抑制試驗(yàn)和酶免疫吸附檢測(cè)（ELISA)等四種。平板凝集反應(yīng)是最常使用的一種快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)方法�？乖话闶侵摹Ｔ�20℃以上室溫中將被檢血清0．025－0．03ml滴于白色瓷板或下面墊有白色的玻璃板上，滴加等量抗原，以細(xì)棒或牙簽快速攪拌，上下傾斜轉(zhuǎn)動(dòng)使二者充分混合，在2min內(nèi)如出現(xiàn)背景清亮明顯的凝集顆粒，則為陽(yáng)性反應(yīng)，否則為陰性反應(yīng)。經(jīng)過(guò)凍結(jié)或在冰箱中經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期保存之后血清、受到傳染性法氏囊病毒感染的
雞血清或使用法氏囊病毒活疫苗免疫的雞血清，以及使用某些滅活疫苗尤其是油佐劑油疫苗后的雞血清，在平板凝集反應(yīng)中常會(huì)出現(xiàn)非特異性陽(yáng)性反應(yīng)。此時(shí)，將血清滅活并用磷酸鹽緩沖液作1：2－1：4的稀釋，可以減少這種假陽(yáng)性反應(yīng)的發(fā)生率。應(yīng)用平板凝集抗原檢測(cè)滑液支原體感染雞血清也經(jīng)常出現(xiàn)非特異反應(yīng)，目前還沒(méi)有消除這種假陽(yáng)性反應(yīng)的良好方法。平板凝集反應(yīng)雖然存在有上述出現(xiàn)非特異反應(yīng)的缺點(diǎn)，但由于其簡(jiǎn)便快速，依然為檢驗(yàn)人員所采用。這種反應(yīng)主要是對(duì)雞群感染情況作出判斷，不適宜作為個(gè)體診斷用。進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需應(yīng)用血清，不能對(duì)全血進(jìn)行檢測(cè)，后者檢出率明顯低下。試管凝集反應(yīng)：將試管凝集反應(yīng)抗原以PH7．1－7．2的石炭酸化磷酸鹽緩沖液20倍稀釋，在小管內(nèi)加入0．08ml被檢血清，加入已稀釋抗原1ml，充分混合后在37℃中過(guò)夜，檢查結(jié)果。上部液體清亮
管底明顯凝集沉淀的為陽(yáng)性反應(yīng)，否則陰性反應(yīng)。血凝抑制試驗(yàn)：是可靠的雞毒支原體感染診斷的方法，常常用來(lái)確定其他方法判斷的結(jié)果。進(jìn)行檢測(cè)時(shí)首先測(cè)定抗原血凝價(jià)，以4個(gè)血凝單位進(jìn)行血凝抑制反應(yīng)。當(dāng)被檢血清在1：80稀釋仍能抑制紅細(xì)胞凝集時(shí)，則為陽(yáng)性反應(yīng)。1：40稀釋能抑制紅細(xì)胞凝集時(shí)，為可疑反應(yīng)。更低時(shí)為陰性反應(yīng)。對(duì)血凝抑制反應(yīng)可疑的病例，在21日后采血再進(jìn)行一次血凝抑制反應(yīng)一般不存在非特異交叉反應(yīng)。可使用微量板進(jìn)行微量血凝抑制反應(yīng)。檢測(cè)血清中抗體的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)國(guó)內(nèi)近年來(lái)也有報(bào)道。這是一種敏感的血清學(xué)檢測(cè)方法，但在特異性上還有待改進(jìn)。有一些特異性反應(yīng)，尤其是應(yīng)用滅活疫苗后的非特異性反應(yīng)，應(yīng)用ELISA似乎還難以排除�？梢允褂寐腰S液代替血清進(jìn)行血凝抑止試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫疫吸附試驗(yàn)。以注射器吸取卵黃液0．05ml置于試管內(nèi)，加入0．5ml磷酸鹽緩沖鹽溶液，充分混合震蕩，在2500rpm中離心沉淀30min，取上清液代替血清進(jìn)行,. 這種抗體液中，卵黃液已用緩沖鹽溶液對(duì)倍稀釋，所以試驗(yàn)中1：40的血凝抑制價(jià)即可作為陽(yáng)性反應(yīng)判斷。有使用瓊脂擴(kuò)散反應(yīng)作為診斷方法報(bào)道。有報(bào)道說(shuō)，用親和素－生物素斑點(diǎn)免疫結(jié)合檢測(cè)法可提高檢測(cè)的特異性。國(guó)內(nèi)有報(bào)道說(shuō)，用間接法斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫檢測(cè)法（Dot-ELISA)檢測(cè)雞口咽拭子上的雞毒支原體抗原進(jìn)行診斷，結(jié)果與分離病原結(jié)果有80％－90％的符合率，適合于大規(guī)�？乖瓨颖镜臋z測(cè)，可用作疫病早期診斷的依據(jù)和進(jìn)行流行病學(xué)等調(diào)查。在某些多年無(wú)雞毒支原體感染的種雞群中，曾發(fā)現(xiàn)一些28－36周齡雞出現(xiàn)平板凝集試驗(yàn)反應(yīng)陽(yáng)性，但血凝抑制（HI)抗體價(jià)達(dá)不到1：80的反應(yīng)陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，有人認(rèn)為這是由于毒力低微的雞毒支原體變種經(jīng)卵傳播后引起的。相反，國(guó)內(nèi)曾發(fā)現(xiàn)一些感染雞的血清，平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)陰性反應(yīng)，而血凝抑制抗體價(jià)達(dá)到1：80的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于這種現(xiàn)象尚沒(méi)有滿意的解釋。以血清學(xué)反應(yīng)檢測(cè)時(shí)，都應(yīng)同進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照血清與陰性對(duì)照血清的對(duì)比檢測(cè)。病原支原體的分離：分離病原支原體是一種可靠的診斷方法。分離病原時(shí)必須有適于病原生長(zhǎng)發(fā)育的培養(yǎng)基。這種培養(yǎng)基成分復(fù)雜，有種種不同的處方。一般都含有牛心浸液、酵母浸液，馬血清或
豬血清、葡萄糖、酚紅、青霉素與醋酸鉈。其中，血清提供固醇和脂肪酸，葡萄糖提供能源，酚紅有助于觀察PH變化，青霉素和醋酸鉈控制細(xì)菌和霉菌污染。下列處方雖已舍棄牛心浸液，但用于分離雞源支原體，其中包括雞毒支原體，效力頗為滿意�；A(chǔ)液： NaCl 5gkcl 0.4gmgso4.7h2o 0.2gna2hpo4 1.6gkh2po4 0.1g葡萄糖 10．0g乳蛋白水解物（difco) 5.0g去離子水 1000ml以上各物溶解后在115℃中滅菌20min，置冰箱中備用。培養(yǎng)基配制：基礎(chǔ)液 860ml豬血清（56℃滅能30min) 120ml煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（即輔酶I，NAD)，1％溶液 10mll－鹽酸半
胱氨酸，1％溶液 10ml精氨酸鹽酸鹽，10％ 20ml酵母自溶物或酵母浸液，25％ 10ml青霉素 1000單位／ml醋酸鉈（1／80) 10ml酚紅，1％ 1－2ml以N/1NaOH調(diào)整PH達(dá)7．4以上各物質(zhì)中酵母液、酚紅和醋酸鉈溶液用115℃滅菌20min保存于冰箱中備用。輔酶I、半胱氨酸和精氨酸溶液用0．45um濾膜濾過(guò)，除菌后置于－20℃中保存?zhèn)溆谩ＥR配制前10min凈融化的輔酶I溶液和半胱氨酸溶液混合后加入培養(yǎng)基中。豬血清可用馬血清代替，不論哪種血清在使用前都應(yīng)當(dāng)預(yù)先經(jīng)過(guò)對(duì)支原體生長(zhǎng)發(fā)育的支持能力檢測(cè)，選擇支持能力良好的血清使用。配制溶液用水應(yīng)為無(wú)離子水或玻璃雙蒸餾水。液體培養(yǎng)基分裝于螺絲帽試管中或加橡皮塞試管中。固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基中加入高質(zhì)量瓊脂（Noble agar)制成，瓊脂含量1％－1．2％。半固體培養(yǎng)基中含量為0．2％－0．5％。用于分離培養(yǎng)支原體的材料常用的有：氣管、肺、氣囊、鼻竇分泌物等。分泌物可直接接種于培養(yǎng)基中培養(yǎng)，臟器組織可剪成小粒投入培養(yǎng)基內(nèi)，在37℃中培養(yǎng)。一般在接種的第2天，液體培養(yǎng)基變黃色，這種顏色的改變不是由于支原體的發(fā)育所致，而是組織中產(chǎn)酸的關(guān)系。支原體對(duì)酸敏感，在酸性環(huán)境中死亡很快，所以必須立即移植于新鮮培養(yǎng)基內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)物如果在5天左在不風(fēng)顏色變化則再移植，有時(shí)這樣
盲目移植接種3－4次，才能出現(xiàn)顏色變化。如果顏色由紅變黃，則可能是發(fā)酵葡萄糖的支原體生長(zhǎng)；如果由紅變紫，則可能是水解精氨酸的支原體生長(zhǎng)。雞毒支原體是發(fā)酵葡萄糖的。如果經(jīng)過(guò)3－4次移植都不呈現(xiàn)顏色變化，可以認(rèn)為無(wú)支原體生長(zhǎng)。在固體培養(yǎng)時(shí)，是將加有組織小塊的液體培養(yǎng)物或盲目傳代的或已變色的液體培養(yǎng)物滴1－2滴于平板表面上，轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使之鋪滿表面，放在有5％
二氧化碳的潮濕環(huán)境中培養(yǎng)，1周后在擴(kuò)大鏡下檢查有無(wú)菌落生長(zhǎng)。最初的一二代菌落經(jīng)常不呈現(xiàn)曲型的“煎蛋狀”形態(tài)，常須經(jīng)過(guò)幾次移植后才有典型菌落生成。有支原體生長(zhǎng)后，須用抗雞毒支原體血清對(duì)分離物進(jìn)行血清學(xué)鑒定。常用的血清學(xué)方法有：生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)、代謝抑制試驗(yàn)、表面熒光抗體試驗(yàn)。也可以利用血細(xì)胞吸附抑制試驗(yàn)進(jìn)行快速鑒定。從發(fā)病雞一般都能分離出雞毒支原體。無(wú)癥狀的血清學(xué)反應(yīng)陽(yáng)性雞體內(nèi)也可以分離出雞毒支原體，只是分離率比較低。甚至從血清學(xué)反應(yīng)陰性雞中還是有可能分離到的，不過(guò)分離率就更低了。鑒別診斷：由于雞毒支原體病的外表癥狀并不是特有的，所以當(dāng)雞群出現(xiàn)呼吸道癥狀時(shí)，要注意與新城疫、傳染性支氣管炎、傳染性鼻炎、滑液支原體感染以及雞
霍亂的鑒別診斷，火雞出現(xiàn)竇炎時(shí)要注意與
衣原體感染的鑒別診斷。鑒別診斷時(shí)有的可以應(yīng)用血清學(xué)方法，有的可用病原分離的方法。治療：在病初可以試用一些對(duì)支原體有抑制作用的抗生素進(jìn)行治療，抗生素可以拌在飼料內(nèi)或者經(jīng)過(guò)飲水投眼，也可以注射。土霉素和
四環(huán)素的用量為每噸飼料400g；泰樂(lè)菌素為每4．5L水內(nèi)加2－3g；北里霉素為每噸飼料內(nèi)300－500g。泰妙菌素（支原體凈是泰妙菌素的種制劑)飲水含量為120－500mg／L，不論飲水或飲料拌服都要連用幾天。如果投藥效果不良，就要考慮并發(fā)病的問(wèn)題，或者是病原株對(duì)所作用的抗生素具有抗藥性關(guān)系。（六)防制措施目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有培育成無(wú)支原體感染的種雞群，可以說(shuō)所有雞場(chǎng)都存在著雞支原體感染，在正常情況下不出現(xiàn)明顯癥狀。一旦因不利因素應(yīng)激，就可能暴發(fā)疾病引起死亡。所以平時(shí)一定要作好飼養(yǎng)管理，提供平衡飼料，注意清潔衛(wèi)生，合內(nèi)不準(zhǔn)積水，籠內(nèi)不擁擠，避免名種應(yīng)激因素。1．疫苗接種 疫苗接種是一種減少支原體感染的有效方法。疫苗有兩種弱毒活疫苗和滅活疫苗。弱毒活疫苗：目前國(guó)際上和國(guó)內(nèi)使用的活疫苗是F株疫苗。F株致病力極為輕微，給1日齡、3日齡和20日齡雛雞滴眼接種不引起任何可見(jiàn)癥狀或氣囊上變化，不影響增重。與新城疫活疫苗B1或LaSota株同時(shí)接種，既不增強(qiáng)彼此的致病力也不影響各自的免疫作用。免疫保護(hù)力在85％以上，免疫力至少待續(xù)7個(gè)月。國(guó)外有報(bào)道，接受活疫苗免疫接種的雞群產(chǎn)卵率高于未接種疫苗的雞群，平均每只產(chǎn)卵雞多產(chǎn)卵7個(gè)。有人提出，在一個(gè)雞場(chǎng)內(nèi)邊疆應(yīng)用F株疫苗后，場(chǎng)同 毒支原體野外株感染可以逐漸為F株所代替。滅活疫苗：油佐劑滅活疫苗效果良好，用后能防止本病的發(fā)生并減少誘發(fā)其他疾病，增加雞蛋產(chǎn)量。國(guó)外有報(bào)道，邊疆使用兩個(gè)代次的雞，可以清除群內(nèi)支原體感染。但也有人報(bào)道，效果并不如此明顯。2．清除種卵內(nèi)雞毒支原體 經(jīng)卵傳播是雞毒支原體的一條重要的傳播途徑，阻斷這什么樣途徑對(duì)防治疾病有著重要的意義，是培育無(wú)支原體雞群的基礎(chǔ)。有兩種方法可以用來(lái)降低或消除卵支原體：抗生素處理法與加熱法�？股靥幚恚簩⒎趸暗姆N卵溫到37℃而后立即放入5℃左右的對(duì)支原體有抑制作用的抗生素溶液中15－20min；也可以將卵放在密閉容器抗生素溶液中，抽出部分空氣，而后現(xiàn)再徐徐放入空氣使藥液進(jìn)入卵內(nèi)；也有將抗生素溶液注射入卵內(nèi)的。這類方法的缺點(diǎn)是：清除卵內(nèi)有報(bào)道，以支原凈（泰妙霉素制劑)，
紅霉素和
氯霉素的8×10－4溶液處理后，和支原凈處理后只比不處理的對(duì)照降低32個(gè)百分點(diǎn)，紅霉素處理降低3－21個(gè)百分點(diǎn)，氯霉素?zé)o效與不處理的對(duì)照完全相同。處理后的孵化率降低8％。加熱法：對(duì)孵化器中的種蛋，壓入熱空氣，使溫度在12－14h內(nèi)均勻上升到46．1℃，而后移入正常孵化溫度中孵化，可以收到比較滿意的消滅卵內(nèi)支原體的效果，但種卵孵化北下降8－12％。國(guó)內(nèi)報(bào)道，應(yīng)用恒溫45℃的溫箱處理種蛋14h，而后轉(zhuǎn)入正常孵化，收到相當(dāng)?shù)南麥缏褍?nèi)支原體的效果，只要溫度控制適宜，對(duì)孵化率沒(méi)有明顯影響。對(duì)其他傳染性疾病進(jìn)行預(yù)防接種活疫苗時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格選擇無(wú)支原體污染的疫苗。許多病毒性活疫苗中常常有致病性支原體的污染，雞由于接種這種疫苗而受到感染，所以選擇無(wú)污染活疫苗也是一種極為重要的預(yù)防措施。3．培育無(wú)支原體感染雞群 雞支原體感染雖然極為普遍，但是利用支原體對(duì)不利環(huán)境、藥物和溫度的脆弱性，可以培育成功無(wú)支原體感染雞群。有報(bào)道，無(wú)支原體感染雞群每只母雞比普通雞群雞平均多生產(chǎn)0．5－1kg蛋。飼養(yǎng)無(wú)支原體感染雞在經(jīng)濟(jì)上頗為有利。培育無(wú)支原體感染雞的主要程序如下。（1)以有抑制作用的抗生素處理種雞，降低母雞的支原體帶菌率和帶菌強(qiáng)度，從而降低蛋的污染率和污染強(qiáng)度。（2)用45℃經(jīng)14h處理種蛋，消滅蛋中的支原體。（3)種蛋小批量孵化，每批100－200只，減少孵出的雛雞相互之間可能的傳染機(jī)會(huì)。（4)小群分群飼養(yǎng)，定時(shí)進(jìn)行血清學(xué)檢查，一旦出現(xiàn)確實(shí)的陽(yáng)性反應(yīng)雞，立即凈小群淘汰。（5)在進(jìn)行全部程序時(shí)，要做好孵化箱、孵化室、用具、房舍等的消毒和隔離的工作，防止外來(lái)感染群內(nèi)。由這種程序育成的雞群，在產(chǎn)蛋前全部進(jìn)行血清學(xué)檢查一次，必須是無(wú)陽(yáng)性反應(yīng)群才能用作種雞。當(dāng)完全陰性肥應(yīng)親代雞群所產(chǎn)生的蛋，不經(jīng)過(guò)藥物或熱力處理孵出的子代雞群，經(jīng)過(guò)幾次檢測(cè)都未出現(xiàn)一只陽(yáng)性反應(yīng)雞后，可以認(rèn)為已建立成無(wú)支原體感染群。
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