免疫學(xué)和免疫學(xué)檢驗(yàn):第一節(jié)　中性粒細(xì)胞功能的檢測(cè)

（一)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)功能的檢測(cè)

小吞噬細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)可以分成隨機(jī)運(yùn)動(dòng)和定向運(yùn)動(dòng)，前者類似于布朗運(yùn)動(dòng)。檢測(cè)方法是將采集的白細(xì)胞懸液滴于玻片上，用光學(xué)顯微鏡直接觀察其運(yùn)動(dòng)。也可用毛細(xì)血管法將細(xì)胞懸液裝入硅化毛細(xì)血管中，稍加離心，使細(xì)胞沉積在一端，切去無(wú)細(xì)胞的毛細(xì)血管段，繼而移放在含細(xì)胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)小瓶中，37℃溫育18～20h，游動(dòng)的細(xì)胞將從毛細(xì)血管內(nèi)外移，在管口形成一細(xì)胞團(tuán)，根據(jù)細(xì)胞面積可判斷受檢中性粒細(xì)胞活動(dòng)的強(qiáng)弱。某些患者中性粒細(xì)胞的任意運(yùn)動(dòng)明顯減弱，甚至消失。中性粒細(xì)胞的定向運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)為趨化運(yùn)動(dòng)，測(cè)定方法有多種，其原理相同，而方法大同小異，常用以下兩法：

1．Boyden小室法又稱濾膜小室法，采用特殊的小盒裝置，盒中以一片3～5μm孔徑的微孔濾膜將盒分為上下兩小室。上室加受檢的白細(xì)胞懸液；下室加細(xì)菌菌體或其產(chǎn)物、酵母菌活化的血清等趨化因子。置37℃溫育數(shù)小時(shí)。上室中的中性粒細(xì)胞因受下室內(nèi)趨化因子的招引，使細(xì)胞由濾膜微孔進(jìn)入濾膜內(nèi)，最后取濾膜，經(jīng)固定、干燥、著染、脫色等步驟，將透明后的濾膜置油鏡下檢測(cè)細(xì)胞在膜內(nèi)通過的距離，求其趨化單位。

2．瓊脂糖凝膠平板法將含小牛血清的1％瓊脂糖傾到在玻片或平皿中制成凝膠平板，繼而按圖22-1打孔，每三孔為一組，中央孔加細(xì)胞懸液，兩側(cè)孔分別加趨化因子或?qū)φ张囵B(yǎng)液，經(jīng)37℃溫育2～3h后，用2％戊二醛固定，移去瓊脂糖層，經(jīng)染色后，測(cè)量細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的距離，按下式計(jì)算移動(dòng)指數(shù)。

移動(dòng)指數(shù)＝趨化移動(dòng)距離／任意移動(dòng)距離

圖22-1 瓊脂糖平皿法打孔譜型

（二)吞噬和殺菌功能的檢測(cè)

檢測(cè)原則是將受檢細(xì)胞懸液按一定比例混和，繼加活的白色念珠菌懸液，保溫生，加美藍(lán)payment-defi.com/yaoshi/溶液作活體染色，取樣涂片鏡檢。如胞內(nèi)白色念珠菌呈藍(lán)色，表示該菌已被殺死，共計(jì)100200個(gè)細(xì)胞，分別求其吞噬率和殺菌率。

溶細(xì)胞法更能直接反映細(xì)胞殺菌的情況，將受檢的細(xì)胞懸液與一定量已經(jīng)新鮮人血清調(diào)理過的大腸桿菌或金黃色葡萄球菌懸液混合后，置37℃，每隔一定時(shí)間取定量培養(yǎng)物，稀釋后接種固體平板培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18h后，計(jì)算菌落數(shù)，據(jù)以計(jì)算中性粒細(xì)胞的殺菌能力：

正常情況下，對(duì)大腸桿菌的殺菌率約為90％，對(duì)金黃色葡萄球菌的殺菌率約為85％。

在臨床常用的硝基四氮唑藍(lán)（NBTpayment-defi.com/zhicheng/)還原試驗(yàn)，本法用以檢測(cè)中性粒細(xì)胞的胞內(nèi)殺菌能力，由于中性粒細(xì)胞在殺菌過程中能量消耗劇增，耗氧量亦隨之相應(yīng)增加，磷酸己糖旁路代謝活力增強(qiáng)，葡萄糖6-磷酸氧化脫氫，此時(shí)加入NBT可接受所脫的氫，使原先呈淡黃包的NBT還原成點(diǎn)狀或塊狀甲朊顆粒并沉積在胞漿內(nèi)。NBT還原反應(yīng)式如下：

近此年來還采用了新穎的化學(xué)發(fā)光法，中性粒細(xì)胞在吞噬經(jīng)調(diào)理的金黃色葡萄球菌過程中，伴有化學(xué)發(fā)光的產(chǎn)生，故可用化學(xué)發(fā)光儀測(cè)定中性粒細(xì)胞的吞噬功能及其代謝活性。實(shí)驗(yàn)證明全血化學(xué)發(fā)光試驗(yàn)可同時(shí)獲得兩種信息，即中性粒細(xì)胞的吞噬功能、代謝活性及受檢血清的調(diào)理功能。由于中性粒細(xì)胞的氧代謝活性與對(duì)細(xì)胞的吞噬率密切相關(guān)，殺菌能力與發(fā)光強(qiáng)度相平行，因此化學(xué)發(fā)光法可檢測(cè)細(xì)胞殺菌功能。因此吞噬細(xì)胞化學(xué)發(fā)光測(cè)定法可用以研究中性粒細(xì)胞的吞噬功能，代謝活性和血清調(diào)理功能，它可在生理溫度和中性環(huán)境下測(cè)定，能較好地反映生理?xiàng)l件下吞噬細(xì)胞的功能，具有準(zhǔn)確靈敏、樣品用量少，簡(jiǎn)便快速等優(yōu)點(diǎn)。其敏感性高于NBT還原試驗(yàn)。