網(wǎng)站首頁(yè)
醫(yī)師
藥師
護(hù)士
衛(wèi)生資格
高級(jí)職稱
住院醫(yī)師
畜牧獸醫(yī)
醫(yī)學(xué)考研
醫(yī)學(xué)論文
醫(yī)學(xué)會(huì)議
考試寶典
網(wǎng)校
論壇
招聘
最新更新
網(wǎng)站地圖
中醫(yī)理論中醫(yī)臨床診治中醫(yī)藥術(shù)語(yǔ)標(biāo)準(zhǔn)中國(guó)方劑數(shù)據(jù)庫(kù)中醫(yī)疾病數(shù)據(jù)庫(kù)OCT說明書不良反應(yīng)中草藥圖譜藥物數(shù)據(jù)藥學(xué)下載
您現(xiàn)在的位置: 醫(yī)學(xué)全在線 > 中醫(yī)理論 > 中醫(yī)書籍 > 正文:凍干流行性乙型腦炎活疫苗制造及檢定規(guī)程
    

中國(guó)生物制品規(guī)程:凍干流行性乙型腦炎活疫苗制造及檢定規(guī)程

本品系將流行性乙型腦炎(下稱乙腦)SA14-14-2減毒株病毒接種于原代地鼠腎單層細(xì)胞,經(jīng)培育后收獲病毒液,加保護(hù)劑凍干制成。用于預(yù)防乙腦。1 毒種1.1 毒種來源乙腦SA14-14-2減毒株病毒。由中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定與分發(fā)。該毒株經(jīng)用乙腦敏感動(dòng)物試驗(yàn)證明其嗜神經(jīng)…

本品系將流行性乙型腦炎(下稱乙腦)SA14-14-2減毒株病毒接種于原代地鼠腎單層細(xì)胞,經(jīng)培育后收獲病毒液,加保護(hù)劑凍干制成。用于預(yù)防乙腦。

1 毒種

1.1 毒種來源

乙腦SA14-14-2減毒株病毒。由中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定與分發(fā)。

該毒株經(jīng)用乙腦敏感動(dòng)物試驗(yàn)證明其嗜神經(jīng)毒力減弱,經(jīng)檢查無外源因子存在,用乙腦特異性免疫血清做中和試驗(yàn)證實(shí)為乙腦病毒,并經(jīng)免疫力試驗(yàn)證明具有免疫原性,經(jīng)臨床觀察證明安全有效。

1.2 生產(chǎn)毒種批制備

毒種啟封后,在地鼠腎單層細(xì)胞上增殖傳遞,傳遞代數(shù)不得超過3代。從原始毒種算起,總代數(shù)不是超過10代。在傳代細(xì)胞病變明顯時(shí)收獲病毒液,經(jīng)檢定合格后為生產(chǎn)毒種批。

1.3 毒種檢定

1.3.payment-defi.com/yaoshi/1 無菌試驗(yàn)

按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

1.3.2 支原體檢查

按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

1.3.3 病毒滴定

抽樣品做10倍系列稀釋,取10-4、10-5、10-6三個(gè)稀釋度的病毒液,分別接種BHK21細(xì)胞,用蝕斑法進(jìn)行滴定,病毒滴度≥7.2LogPFU/1.0ml為合格。凍干毒種批的滴度≥5.7LogPFU/1.0ml為合格。做病毒滴定同時(shí)應(yīng)用參考苗進(jìn)行滴定,以判斷試驗(yàn)結(jié)果是否成立。

1.3.4 純毒試驗(yàn)

生產(chǎn)毒種批與非同源性乙腦高價(jià)免疫血清混合,置37℃90分鐘,接種地鼠腎單層細(xì)胞或BHK21細(xì)胞進(jìn)行中和試驗(yàn),觀察5~7天判定結(jié)果。乙腦病毒完全被中和(無細(xì)胞病變或蝕斑出現(xiàn))為合格,如仍有病變或蝕斑出現(xiàn),應(yīng)按上述方法再行中和。

1.3.5 腦內(nèi)致病力試驗(yàn)

生產(chǎn)毒種批原液接種體重12~14g小白鼠10只,每只腦內(nèi)注射0.03ml,接種后3天內(nèi)死亡者不計(jì),觀察14天應(yīng)活存。3天后如有小白鼠發(fā)病,應(yīng)殺死取腦測(cè)定致病力,對(duì)小白鼠的腦內(nèi)毒力不應(yīng)超過3.0LogLD50/0.03ml,同時(shí)小白鼠皮下注射0.1ml10-1病鼠腦懸液進(jìn)行皮下致病力試驗(yàn),觀察14天,應(yīng)健存。

1.3.6 皮下感染人腦試驗(yàn)

生產(chǎn)毒種批原液接種體重10~12g小白鼠10只,每只皮下注射0.1ml,同時(shí)右側(cè)腦內(nèi)空刺,觀察14天,應(yīng)健存。

1.3.7 乳鼠傳代返祖試驗(yàn)

生產(chǎn)毒種批原液接種3~5日齡乳鼠10只,每只腦內(nèi)注射0.02ml。將發(fā)病的乳鼠殺死3只,解剖取腦測(cè)其致病力,用體重12~14g小白鼠測(cè)定,腦內(nèi)毒力不應(yīng)超過3.0LogLD50/0.03ml,同時(shí)皮下注射10只小白鼠,每只0.1ml10-1乳鼠腦懸液,觀察14天,應(yīng)健存。

1.3.8 外源因子檢查

生產(chǎn)毒種批經(jīng)非同源性乙腦高價(jià)免疫血清中和后,進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)。樣品分別接種人二倍體細(xì)胞、BHK21細(xì)胞、原代地鼠腎細(xì)胞,于33~35℃進(jìn)行培育,同時(shí)做對(duì)照培育。培育7、14天細(xì)胞應(yīng)無病變,分別進(jìn)行次代培育和血吸附試驗(yàn);次代培育7、14天時(shí)亦分別觀察細(xì)胞病變和進(jìn)行血吸附試驗(yàn)。結(jié)果均無細(xì)胞病變并血吸附試驗(yàn)陰性為合格。

血吸附試驗(yàn)方法:觀察到期的細(xì)胞,用0.2%~0.5%雞、豚鼠紅細(xì)胞混合液于4~8℃、20~25℃中依次進(jìn)行血吸附檢查。所用紅細(xì)胞于2~8℃保存應(yīng)不超過7天。

1.3.9 細(xì)胞基質(zhì)外源因子檢查

制備生產(chǎn)用種子批的細(xì)胞留取5%~10%不種毒,更換相應(yīng)的維持液,置33~35℃培育。在培育7、14天時(shí),鏡下觀察無細(xì)胞病變后分別做血吸附試驗(yàn)(方法同1.3.8項(xiàng))。細(xì)胞無病變并血吸附試驗(yàn)陰性為合格。

1.4 生產(chǎn)毒種批保存

液體生產(chǎn)毒種批于-60℃保存不超過6個(gè)月可用于生產(chǎn);凍干生產(chǎn)毒種批于-20℃以下保存2年內(nèi)可用于生產(chǎn)。

2 疫苗制造

2.1 細(xì)胞制備

2.1.1 地鼠

選用10~14日齡健康地鼠,解剖取腎。如發(fā)現(xiàn)腎臟異;蛴腥槊訝腹水,應(yīng)廢棄。

2.1.2 疫苗生產(chǎn)過程中不得使用青毒素或其他β內(nèi)酰胺類抗生素。

2.1.3 細(xì)胞消化及培養(yǎng)

解剖取出腎臟后剪成碎塊,用適量的胰蛋白酶液消化,將分散后的細(xì)胞懸液種入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),加入生長(zhǎng)液,置36~37℃培養(yǎng)。細(xì)胞生長(zhǎng)成致密單層即可接種病毒。

2.1.4 外源因子檢查

每批細(xì)胞留取5%~10%不接種病毒,加入與生產(chǎn)相同維持液后置33~35℃培育14天。在培育7、14天時(shí)分別做血吸附試驗(yàn)(方法同1.3.8項(xiàng))。在觀察期內(nèi)細(xì)胞無病變并血吸附試驗(yàn)陰性為合格。如細(xì)胞出現(xiàn)病變或血吸附試驗(yàn)陽(yáng)性,由該批細(xì)胞制備的病毒原液應(yīng)廢棄。

2.2 病毒接種和培育

挑選長(zhǎng)成致密單層的細(xì)胞,用洗液充分洗滌后加適量維持液,病毒接種量為2.7~3.7LogPFU/1.0ml,置35~36℃培育。

2.3 原液

2.3.1 收獲病毒液

種毒后培育72小時(shí)以上,細(xì)胞出現(xiàn)明顯病變時(shí)收獲病毒液,澄清過濾后為原液。

2.3.2 原液檢定

2.3.2.1 無菌試驗(yàn)

每瓶原液分別取樣做無菌試驗(yàn),樣品種入硫乙醇酸鹽、乙良馬丁和肝斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)8天判定結(jié)果。

2.3.2.2 支原體檢查

按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程payment-defi.com/wszg/》進(jìn)行。

2.3.2.3 純毒試驗(yàn)

每一消化批應(yīng)抽樣進(jìn)行純毒試驗(yàn)。方法同1.3.4項(xiàng)。

2.3.2.4 病毒滴定

方法同1.3.3項(xiàng)。滴度≥7.2LogPFU/1.0ml為合格。

2.4 疫苗半成品

2.4.1 疫苗混合

檢定合格的原液合并后,加適宜保護(hù)劑。每批疫苗量應(yīng)不超過15萬ml。

2.4.2 無菌試驗(yàn)

按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行

2.4.3 分裝和凍干

疫苗應(yīng)在冰浴下進(jìn)行分裝,采用適宜的凍干條件進(jìn)行凍干。出柜后應(yīng)在15℃以下進(jìn)行封口。

3 成品檢定

3.1 外觀檢查

凍干疫苗應(yīng)為淡黃色疏松體。如稀釋液后迅速溶解,溶解后應(yīng)為橘紅色透明液體,無異物。

3.2 殘余水分含量

凍干疫苗殘余水分應(yīng)≤3.5%。

3.3pH值

凍干疫苗用蒸餾水復(fù)溶后,pH值應(yīng)為7.2~8.0。

3.4 病毒滴定

方法同1.3.3項(xiàng)。病毒滴度≥5.7LogPFU/1.0ml為合格。

3.5 熱穩(wěn)定性試驗(yàn)

凍干疫苗置37℃7天后進(jìn)行滴定(方法同1.3.3項(xiàng)),滴度下降不應(yīng)超過1.0LogPFU/ml。

3.6 無菌試驗(yàn)

按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。

3.7 安全試驗(yàn)

3.7.1 腦內(nèi)致病力試驗(yàn)

方法及判定標(biāo)準(zhǔn)同1.3.5項(xiàng)。

3.7.2 皮下感染入腦試驗(yàn)

方法及判定標(biāo)準(zhǔn)同1.3.6項(xiàng)。

3.7.3 乳鼠傳代返祖試驗(yàn)。

方法及判定標(biāo)準(zhǔn)同1.3.7項(xiàng)。

3.8 毒性試驗(yàn)

凍干疫苗每支加稀釋液2.5ml溶解復(fù)原后,用體重12~15g小白鼠4只,每只腹腔注射0.5ml。注射后密切觀察,30分鐘內(nèi)不應(yīng)有異常反應(yīng),觀察3天應(yīng)健存。

3.9 殘余牛血清蛋白含量

凍干疫苗每支加稀釋液2.5ml溶解復(fù)原后,殘余牛血清蛋白含量≤50ng/ml為合格。

4 疫苗稀釋液

pH7.4~7.6滅菌磷酸鹽緩沖生理鹽水。每支安瓿2.5ml。

5 保存與效期

疫苗自凍干后病毒滴定合格之日起,在8℃以下保存效期為1年半,在-20℃保存效期為2年。

...
關(guān)于我們 - 聯(lián)系我們 -版權(quán)申明 -誠(chéng)聘英才 - 網(wǎng)站地圖 - 醫(yī)學(xué)論壇 - 醫(yī)學(xué)博客 - 網(wǎng)絡(luò)課程 - 幫助
醫(yī)學(xué)全在線 版權(quán)所有© CopyRight 2006-2046, MED126.COM, All Rights Reserved
皖I(lǐng)CP備06007007號(hào)
百度大聯(lián)盟認(rèn)證綠色會(huì)員可信網(wǎng)站 中網(wǎng)驗(yàn)證