由于幽門(mén)螺桿菌（H.pylori，Hp)人群感染率高，在正常人群中往往也存在一定的抗Hp抗體滴度，在抗體測(cè)定中因選擇的陰性參考血清不同，各檢驗(yàn)單位間的資料沒(méi)有可比性，同時(shí)也不利于病人抗Hp治療后對(duì)其抗體滴度變化的觀察。本實(shí)驗(yàn)在大量人群資料和實(shí)驗(yàn)室資料的基礎(chǔ)上，確定了抗Hp尿素酶抗體檢測(cè)中的陽(yáng)性判斷界值，建立了此抗體檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)，完成了標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中特異性抗Hp尿素酶抗體的定量工作。
1 材料和方法
1.1 材料
抗Hp抗體陽(yáng)性及陰性血清各50份，經(jīng)payment-defi.com/wszg/實(shí)驗(yàn)室酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA)和免疫印跡分析（Western blots)證實(shí)。10736份其它血清采自北京和河南的四個(gè)人群現(xiàn)場(chǎng)。Hp尿素酶抗原（HpU)由本實(shí)驗(yàn)室分離純化。酶標(biāo)板采用美國(guó)Linbro/Titertek酶標(biāo)板。IgG標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)自百泰生物技術(shù)公司，為日本北里研究所產(chǎn)品，IgG含量為15.5g/L。參考血清由多份抗Hp抗體陽(yáng)笥血清混合而成。
1.2 方法
①用6μgHpU/孔包被酶標(biāo)板。用常規(guī)ELISA方法測(cè)定各血血中的抗Hp抗體，用Linbro/Titertek酶標(biāo)儀讀取各孔吸光度（A)[舊稱光密度（OD)下同]，用參考血清作板間校正后，用Foxpo及EPI軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析處理，確定血清抗Hp菌IgG抗體檢測(cè)結(jié)果與臨床Hp感染的高符后率判斷界值。②用100～0.001μgIgG標(biāo)準(zhǔn)品/孔不同濃度包被酶標(biāo)板（每種濃度包被3孔)，用ILISA方法測(cè)定IgG標(biāo)準(zhǔn)品的結(jié)合量，觀察IgG標(biāo)準(zhǔn)品可全部結(jié)合時(shí)的適宜包被濃度用IgG標(biāo)準(zhǔn)品被量與吸光度（A)間存在線性關(guān)系的范圍。③用過(guò)量payment-defi.com/zhicheng/抗原（300μgHpU/孔)包被酶標(biāo)板，將能考血清按1：20～1280倍比稀釋后，用常規(guī)ELISA方法測(cè)定各稀釋血清中的抗HpU抗體（每滴度測(cè)定6孔)，用Linbro/Titertek酶標(biāo)儀讀取各孔吸光度（A)，繪制不同滴度與吸光度（A)間存在線性關(guān)系的范圍內(nèi)，采用三點(diǎn)計(jì)算參考血清中抗HpU特異性抗體的含量，并按其均值推算標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中特異性抗HpU抗體的含量。
2 結(jié)果
統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，用參考血清及吸光度（A)的0.77倍[即將參考血清稀釋3.74倍時(shí)的吸光度（A)]作為判斷待測(cè)血清的陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，達(dá)到最高的檢測(cè)符合率，此時(shí)對(duì)100份抗幽門(mén)螺桿菌抗體陽(yáng)性及陰性血清的檢測(cè)符合率為100％。
IgG標(biāo)準(zhǔn)品可全部結(jié)合時(shí)的適宜包被濃度為≤0.2μgIgG標(biāo)準(zhǔn)品/孔，IgG標(biāo)準(zhǔn)品包被量與吸光度（A)間存在線性關(guān)系的范圍為包被濃度為0.2～0.01μgIgG標(biāo)準(zhǔn)品/孔。
在IgG標(biāo)準(zhǔn)品包被量與吸光度（A)間存在線性關(guān)徑流的范圍內(nèi)，采用三點(diǎn)進(jìn)行參考血清HpU特異性抗體的含量測(cè)定結(jié)果分別為239、248和248μg /ml，平均245μg/ml。依此計(jì)算得出標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中特異性抗HpU抗體的含量為66μg/ml。
3 討論
本實(shí)驗(yàn)在大量人群資料和實(shí)驗(yàn)資料的基礎(chǔ)上，建立了抗體幽門(mén)螺桿菌血清抗體診斷標(biāo)準(zhǔn)，并在國(guó)內(nèi)抗幽門(mén)螺桿菌素酶抗體檢測(cè)中首次采用判斷界值技術(shù)，完成了標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清中特異性抗幽門(mén)螺桿菌尿素酶抗體的定量工作，不但使檢驗(yàn)過(guò)程更加穩(wěn)定，使各檢驗(yàn)單位的資料具有可比性，也使基層單位應(yīng)用目測(cè)判斷結(jié)果也能達(dá)到檢驗(yàn)要求。此標(biāo)準(zhǔn)系統(tǒng)用于慢性胃炎和消化性潰瘍的協(xié)助診斷及流行病學(xué)調(diào)查，在北京天壇醫(yī)院、友誼醫(yī)院、北京腫瘤研究所、首都兒科研究所及廣東、江西、河北、內(nèi)蒙、河南等地的應(yīng)用取得了良好的效果。
