聚合酶鏈反應檢測幽門螺桿菌70例

　　1990年Hoshina等首行應用聚合酶鏈反應（PCR)成功檢出胃粘膜活檢標本內(nèi)的Hp。我院從今年1995的1月份開始，在短短3個月中對70例胃鏡受檢者應用PCR檢測幽門螺桿菌，并采用目前廣泛使用的快速尿素酶試驗作了對比，收到滿意效果，報告如下。

　　1　材料和方法

　　1.1　材料　

　�、偃〔模簩�70例胃鏡受檢者（十二指腸球部潰瘍31例，胃潰瘍2例，胃癌2例，各類胃炎28例，十二指腸球炎7例)均在幽門前區(qū)鉗取組織1～2塊，供尿素酶試驗和PCR檢測。②藥盒深圳愛利國公司提供的1min快速尿素酶試劑檢測Hp，在1min～5min內(nèi)觀看結(jié)果。廈門長城生物工程有限公司提供的幽門螺桿菌DNa PCR診斷試劑盒，測Hp保守區(qū)的DNA片斷，擴增產(chǎn)物為456bp，一步法提取模板，直接擴增，無需分裝。③樣品處理將小塊胃粘膜研磨后用生理鹽水洗滌。1.5萬r/min離心5min，去上清，沉淀用50μl樣品處理液混懸，96℃加熱10min，1.5萬r/min離心5min，取上清8μl加入反應管內(nèi)混勻，置PCR儀，同時和陽性和陰性對照。④PCR擴增94℃加熱300S后進入循環(huán)，94℃—30s，55℃—30s，72℃—60s，共循環(huán)36次，最后72℃保溫300s。取后應產(chǎn)物10μl直接點樣于含溴乙錠瓊脂糖膠板孔中，電泳80V，10min～25min停止電泳，于紫外檢測儀觀看結(jié)果。

表1　兩種方法檢測結(jié)果比較

　　3　討論

　　在眾多檢測Hp感染方法中，PCR具有高效、特異、敏感、簡便、快速和自動化等優(yōu)點，可檢出少至100個細菌的水平，如取材不便還可從胃液和唾液中檢測Hp，是我國進行流行病學研究的理想方法；快速尿素酶觀察的時間尚需作嚴格規(guī)定，過快可致假陰性，過長又易產(chǎn)生尿素酶污染菌致假陽性，認為本組織果不能排除此類因素。

李延年　劉先賢

武漢市東西湖區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科（430071)