（四)載片的包被（粘貼)
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（1)多聚賴氨酸(poly-L-Lycine,PLL)
儲備液（0～5%)
按上述劑量充分混合，即為濃度為5mg/ml(0.5%)的PLL液。常分裝成1ml的包裝，-20℃存放。該液為儲備液，可反復(fù)凍融，無明顯影響。用前充分混合。
工作液（0.01%)：
充分混合，靜止待氣泡消失。
�。�2)明膠液
配法：先稱取明膠溶于500～800ml DEPC水中，加熱攪拌助溶，待明膠完全溶解以后，加入甲明礬溶解后即可使用。注意，包被玻片時，明膠液溫度最好保持在60℃左右，效果最佳。方法同PLL包被玻片。
2．多聚賴氨酸包被玻片的制備方法（其它包被劑相同)
�。�1)將事先準(zhǔn)備好的經(jīng)160℃以上烘烤，并冷卻至室溫的玻片（載片或蓋片)，在0.05%（也有用0.1%)的PLL液中上下浸蘸幾下，分散開豎放在架子上，于空氣中自然干燥，4℃?zhèn)溆�。注意：①浸蘸時，務(wù)必使整個玻片完全浸于液體中，否則，包被不完全會產(chǎn)生標(biāo)本脫落現(xiàn)象；②干燥過程中注意避免塵埃污染；③按上法處理的玻片通�？纱娣旁谝欢〞r間（室溫1月以上，4℃更長)，但仍建議盡早使用。
�。�2)多聚賴氨酸1mg溶于10ml滅菌的去離子水或1mmol/L的Tris-HCl緩沖液中（pH7.0)，將其涂布于玻片上，待干燥后即可使用。該法包被的玻片可用于細(xì)胞涂片和切片。
�。�3)將PLL工作液滴至蓋玻片上5μl/片，用另一蓋玻片以推血涂片方法推片，或用另一蓋玻片緊貼于其上，相互磨擦以使兩蓋玻片相對的一面涂布上PLL。該法制備的玻片，只有一面是包被有PLL，故制備時，待其晾干后，應(yīng)作好記號，然后保存后備用。
多聚賴氨酸可用于多種核酸雜交，方法簡單，結(jié)果可靠，有許多其它方法不可比擬的優(yōu)點。配制好的液體可存放于4℃或室溫，但時間過長會解聚而失效，故建議使用時盡量新鮮配制。
（4)Vectabond粘附劑
該試劑是Vector公司新近推出的一種新型粘附劑。它與其它粘附劑的主要區(qū)別是：一般的粘附劑是通過物理性覆蓋在玻片表面，天長日久，可能由于包被不完全或局部脫落而致切片等標(biāo)本易于脫落。而Vectabond試劑是通過化學(xué)性作用，改變玻璃表面的分子結(jié)構(gòu)，使標(biāo)本貼附牢固，不易脫落，且保持時間長久，耗量小，價格便宜，一個包裝7ml可配成350ml工作液使用。操作程序：
標(biāo)本（鋪片、切片等)→丙酮（5min)→Vectabond試劑工作液（5min)→dH2O(2×5min)→干燥（溫箱，數(shù)小時過夜)→用鋁箔包好，室溫備用。
注意：制備和保存過程中避免污染。
經(jīng)上述處理的載玻片一般可存放半年以上（4℃可更長)。
�。ㄎ�)硅魚精子DNA的制備
（1)在50ml滅菌聚乙烯管中加入1g鮭精DNA，加入15ml DEPC水使其浸泡5min至2h；
�。�2)加入2.5ml 2mol/L HCl，室溫放置，DNA形成白色沉淀，充分振搖至沉淀物相互纏繞在一起，用吸頭尖端使之形成一球團狀（2～3min)；
�。�3)加入5.0ml 2mol/L的NaOH。搖動小管使DNA懸浮、溶解，將小管置50℃15min助溶；
（4)用DEPC水將混合物稀釋至175ml（總體積)，充分混合，注意確保管內(nèi)已無顆粒狀；
（5)加入20ml/l 1mol/L的Tris-HCl緩沖液（pH7.4)；
（6)用2mol/L的HCl滴定至DNA溶解pH為7.0～7.5；
�。�7)用無菌微孔濾膜過濾液體，去除顆粒。260nm測定溶液的OD值，方法是：取20μl DNA液混合于980μl水中，混勻后測定，吸收值乘以50即為DNA濃度（μg/ml)；
�。�8)制備好的DNA液儲于-20℃?zhèn)溆茫们叭〕鰞鋈诤笾蠓小?/P>
