第七章 血液系統(tǒng)
第一節(jié) 血液凝固與抗凝
[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯
（1)學(xué)習(xí)用玻片法測(cè)定凝血時(shí)間。
（2)觀察家兔體外血凝、組織因子促凝和肝素抗凝過(guò)程，并分析各個(gè)過(guò)程度產(chǎn)生機(jī)制。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
家兔，體重2.0～2.5kg/只，雌雄不拘。
[藥品、器材]
1． 藥品
蒸餾水、生理鹽水、3%戊巴比妥鈉溶液（或25%氨基甲酸乙酯)、1250單位/ml的低分子量肝素鈉溶液（臨用時(shí)配制)、肺組織浸液（含組織因子)。
肺組織浸液制備方法：取新鮮兔肺，剪成小塊，洗凈血液。磨成糊狀。加入3～4倍的生理鹽水，搖勻放冰箱中過(guò)夜，大濾紙過(guò)濾后，即可得肺組織浸液，保存冰箱備用。
2．器材
兔常用手術(shù)器械一套、兔臺(tái)、兔繩、玻璃分針、動(dòng)脈小尼龍插管、動(dòng)脈夾、縫合線、紗布；注射器：5ml注射器和7號(hào)針頭各4個(gè)
干凈、干燥的玻片：3塊標(biāo)記筆1支干凈、干燥的大頭針3根多功能秒表1個(gè)水浴恒溫箱1個(gè)干凈、干燥的取血小試管1個(gè)
[觀察指標(biāo)]
凝血時(shí)間測(cè)定（小時(shí)： 分鐘： 秒： )
[方法、步驟]
1．實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備
（1)打開(kāi)水浴恒溫箱，灌入適量的自來(lái)水至試管架的平面，恒溫37 ℃。待用。
（2)取干凈、干燥的玻片3塊，編號(hào)，然后將玻片放入水浴恒溫箱的試管架上，加溫至37 執(zhí)業(yè)醫(yī)師℃，注意不要弄濕；
（3)動(dòng)物準(zhǔn)備
兔稱重后，用3%戊巴比妥鈉溶液1ml/kg體重（或25%氨基甲酸乙酯4ml/kg體重)麻醉，注射速度要慢；背位固定，行頸總動(dòng)脈分離術(shù)和尼龍管插管術(shù)（暫不放血)。
（4)按表1中實(shí)驗(yàn)的項(xiàng)目在玻片上分別用不同的5ml注射（安裝7號(hào)針頭)加入相應(yīng)的試劑。注意不要混淆。
表7-1家兔的體外血凝、抗凝和促凝因素對(duì)凝血時(shí)間的影響
| 凝血時(shí)間（小時(shí)： 分鐘： 秒： ) |
| 1號(hào)玻片上加入肺組織浸液1滴： 2號(hào)玻片上加入生理鹽水1滴： 3號(hào)玻片上加入肝素溶液1滴： |
2．凝血時(shí)間測(cè)定和記錄時(shí)間
（1) 取干凈、干燥的小試管1個(gè)，迅速放入動(dòng)脈血2ml（注意：經(jīng)小尼龍管放血時(shí)，第一滴已激活的血液棄掉)；
（2)取血后，立即用5ml注射器（安裝7號(hào)針頭)抽取血液少許，并在每塊玻片的試劑上加入等量的1滴血液，在分別用大頭針混勻（注意不要混淆)的同時(shí)立刻計(jì)時(shí)（注意首先記錄1號(hào)玻片的凝血時(shí)間)。
（3) 每隔10秒，用大頭針在各玻片的血液中，朝一個(gè)方向挑血絲，見(jiàn)到第一個(gè)血絲的出現(xiàn)，立即終止計(jì)時(shí)。從開(kāi)始計(jì)時(shí)到終止計(jì)時(shí)的一段時(shí)間即為玻片法的凝血時(shí)間。請(qǐng)將該時(shí)間記錄到表1中。
[注意事項(xiàng)]
（1)所用玻璃器皿要求干凈、干燥。
（2)專用試劑、大頭針和注射器不要混淆。
（3)計(jì)時(shí)要耐心、細(xì)心、和準(zhǔn)確、因?yàn)榈谝荒z的出現(xiàn)是瞬間的。
（4)可利用第一節(jié)家兔的體外血凝、促凝和抗凝實(shí)驗(yàn)的兔、試劑注射器，繼續(xù)做第二節(jié)家兔體內(nèi)的微循環(huán)、促凝和抗凝實(shí)驗(yàn))
[思考題]
（1)比較表1中各凝血時(shí)間，為什么時(shí)間有長(zhǎng)短？
（2)在肺組織浸液促進(jìn)血凝塊出現(xiàn)后立即加入肝素溶液1滴，仔細(xì)觀察兔凝血塊是否能溶解？為什么？
第二節(jié) 急性彌散性血管內(nèi)凝血
[實(shí)驗(yàn)?zāi)康腯
（1)觀察家兔體內(nèi)腸系膜微循環(huán)的血液流動(dòng)特點(diǎn)。
（2)觀察組織因子在家兔體內(nèi)促凝過(guò)程和肝素預(yù)防組織因子在家兔體內(nèi)促凝過(guò)程，并分析各個(gè)的作用機(jī)制。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物]
家兔，體重2.0～2.5kg/只，雌雄不拘。
[藥品、器材]
1．藥品
蒸餾水、生理鹽水、3%戊巴比妥鈉溶液（或25%氨基甲酸乙酯)、低分子量肝素鈉溶液（臨用時(shí)，一支肝素溶液用生理鹽水稀釋10倍)、肺組織浸液。
2．器材
Compact-X型全自動(dòng)血液凝集分析儀；BL--2000型微循環(huán)觀察儀；手術(shù)器械一套、兔臺(tái)、兔繩、玻璃分針、動(dòng)脈小尼龍插管、動(dòng)脈夾、縫合線、紗布，5ml注射器3個(gè)、1ml注射器1個(gè)，計(jì)時(shí)鐘。
[觀察指標(biāo)]
（1)腸系膜微循環(huán)凝血時(shí)間測(cè)定（小時(shí)： 分鐘： 秒： )，計(jì)時(shí)從注射試劑開(kāi)始到血流停止為止。凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、 凝血酶時(shí)間(TT)/ 爬蟲(chóng)酶時(shí)間、 纖維蛋白原(FIB)、凝血因子濃度(Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ)、抗Ⅹa因子肝素檢測(cè)、D二聚體。
（2)呼吸頻率（次/分)
（3)嘴唇、黏膜的發(fā)紺情況
[方法、步驟]
1．家兔腸招生簡(jiǎn)章系膜微循環(huán)暴露手術(shù)
在兔右腹側(cè)部（近兔臺(tái)處)作一平行于兔身體縱軸的約2cm長(zhǎng)的切口，打開(kāi)腹腔，輕輕拿出一小段小腸，找出腸系膜的透明部分，將其置于低倍顯微鏡下，找到微循環(huán)血液流速很快的部分，并在高倍鏡下進(jìn)一步找到含有數(shù)根僅有單個(gè)細(xì)胞通過(guò)的毛細(xì)血管的腸系膜，固定該視野，以便觀察其變化。（用濕潤(rùn)的生理鹽水紗布輕輕蓋在腸系膜上)
2．續(xù)用第一節(jié)實(shí)驗(yàn)的兔三只，分別編號(hào)1、2、3。做以下實(shí)驗(yàn)：
（1) 注射生理鹽水組：在2min內(nèi)給1號(hào)兔緩慢靜脈注射生理鹽水4 ml；
（2) 肺組織浸液促凝組：在2min內(nèi)給2號(hào)兔緩慢靜脈注射生理鹽水2 ml和肺組織浸液2ml；
（3) 肝素溶液抗凝組： 在2min內(nèi)給3號(hào)兔緩慢靜脈注射肝素溶液2mlml肺組織浸液2ml。
表7-2家兔的體內(nèi)血凝、促凝和抗凝因素對(duì)凝血時(shí)間、呼吸及發(fā)紺的影響的結(jié)果記錄
| 凝血時(shí)間（小時(shí)： 分鐘： 秒： ) | 呼吸（次/分)、發(fā)紺
|
| 生理鹽水組 肺組織浸液促凝組 肝素溶液抗凝組 |
[注意事項(xiàng)]
（1)手術(shù)中要注意及時(shí)止血。
（2)微循環(huán)觀察部分不能移動(dòng)、不能人為損傷和出血。
[思考題]
（1)比較三組的微循環(huán)情況，是否都有凝血？為什么？
（2)在肺組織浸液促凝組凝血后立即緩慢注射注射肝素溶液2ml，仔細(xì)觀察兔腸系膜微循環(huán)凝血情況是否能改善？為什么？
（3)在肺組織浸液促凝組凝血后若兔繼續(xù)存活，仔細(xì)觀察1～3小時(shí)后兔腸系膜微循環(huán)是否發(fā)生多處毛細(xì)血管壁破裂、出血現(xiàn)象即彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC)現(xiàn)象。DIC 怎樣預(yù)防？
第三節(jié) 血藥濃度半衰期測(cè)定
［實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?/p>
（1)掌握t1/2比色測(cè)定法。（2)了解藥物血漿A（t1/2)、生物利用度和表觀分布容積等概念。
（3)學(xué)會(huì)繪制藥物時(shí)—量曲線。
[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物］
家兔，性別不拘。
［藥品、器材］
723型分光光度計(jì)、離心機(jī)、手術(shù)器械一套、注射器、2號(hào)注射針頭、動(dòng)脈插管、動(dòng)脈夾、微量定量移液管、試管架、大號(hào)試管、吸管、洗耳球。
3％戊巴比妥鈉、125單位/ml 肝素生理鹽水、20％磺胺嘧啶鈉（SD)、6％三氯醋酸、0．5％亞硝酸鈉、0．5％麝香草酚氫氧化鈉溶液。
［觀察指標(biāo)］
吸光度值。
［方法、步驟］
1．標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備。
（1)SD標(biāo)準(zhǔn)液配制，按下列步驟：
a．取20％SD溶液2．56毫升置于200毫升容量瓶中，加蒸餾水至刻度，此濃度即128mg／100m1。
b．取上清液7．5m1用蒸餾水稀釋至10m1。這時(shí)SD的濃度96mg／100m1。
c．取濃度為128mg／100m1SD溶液100ml倍稀釋分別獲得64mg／100m1、32mg／100m1、16mg／l00m1、8mg／100m1SD溶液。
（2)取試管7支，編號(hào)。每支試管內(nèi)加6％三氯醋酸7．8ml，再分別加入不同濃度的SD標(biāo)準(zhǔn)液０．2m1(6支內(nèi))，另1支加入0．2mI蒸餾水。貼上標(biāo)簽、混勻。
（3)再取試管7支，編號(hào)。按表7—1依次加入各種溶液后充分搖勻。
（4)用721型分光光度計(jì)比色，選擇520nm波長(zhǎng)，讀出各試管光密度。
（5)以SD深度為橫坐標(biāo)，光密度為縱坐標(biāo)作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2．血標(biāo)本制備：取家兔一只，稱重，用3％戊巴比妥鈉1ml／kg耳緣靜脈注射麻醉，麻醉后固定，施頸部切開(kāi)術(shù)，頸總動(dòng)脈插管以備放血時(shí)用。耳緣靜脈注射0．5％肝素1m1／kg，5分鐘后放血0.5m1，同時(shí)注入20％SD溶液2m1／kg。分別于給藥后的第0、5、10、20、30、40、60分鐘時(shí)放血0.5m1。
取離心管8支，加入6％三氯醋酸7．8m1，然后從0．5m1各血樣本中準(zhǔn)確吸取0.2ml于離心管，混勻，離心(1500轉(zhuǎn)，5分鐘)，分別取上清液于另外8支試管中，待用。
2． 比色測(cè)定
3． 按表7—2進(jìn)行。
表7-3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備
| 7 空白 | 6 （8mg/ 100ml) | 5 (16mg/ 100ml) | 4 (32mg/ 100ml) | 3 (64mg/ 100ml) | 2 (90mg/ 100ml) | 1 (128mg/ 100ml) | |
| ②步中標(biāo)準(zhǔn)液（ml) ②步中蒸餾水（ml) 0.5%亞硝酸鈉（ml) 0.5%麝香草酚（ml) | 3 1 2 | 3 1 2 | 3 1 2 | 3 1 2 | 3 1 2 | 3 1 2 | 3 1 2 |
表7-4
| 空白管 | 待測(cè)管 | |
| 給藥前上清液(m1) 給藥后上清液(m1) 0.5％亞硝酸納(m1) 0.5％麝香草酚(m1) | 3 1 2 | 3 1 2 |
用723型分光光度計(jì)進(jìn)行比色，選擇520nm波長(zhǎng)，讀出吸光度(A)值。將結(jié)果填入表6-3
表7-5給藥后不同時(shí)間兔血SD濃度
| 0′ | 5′ | 10′ | 20′ | 30′ | 40′ | 60′ | |
| 光密度(A) 濃 度(C) 濃度對(duì)數(shù)(lgC) |
要求： 1．以時(shí)間為橫坐標(biāo)，血藥濃度的對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，繪制t—lgc曲線。
2．從t—lgc曲線上取兩點(diǎn)，按下式計(jì)算出SD的血漿濃度半衰期：
t1/2= 0.301
(lgC1—lgＣ2)/Δt
3．按下式計(jì)算表觀分布容積：
Vd = A(mg)
Co(mg／ml)
4．按下式計(jì)算生物利用度：
F＝ 吸入體循環(huán)藥量
給藥總量×100%
［注意事項(xiàng)］
1．給SD時(shí)一定要注入靜脈內(nèi)，若注射至皮下將會(huì)影響t1／2測(cè)定。
2．每次取血前先將插管中殘血放掉。
3．每吸取一個(gè)血樣時(shí)，必須更換吸嘴。
4．操作程序不得顛倒，每次加試劑后必須混勻。
5．采血時(shí)間不準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)記錄實(shí)際時(shí)間。
6．血液加到裝三氯醋酸試管內(nèi)立即振搖，否則易出現(xiàn)凝血塊。
［思考題］
1．試述t1／2、Vd、F的定義和意義。
2．某藥的最低有效血濃度為2．0mg/100m1，t1／2為10.7小時(shí)。測(cè)得患者血藥濃度4.7mg/100m1，試問(wèn)尚能保持有效濃度幾小時(shí)?(計(jì)算公式Ct＝Co×0.5t/t1 / 2)
（謝志忠 廖端芳)
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凝血前 凝血后