生理學(xué)實驗指導(dǎo)-第一篇:第五章

第五章  動物實驗的基本操作技術(shù)

動物實驗的基本操作技術(shù)的內(nèi)容十分廣泛，是實驗人員組織實施一項實驗學(xué)研究的基本功。針對教學(xué)實驗的基本要求，我們列舉了如下最為基本的操作技術(shù)。這些操作技術(shù)，對完成綜合性實驗及其他科學(xué)實驗研究均有重要作用。

第一節(jié)  實驗動物的捉拿、固定和編號方法

在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗中，正確捉拿與固定動物，是實驗工作的基礎(chǔ)，也是實驗順利進行的保證。掌握正確捉拿、固定動物的目的就是防止實驗者被動物咬傷抓傷，同時也是為了維持動物的正常生理活動，從而不影響實驗觀察結(jié)果。

一、實驗動物的捉拿與固定方法

在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗中，最常用的動物有小鼠、大鼠、豚鼠、蟾蜍、蛙、家兔和犬，現(xiàn)分別就其捉拿與固定方法依次予以介紹。

1. 小鼠

捉拿時先用右手將鼠尾抓住提起，放在較粗糙的臺面或鼠籠上，在其向前爬行時，右手向后拉尾(圖5-1)，用左手拇指和食指抓住小鼠的兩耳和頭頸部皮膚，將其置于左手心中，拉直四肢并用左手無名指壓緊尾和后肢(圖5-2)，右手即可作注射或其他實驗操作。取尾血及尾靜脈注射時，可將小鼠固定在金屬或木制的固定器上(圖5-11)。

圖5-1圖5-2  

2. 大鼠 

方法基本與捉拿小鼠相同，但實驗者事先應(yīng)戴帆布防護手套。用右手將鼠尾抓住提起，放在較粗糙的臺面或鼠籠上，抓住鼠尾向后輕拉，左手拇指和食指抓緊兩耳和頭頸部皮膚，余下三指緊捏鼠背部皮膚，如果大鼠后肢掙扎厲害，可將鼠尾放在小指和無名指之間夾住，將整個鼠固定在左手中，右手進行操作。若進行手術(shù)或解剖，則應(yīng)事先麻醉或處死，然后用棉線活結(jié)縛四肢，用棉線固定門齒，背臥位固定在大鼠固定板上。需取尾血及尾靜脈注射時，可將其固定在大鼠固定盒里，將鼠尾留在外面供實驗操作。

3. 豚鼠 

豚鼠具有膽小易驚的特性，因此抓取時要求快、穩(wěn)、準(zhǔn)。一般方法是：先用右手掌迅速、輕輕地扣住豚鼠背部，抓住其肩中上方，以拇指和食指環(huán)握頸部，對于體型較大或懷孕的豚鼠，可用另一只手托住其臀部(圖5-3、圖5-4)。

		圖5-4

圖5-3  

4. 蛙和蟾蜍 

用左手將動物貼緊在手掌中，并以左手中指、無名指、小指壓住其左腹側(cè)和后肢，拇指和食指分別壓住左、右前肢，右手進行操作。根據(jù)實驗需要，可用圖釘，采取俯臥位或仰臥位固定在蛙板上。抓取蟾蜍時，禁忌擠壓兩側(cè)耳部毒腺，以免毒液射入眼中。

5.家兔 

用右手把兩耳輕輕地壓于手心內(nèi)，同時抓住頸部的被毛與皮膚。用左手托住其臀部，使其軀干的重量大部分集中在左手上(圖5-5)，然后按實驗要求固定。做家兔耳血管注射或取血時，可用家兔盒固定。作各種手術(shù)時，可將家兔麻醉后固定在手術(shù)臺上。固定方式分仰臥位和俯臥位，仰臥位固定時，四肢用粗棉線固定，頭用家兔頭固定夾固定或用棉線鉤住家兔門齒后再固定在家兔臺頭端柱子上（圖5-6)。進行頭顱部手術(shù)時，多采用仰臥位固定配合馬蹄形固定器進行。

  圖5-5圖5-6  

5. 犬 

抓取犬時，需要用特制的長柄鉗夾夾住其頸部，套上犬鏈，然后根據(jù)不同的實驗要求將其固定。犬嘴的捆綁方法：取一圓形鐵柱管(直徑約1cm，長25cm，可用萬能支架上的鐵柱管代替)橫貫置于犬齒后部的上下頜之間，用較寬的紗布從下頜繞到上頜打第1個結(jié)扣后，紗布的兩端在鐵柱管的兩端靠犬的頭部繞兩圈固定。待固定牢靠后，紗布再繞向下頜打第2結(jié)扣，在鐵柱管的兩端靠犬的頭部繞2圈固定，最后再繞到頭頸后打第3個結(jié)扣。固定好后，可用手試著拉動或移動鐵柱管，如鐵柱管牢固，則證明犬嘴捆綁正確，否則需重新捆綁。如實驗需要靜脈注射時，可先使動物麻醉后再取下長柄夾，解綁，把動物放在實驗臺上，按實驗要求固定。

二、注意事項

1捉拿固定某一動物之前，要對該動物的習(xí)性有一定的了解。

2捉拿固定動物時須小心謹(jǐn)慎，大膽果斷，但切不可粗暴。

3大鼠牙齒鋒利，為避免咬傷，捉拿動作要輕，不可魯莽，如果大鼠過于兇猛，可待其安靜后，再捉拿或用卵圓鉗夾鼠頸部抓取。

4捉拿動物過程中要以規(guī)范性的方法抓取和固定動物，要避免因動作粗暴而造成動物的損傷。例如家兔這樣的動物，不能采用抓雙耳或抓提腹部的錯誤捉拿方法。

5抓取大鼠或小鼠尾部時動作要輕，防止拉斷鼠尾。不可提起動物玩耍!提起動物后，應(yīng)迅速放在粗糙臺面上。

6捉拿動物過程中應(yīng)防止被動物咬傷，若不慎被動物咬傷、抓傷。應(yīng)及時用碘酒、乙醇消毒，隨后到有關(guān)醫(yī)療機構(gòu)診治。

三、實驗動物的編號方法

動物實驗中，常用的編號標(biāo)記有染色法、掛牌法、烙印法等3種方法。

1. 染色法 

染色法是用有色化學(xué)試劑在動物身體明顯處如被毛、四肢等不同部位處進行涂染或用不同顏色來區(qū)別各組動物，是實驗中最常用、最容易掌握的方法。

使用的編號標(biāo)記液有如下幾種：3％-5％的苦味酸溶液(涂染黃色)，2％硝酸銀溶液(涂染咖啡色)，0.5％中性紅或品紅溶液(涂染紅色)。編號原則是先左后右，從前到后。一般把涂在左前腿上的記為1號，左側(cè)腹部記為2號，左后腿記為3號，頭頂部記為4號，腰背部記為5號，尾基部記為6號，右前腿上的記為7號，右側(cè)腰部記為8號，右后腿記為9號。若動物編號超過10或更大數(shù)字，可使用上述兩種不同顏色的溶液，即把一種顏色作為個位數(shù)，另一種顏色作為十位數(shù)，這種交互使用可編到99號。例如把紅色記為十位數(shù)，黃色記為個位數(shù)，那么，右后腿黃色，頭頂紅色，則表示是49號，其余類推。

2. 掛牌法 

掛牌法是將標(biāo)有編號的金屬制號碼牌固定在實驗動物的耳部皮膚上，大動物可掛在頸上或籠箱上。

3烙印法 

烙印法是用刺數(shù)鉗在動物無體毛或明顯部位(如耳、面鼻部和四肢等部位)刺上編號，然后用棉簽蘸著溶有乙醇的黑墨汁在編號上涂抹。烙印前，最好對烙印部位預(yù)先用75％乙醇消毒，以免造成皮膚局部感染。

(黃紅林 陳  凱)

第二節(jié)  實驗動物的給藥方法

實驗動物是醫(yī)學(xué)實驗研究工作的基本要素之一，如新藥開發(fā)、對疾病和生命現(xiàn)象的研究等均需要動物進行實驗研究。根據(jù)實驗?zāi)康�、所選用實驗動物種類、藥物劑型的不同，對實驗動物實施不同的給藥方法是十分重要的。本節(jié)主要介紹在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)實驗學(xué)教學(xué)中常用的一些給藥方法。

較常見的給藥方法有：攝入法給藥、注射法給藥、涂布法給藥和吸入法給藥，其中前兩種方法較為常用。

一、攝入法給藥

攝人法是經(jīng)消化道給藥，有自動口服給藥、強制灌胃給藥和經(jīng)直腸給藥3種方式。

1. 自動口服給藥 

將藥物放入飼料或溶于飲水中，由動物自動攝入體內(nèi)。此法的優(yōu)點是：操作簡便，不會因操作失誤而致動物死亡。不足的是由于動物狀態(tài)和飲食嗜好的不同，飲水和攝取食量的不同，不能保證用藥后的藥效分析的準(zhǔn)確性。同時，放入飼料或溶于飲水中的藥物容易分解，難以做到平均添加。因此，該方法適用于動物疾病的防治、藥物毒性觀測、某些與食物有關(guān)的人類疾病動物模型的復(fù)制等。

2. 強制灌胃給藥 

強制灌胃給藥能準(zhǔn)確掌握給藥量、給藥時間、發(fā)現(xiàn)和記錄癥狀出現(xiàn)時間及經(jīng)過。但每天強制性操作和定時給藥會對動物造成一定程度的機械損傷和心理影響。為減少不良影響，必須充分掌握灌胃技術(shù)。方法如下：操作前，將胃管接在注射器上，大致測試一下從口腔至胃

 圖5-7圖5-8

(最后一根肋骨后緣)的長度，以估計胃管插入深度。成年動物插管深度一般是：小鼠3cm，大鼠5cm，家兔15cm，犬20 cm。 

操作時，動物取直立或平臥體位，固定動物頭部，強迫張口，胃管壓在舌根部順上腭緩緩插入至所需深度。插管時注意動物的反應(yīng)，若動物反應(yīng)劇烈，應(yīng)拔出胃管，檢查食管是否有損傷，并重新操作。插管完成后應(yīng)注意檢查胃管是否準(zhǔn)確插入食管內(nèi)，以防將藥物注入氣管（圖5-7)。給家兔、犬等中型動物灌胃時，應(yīng)配合使用開口器，以免動物咬壞胃導(dǎo)管（圖5-8)。

除使用胃管灌藥外，有時還可以讓動物在人工輔助下自行吞咽藥物，如實驗者把藥物放在豚鼠舌根部，讓其閉口咽下。

3．經(jīng)直腸給藥 

根據(jù)動物大小選擇不同的導(dǎo)尿管，在導(dǎo)尿管的頭部涂上凡士林，使動物取蹲位，助手以左臂及左腋輕輕按住動物的頭部及前肢，以左手拉住動物尾巴露出肛門，右手輕握后肢。實驗者將導(dǎo)尿管緩慢送人肛門。切記不能粗暴用力，插管深度以7～9cm為宜。藥物灌入后，應(yīng)抽取生理鹽水將導(dǎo)尿管內(nèi)的藥物全部沖入直腸內(nèi)，然后將導(dǎo)尿管在肛門內(nèi)保留一會再拔出。

二、注射法給藥

1. 皮下注射 

對大多數(shù)實驗動物來說，皮下注射最適宜的部位是頸背、腋下、側(cè)腹或后腿肢體、臀部等。小鼠、大鼠、沙鼠和豚鼠一般用手固定，家兔、犬則固定于實驗臺上。不同實驗動物的注射部位有所不同，犬、貓多在大腿外側(cè)，豚鼠在后大腿內(nèi)側(cè)或小腹部，大鼠可在左側(cè)下腹部。其操作方法是：用左手輕輕抓起皮膚，右手把注射器針頭插入皮膚皺褶的基底部，沿身體縱向?qū)⒆⑸淦魍七M5～10 mm，并將針頭輕輕左右擺動，易于擺動表明已刺入皮下。再輕輕抽吸，若無回流液體或血液時即可緩慢注入藥液。注射完畢拔出針頭，用手指輕壓注射部位，以防藥液外漏。

2. 皮內(nèi)注射 

皮內(nèi)注射是將藥液注入皮膚的表層與真皮之間。可用于觀察皮膚血管通透性變化或皮內(nèi)反應(yīng)，多用于接種、過敏實驗等。操作時，先剪去注射部位的被毛，消毒局部，然后用左手將皮膚捏成皺襞，右手持針頭，將針頭與皮膚呈30°角，沿表層刺入皮內(nèi)，慢慢注入一定量的藥液。此時會感到有很大的阻力，并且注射部位皮膚表面馬上呈小丘疹狀隆起，皮膚表面上的毛孔極明顯。如無以上表現(xiàn)，則藥液可能注人皮下，應(yīng)更換部位重新注射。注射后5分鐘再拔針，以免藥液從針孔漏出。

3. 肌肉注射 

肌肉注射主要用于注射不溶于水而懸于油或其他劑型中的藥物。肌肉注射應(yīng)選擇肌肉發(fā)達、血管豐富的部位，如大鼠、小鼠和豚鼠的大腿外側(cè)緣；家兔、貓、犬、猴的臀部或股部。注射時固定動物，剪去注射部被毛，與肌肉層組織接觸面呈60°角刺入注射器針頭，回抽針?biāo)�無回血后注入藥液(小動物可免回抽針?biāo)?。注射完畢后用手輕輕按摩注射部位，促進藥液吸收。

4. 腹腔注射 

此注射方法是嚙齒類動物常用的給藥方法。注射部位應(yīng)是腹部的左、右下側(cè)外1／4的部位，因為此處無重要器官。其中家兔在腹部近腹白線約1cm處，犬在臍后腹白線側(cè)緣1～2cm處注射。給大鼠、小鼠注射時，左手捉拿動物，使腹部向上，頭部略低于尾部，右手持注射器將針頭平行刺入達皮下（圖5-9)，再向前進針3～5mm，針頭能自由活動則說明刺到皮下，然后注射器以45°角斜刺入腹肌，進入腹腔。進入腹腔時可有落空感，回抽注射器，若無回流血液或尿液時即表示未傷及肝臟和膀胱，可以按一定的速度慢慢注入藥液。  圖5-9

5. 靜脈注射 

靜脈注射應(yīng)根據(jù)動物的種類選擇注射的血管。大鼠和小鼠多選用尾靜脈，家兔多選用耳緣靜脈，犬多選用后肢小隱靜脈，豚鼠多選用耳緣靜脈或后肢小隱靜脈注射。因為靜脈注射是通過血管給藥，所以只限于液體藥物。如果是混懸液，可能會因懸浮粒子較大而引起血管栓塞。

(1)耳緣靜脈注射

將動物固定于實驗臺上，去除耳緣部位的被毛，用乙醇輕輕擦拭，耳緣靜脈即清晰可見。用左手食指和中指夾住靜脈近心端，拇指和小指夾住耳緣部分，以左手無名指和小指放在耳下作墊，待靜脈充盈后，右手持注。射器使針頭盡量由靜脈末端刺入，與血管方向平行、向心端刺人約1cm�；爻樽⑸淦麽�?biāo)ǎ�有血液回流，即可將藥液緩慢注�?圖5-10)。注射完畢抽出針頭，用棉球壓迫注射部位數(shù)分鐘，以免出血。此方法適用于體型較

大的動物，如猿、犬和家兔。 圖5-10

(2)尾靜脈注射

尾靜脈注射主要用于大鼠和小鼠。鼠尾靜脈有3根，兩側(cè)及背側(cè)各1根，左、右兩側(cè)尾靜脈較易固定，應(yīng)優(yōu)先選擇。注射時，先將鼠固定在鼠筒內(nèi)或扣在燒杯中，露出尾部組織，用45～50℃溫水浸泡鼠尾1～2min或用75％乙醇溶液反復(fù)擦拭，以達到消毒、擴張血管和軟化表皮角質(zhì)的目的。選擇尾靜脈下1／3處，用細(xì)針頭沿血管方向平行、向心端進針（圖5-11)。注意藥液推入靜脈時是否通暢，若阻力較大，注射部位皮下發(fā)白，表示針頭未刺入靜脈內(nèi)，應(yīng)換部位重新注射；若推入藥液順利無阻，則表明己刺入靜脈內(nèi)，應(yīng)把針頭和鼠尾固定好，不要晃動，緩緩將藥液推入，注射完畢，用棉球在注射部位輕輕揉壓，使血液及藥液不致回流而漏出。  

  圖5-11

(3)前肢內(nèi)側(cè)頭靜脈或后肢小隱靜脈注射

注射時應(yīng)先剪去注射部位的被毛，用碘酒和乙醇消毒皮膚，在靜脈近心端用橡皮膠帶綁緊或用手捏緊，使血管充盈，針頭自遠(yuǎn)心端向心刺入血管，待回抽有血后，放松靜脈近心端，盡量緩緩地注入藥液(圖5-12)。

(4)腹靜脈注射

主要用于蛙和蟾蜍。將蛙或蟾蜍腦脊髓破壞后，仰臥固定于蛙板上，沿腹部正中線稍左剪開腹肌并翻轉(zhuǎn)，可見腹靜脈沿腹壁肌肉下行，注射時用左手拇指和食指捏住腹壁肌肉，稍向外拉，用中指在下頂起腹壁肌肉，右手持注射器，將針頭沿血管平行方向刺入即可。

(5)淺背側(cè)足中靜脈注射   圖5-12

很少用，可用于大鼠、小鼠和豚鼠等。

(6)股靜脈或頸外靜脈注射

有時用于大鼠和犬，但必須在麻醉狀態(tài)下進行。方法是切開皮膚，使用注射器、血管插管等技術(shù)，直接對動物實施股靜脈或頸靜脈的注射給藥。

此外，還有腦內(nèi)注射、椎管內(nèi)注射、椎動脈注射和關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射等其他較特殊的藥物注射方法。

三、涂布法給藥

涂布皮膚方法給藥主要用于鑒定藥物經(jīng)皮膚的吸收作用、局部作用或致敏作用等。藥液與皮膚接觸的時間可根據(jù)藥物性質(zhì)和實驗要求而定。

大鼠、小鼠可采用浸尾方式經(jīng)尾部組織給藥，主要目的是定性地判斷藥物經(jīng)皮膚的吸收作用。先將動物放入特制的固定盒內(nèi)，露出尾部組織，再將尾部組織通過小試管軟木塞小孔，插入裝有藥液或受檢液體的試管內(nèi)，浸泡2～6小時，并觀察其中毒癥狀。

如果是毒物，實驗時要特別注意，避免人員因吸入受檢液所形成的有毒蒸氣而中毒。為此，要將試管的軟木塞塞緊，必要時可將受檢液表面加上一層液體石蠟。為了完全排除吸入的可能性，可在通風(fēng)櫥的壁上鉆一小洞，將受檢液置于通風(fēng)櫥內(nèi)，動物尾部組織通過小孔進行浸尾實驗，而身體部分仍留在通風(fēng)櫥以外。

家兔及豚鼠經(jīng)皮膚給藥的部位常選用脊柱兩側(cè)的背側(cè)部皮膚。選定部位后，用脫毛劑脫去被毛，洗凈脫毛劑后，放回籠內(nèi)，至少待24小時后才可使用。脫毛過程中應(yīng)特別注意不要損傷皮膚。次日仔細(xì)檢查處理過的皮膚是否有刀傷或過度腐蝕的創(chuàng)口，以及有無炎癥、過敏等現(xiàn)象。如有，應(yīng)暫緩使用，待動物完全恢復(fù)。若皮膚準(zhǔn)備合乎要求，便可將動物固定好，在脫毛區(qū)覆蓋一面積相仿的鐘形玻璃罩，罩底用凡士林膠布固定封嚴(yán)。用移液管沿罩柄上開口處，加入待試藥物，使受檢液與皮膚充分接觸并完全吸收后解開(一般2～6小時)，然后將皮膚表面仔細(xì)洗凈。觀察時間視實驗需要而定。如果是一般的藥物，如軟膏和各種化妝品，可直接涂抹在皮膚上。藥物與皮膚接觸的時間根據(jù)藥物性質(zhì)和實驗要求而定。

(黃紅林 陳  凱)

第三節(jié)  實驗動物的麻醉方法

所謂麻醉，通常是指用藥物使整個實驗動物（全身麻醉)或其手術(shù)部位（局部麻醉)處于無知覺狀態(tài)，并使其基本生命活動不受影響。實驗動物的麻醉，關(guān)鍵在于正確選擇麻醉方法和麻醉藥；同時，要仔細(xì)地觀察麻醉過程，判斷麻醉效果。

一、麻醉方法

（一)全身麻醉

麻醉藥經(jīng)呼吸道吸入或靜脈、肌肉等注射，產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)抑制，達到預(yù)期的麻醉效果，這種方法稱全身麻醉。

1.  吸入麻醉

吸入麻醉是將揮發(fā)性麻醉藥（如乙醚)或麻醉氣體經(jīng)呼吸道吸入體內(nèi)，從而發(fā)生麻醉作用，它屬于全身麻醉。

用吸入麻醉法麻醉狗，多采用開放式。先按照狗的大小選擇合適的口鼻罩套住狗嘴，內(nèi)墊數(shù)層紗布。若無合適的麻醉口罩，也可用數(shù)層長寬各40cm的紗布蒙住狗嘴。將狗按倒，一人固定狗的四肢，另一人滴加乙醚于口罩或紗布上，讓狗吸入。開始量可稍多些，后逐漸減少。狗吸入乙醚 后有興奮現(xiàn)象，如掙扎、呼吸不規(guī)則或加深、肌張力增強等。出現(xiàn)這些現(xiàn)象時給藥應(yīng)暫停1～2分鐘，待呼吸恢復(fù)正常后再繼續(xù)給藥，直到滿意的麻醉深度。由于乙醚吸入麻醉會出現(xiàn)興奮期，因此，可在麻醉前給予適當(dāng)?shù)逆?zhèn)靜性藥物和阿托品，前者可降低中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性，減輕興奮反應(yīng)；后者可對抗乙醚刺激口腔和呼吸道粘膜的分泌作用，防止呼吸道阻塞，以免發(fā)生麻醉意外。

給貓兔等動物作吸入麻醉時，也可采用口鼻罩法。此外，這些動物以及豚鼠、大小白鼠等體型較小的動物可置入一個特制的麻醉箱內(nèi)，或者放在鐘罩或大燒杯內(nèi)，然后將浸有乙醚的藥棉或紗布放入其內(nèi)，讓動物呼吸乙醚空氣。待動物臥倒后，將其取出，用開放性點滴法維持，直到合適的麻醉深度。

用吸入麻醉法麻醉動物，有時為了保持呼吸道通暢，改善通氣功能，常在局部麻醉藥作用下給動物一個氣管切口，將一根合適的導(dǎo)管經(jīng)氣管切口插入，呼吸氣體和吸入麻醉藥都經(jīng)導(dǎo)管進入體內(nèi)。這種利用氣管內(nèi)插管的方法進行的吸入麻醉，稱氣管內(nèi)吸入麻醉。

2.注射麻醉

注射麻醉就是將藥液抽吸入注射器內(nèi),然后通過注射針頭注入到動物機體的某個部位,以達到麻醉目的。這是麻醉實驗動物的一種常用方法。根據(jù)給藥部位，注射麻醉可分為靜脈注射、腹腔注射、肌肉注射和淋巴囊注射四種。

（1)靜脈注射

靜脈注射是全身麻醉的一種常用方法，也是常用的給藥方法。這種方法對裝注射器針頭的要求是，針頭號與注射器刻度線在同一個方向上。這樣，當(dāng)針頭刺入靜脈血管時，其缺口與注射器刻度線都朝上，就不必?fù)?dān)心血管壁妨礙注射藥液，也便于觀察注射劑量與速度。靜脈注射部位因動物種類而異。①狗的靜脈注射部位通常有兩個：一是后肢外側(cè)面的小隱靜脈，該靜脈在脛腓骨遠(yuǎn)端自前向后行走；一是前肢內(nèi)側(cè)的頭靜脈，其口徑比小隱靜脈粗。這兩支靜脈都位于皮下。注射時，先用狗頭夾固定頭部，以防咬人。然后在注射部位剪毛，用膠皮帶捆綁近心端，使靜脈充盈，將注射針頭刺入血管，回抽有血時，松帶，即可注入麻醉藥。②家兔常取耳緣靜脈為注射部位。耳緣靜脈沿耳背內(nèi)側(cè)行走。注射時先用兔籠固定兔頭，或由助手搔抓前肢腋下使動物安靜。剪毛并用水濕潤，使血管顯現(xiàn)。然后左手中指和食指夾住兔耳根部，拇指和無名指捏住耳尖，右手持注射器，從耳尖部進針。兔耳皮膚薄，耳緣靜脈表淺，因此進針不能太深，以免刺破血管。③大白鼠和小白鼠可取尾靜脈注射。鼠尾背腹及兩側(cè)共有四根血管，腹側(cè)一根為動脈，其余三根為靜脈。注射時，宜先用鼠固定器固定鼠體，讓鼠尾露出。宜選用4號針頭或5號針頭，選擇最粗的一根血管刺入。

靜脈注射麻醉作用發(fā)生快，沒有明顯的興奮期，幾乎立即生效。這樣，容易控制麻醉深度，掌握用藥劑量。但也要注意：①注射器內(nèi)抽取藥液后應(yīng)排干凈空氣；以免將空氣注入血管引起血管栓塞。②注入藥物的速度一般要慢，尤其是使用20%氨基甲酸乙酯（烏拉坦)溶液給家兔作耳緣靜脈注射麻醉時，速度過快，往往引起動物死亡。③為避免發(fā)生麻醉意外（呼吸暫停、心臟停跳、甚至死亡)，可先緩慢注入藥物總劑量的4/5，剩下的1/5根據(jù)麻醉深度決定是否應(yīng)該繼續(xù)注入。

（2)腹腔注射

與靜脈注射相比較，腹腔注射操作簡便易行。狗兔等較大動物腹腔內(nèi)注射麻醉藥時可由助手固定動物，使腹部朝上，然后在后腹部外側(cè)約1 /3處進針，回抽、判定針頭確在腹腔內(nèi)，即可注入藥物。大、小白鼠和豚鼠腹腔內(nèi)注射麻醉一人操作即可。操作者事先用注射器抽取麻醉藥。左手拇指與食指捏住鼠耳及頭部皮膚，無名指與小指夾住鼠尾，腹部朝上固定于手掌間，右手持注射器從后腹部朝頭的方向刺入，回抽、判定針頭確在腹腔內(nèi)，即可注射藥液。

腹腔注射麻醉藥物由腸系膜吸收入血，經(jīng)門靜脈入肝再進入心臟，然后才能到達中樞神經(jīng)系統(tǒng)。因此，麻醉作用發(fā)生慢，有一定程度的興奮期，麻醉深度不易控制，只有靜脈注射麻醉失敗后才進行。注射時應(yīng)注意：①進針角度因動物大小而有不同，較大動物針頭可與腹壁垂直；鼠類宜使針頭與腹壁成30度夾角。②一定要回抽，若回抽到血液、糞便、尿液等，表示針頭已刺入臟器，必須拔出重刺。③所用針頭不宜太大，以免注射后藥液自針孔流出。

（3)肌肉注射

肌肉注射麻醉法常用于鳥類。取胸肌注射藥液。

（4)淋巴囊注射

兩棲動物全身有數(shù)個淋巴囊，注射麻醉藥液易吸收，發(fā)生麻醉作用較快醫(yī)學(xué)檢驗網(wǎng)。在所有淋巴囊中，以腹部和頭背部最常用。

（二)、局部麻醉

常以1%鹽酸普魯卡因溶液，在手術(shù)部位作皮下浸潤麻醉。這種方法是在手術(shù)前，用2ml注射器套上6號或6號針頭將局部麻醉藥（普魯卡因)注入手術(shù)部位的皮下，并輕加壓，使藥液擴散，即可手術(shù)。

二、麻醉藥

常用麻醉藥物的用法及劑量(表3-1)

三、麻醉效果的觀察

1.  呼吸

動物呼吸加快或不規(guī)則，說明麻醉過淺，可再追加一些麻醉藥；若呼吸由不規(guī)則轉(zhuǎn)變?yōu)橐?guī)則且平穩(wěn)，說明已達到麻醉深度；若動物呼吸變慢，且以腹式呼吸為主，說明麻醉過深，動物有生命危險。

2.  反射活動

主要觀察角膜反射或睫毛反射，若動物的角膜反射靈敏，說明麻醉過淺；若角膜反射遲鈍，麻醉程度合適；角膜反射消失，伴瞳孔散大，麻醉過深。

3.  肌張力

動物肌張力亢進，一般說明麻醉過淺，全身肌肉松弛，麻醉合適。

4.  皮膚夾捏反應(yīng)

麻醉過程中可隨時用止血鉗或有齒鑷夾捏動物皮膚，若反應(yīng)靈敏，麻醉過淺，若反應(yīng)消失，麻醉程度合適。

四、麻醉意外及其處理

1.  肌顫與抽搐

可能由于動物在麻醉期體溫下降或由于麻醉藥的毒性反應(yīng)引起。遇有這種情況，應(yīng)針對誘發(fā)原因分別處理。烏拉坦麻醉可使動物體溫下降，應(yīng)注意保溫。若系藥物的毒性反應(yīng)，尤其是由非麻醉藥所引起，可對癥處理。

2.  心跳呼吸驟停

多半由于麻醉過深，抑制了延髓心血管運動中樞和呼吸中樞。對此應(yīng)立即進行人工呼吸，同時作胸外心臟按壓。并可從心室內(nèi)注射腎上腺素（0.1%，1ml)，以及從靜脈注射中樞興奮藥（如1%山梗茶鹼0.5ml或 25%尼可剎米1ml)。

 (楊君佑  朱炳陽)

第四節(jié)  實驗動物用藥劑量的計算方法

在需要給動物用藥時，經(jīng)常會遇到兩個問題：（1)給多少劑量；（2)配成何種濃度的藥液。下面介紹有關(guān)方法。

一、給藥劑量的確定

藥物對于某種動物的適當(dāng)劑量來自實踐經(jīng)驗，不能憑空推算。為了某一目的準(zhǔn)備給某種動物用藥時，首先應(yīng)該查閱該藥的有關(guān)文獻，了解前人的經(jīng)驗。如能查到為了同一目的，給相同種類動物用藥的記錄，那就可以直接照試。如查不到治療劑量，但能找到致死量(LD50)，也可先參考LD50來設(shè)計劑量并進行實驗。如果查不到待試動物的合適劑量，但知道其他動物的劑量或人用劑量，則需要加以換算。關(guān)于不同種類動物間用藥劑量的換算，一般認(rèn)為不宜簡單地按體重比例增減，而須按單位體重所占體表面積的比值來進行換算。下面將分述按體重?fù)Q算和按體表面積換算的方法。

1. 按體重?fù)Q算方案 

已知A種動物每千克體重用藥劑量，欲估算B種動物每千克體重用藥的劑量，可先查表5-1，找出折算系數(shù)(W)，再按下式計算。

B種動物的劑量(mg／kg)＝W×A種動物的劑量(mg／kg)

表5-1  動物與人體量的每千克體重等效劑量折算系數(shù)

例1  已知某藥對小鼠的最大耐受量為20 mg／kg(20 g小鼠用0.4mg)，需折算為家兔用量。查A種動物為小鼠，B種動物為家兔，交叉點為折算系數(shù)W＝0.37，故家兔用藥量為0.37×20mg／kg＝7.4mg／kg。

2. 按體表面積折算劑量 

不同種屬動物體內(nèi)的血濃度和作用與動物體表面積成平行關(guān)系，故按體表面積折算劑量較按體重更為精確(表5-2)。

例2  由動物用量推算人的用量。已知一定濃度的某藥注射劑給家兔靜脈注射的最大耐受量為4mg／kg，推算人的最大耐受量為多少?

查表5-2，先橫后豎，家兔與人體表面積比值為12.2，1.5kg家兔最大耐受量為4×1.5＝6mg，那么人的最大耐受量為6×12.2＝73.2mg；取其1／3—1／10作為初試用劑量。

例3  由人用量推算動物用量。已知某中藥成人每次口服10 g有效，擬用犬研究其作用機制，應(yīng)用多少量?

查表5-2，人與犬的體表面積比值為0.37，那么犬用量為10×0.37＝3.7(g)，取其中1／3 -1／10作為初試用劑量。

表5-2  常用動物與人體表面積比值

二、藥物濃度的確定及給藥量的換算

1. 藥物濃度表示法 

藥物濃度是指一定量液體或固體制劑中所含主藥的分量。

常用的表示法有3種。

(1)  百分濃度

是按照每100份溶液或固體物質(zhì)中所含藥物的份數(shù)來表示的濃度，簡寫為％。由于藥物或溶液的量可以用體積或重量表示，因而有以下不同的表示％濃度方法。

重量／體積(W／V)法：

重量／體積(W／V)法即每l00 ml溶液中含藥物的克數(shù)，如5％葡萄糖即每100m1含葡萄糖5g。此法最常用，不加特別注明的藥物％濃度即指此法。

重量／重量(W／W)法：

重量／重量(W／W)法即100 g制劑中含藥物的克數(shù)，適用于固體藥物，如10％氧化鋅軟膏即100g中含氧化鋅l0g。

體積／體積(V／V)法：

體積／體積(V／V)法即100 ml溶液中含藥物的毫升數(shù)。適用于液體藥物，如消毒用 75％乙醇即100 m1溶液中含無水乙醇75ml，相當(dāng)于W／W法70％乙醇。

(2)  比例濃度

常用于表示稀溶液的濃度，例如1:5 000高錳酸鉀溶液是指5000ml溶液中含高錳酸鉀1g；1:1000腎上腺素即0.1％腎上腺素。

(3)  摩爾濃度(mol／L)

1L溶液中含溶質(zhì)的摩爾數(shù)稱為該溶液的摩爾濃度。如0.1mol／LNaCl溶液表示1000 m1中含NaCl 5.84g(NaCl分子量為58.44)。

2.給藥量的換算

(1)動物實驗所用藥物的劑量，一般按mg／kg(或g／kg)體重計算，應(yīng)用時須從已知藥物濃度換算出相當(dāng)于每千克體重應(yīng)注射藥液量(m1)，以便于給藥。

例1  

小鼠體重18g，腹腔注射鹽酸嗎啡10 mg／kg，藥物濃度為0.1％，應(yīng)注射多少m1?

解：0.1％的溶液每毫升含藥物1mg，劑量為10 mg／kg相當(dāng)?shù)娜莘e為10ml／kg，小鼠體重為18g換算成千克為0.018kg，故10×0.018＝0.18ml。小鼠常以mg／10g計算，換算成容積時也以m1／10g計算，較為方便，上例18g重小鼠注射，相當(dāng)于0.1ml／10g，再計算給其他小鼠藥量時很方便。如20g體重小鼠，給0.2ml，以此類推。

例2 

鹽酸苯海拉明給犬肌肉注射時的適當(dāng)劑量為2.5mg／kg�，F(xiàn)有1.5％的藥液，8.5 kg體重之犬應(yīng)注射此種藥液幾毫升?

解：犬1kg體重需給鹽酸苯海拉明2.5mg，8.5kg的犬當(dāng)需鹽酸苯海拉明2.5×8.5＝21.2mg。1.5％的藥液每l00 ml含藥1.5g，即1 500 mg每1ml含藥1 500／100＝15mg  21.2／15＝1.4m1此即8.5kg的犬應(yīng)肌注1.5％鹽酸苯海拉明溶液的容量。

例3 

鹽酸嗎啡給小鼠腹腔注射的劑量為l5mg／kg。現(xiàn)有藥液的濃度為0.1％。體重l7g的小鼠應(yīng)注射藥液幾毫升?

解：按15mg／kg的劑量計算，17g體重的小鼠應(yīng)給藥15×0.017＝0.255mg

0.1％的藥液每100 ml含藥0.1g，即每1ml含藥1.0mg  0.255／1＝0.255。所以17g體重的小鼠應(yīng)注射0.1％的鹽酸嗎啡溶液0.26m1。

(2)在動物實驗中，有時須根據(jù)藥物的劑量及某種動物給藥途徑的藥液容量來配制相當(dāng)?shù)臐舛�，以便于給藥。

例4 

給家兔靜注苯巴比妥鈉80 mg／kg，注射量為1m1／kg，應(yīng)配制苯巴比妥鈉的濃度是多少?

解：80 mg／kg相當(dāng)于1ml／kg，因此1ml藥液應(yīng)含藥物80mg，現(xiàn)算成百分濃度，1 :80＝100 :X，X＝8 000 mg＝8g，即100ml含8g，故應(yīng)配成8％的苯巴比妥鈉。

(3)溶液稀釋的換算可按公式C_lV_l＝C₂V₂換算，即：稀溶液濃度(C₁)×稀溶液體積(V₁)＝濃溶液濃度(C₂)×濃溶液體積(V₂)。

例5  

病人需要5％葡萄糖500ml，如果用50％葡萄糖溶液配制，需要多少毫升?

解：5×500＝50×V V＝5×500／50＝50ml

(4)用混合法將兩種已知百分濃度溶液配制百分濃度溶液。此法是把需要配制溶液的百分濃度放在兩條直線的交叉點上，把已知溶液的濃度放在兩條直線的左側(cè)兩端，較大的百分濃度放在上面，較小的放在下面，然后每一條直線上把兩個數(shù)字進行減法計算，將其差寫在同一直線的右端，所得到的數(shù)字分別寫在右邊的上面和下面，便表示出需要配制濃度的溶液毫升數(shù)。

例6 

有95％和15％乙醇溶液，需要配制成75％乙醇溶液，要取95％乙醇溶液60份和15％乙醇溶液20份，兩者混合即成75％乙醇溶液。

  95 60

  ＼ ／

  75

  ／ ＼

  15 20

同樣，用蒸餾水作溶劑來稀釋已知百分溶液，配制成所需百分溶液。配制方法和上述一樣，只是在左下角不是較小的濃度，而是零，所得的數(shù)字仍寫在右邊的上面和下面，便表示出要取多少份溶液和溶劑。

例7  

由95％乙醇溶液稀釋成75％的乙醇溶液，需要取95％乙醇75份加入20份蒸餾水，即配成75％乙醇溶液。

  95 75

  ＼ ／

  75

  ／ ＼

  0  20

 (黃紅林  鄭興)

第五節(jié)  哺乳類動物實驗常用手術(shù)方法

機能學(xué)實驗以急性動物實驗為主。常以血壓、呼吸等為指標(biāo)，以靜脈注射，放血等為實驗方法。需要暴露氣管、頸總動脈、頸外靜脈、股動脈、股靜脈，并作相應(yīng)的插管，以及分離迷走神經(jīng)，減壓神經(jīng)及股神經(jīng)等。因此手術(shù)主要在頸部及股部進行，現(xiàn)分述如下：

一、兔、犬頸部手術(shù)

頸部手術(shù)的目的在于暴露氣管、頸部血管并作相應(yīng)的插管以及分離神經(jīng)等。頸部手術(shù)成敗的關(guān)鍵在于熟悉動物頸部及手術(shù)要領(lǐng)，防止損傷血管和神經(jīng)。現(xiàn)以家兔為例，說明如下：

1.家兔背位固定于兔臺上，頸部剪毛備皮

2.動物麻醉：

一般作局部浸潤麻醉，在頸部正中線皮下注入1%普魯卡因：亦可選用20%烏拉坦作全身麻醉（方法和劑量請參看表5-3)。

表5-3 常用非揮發(fā)性麻醉藥物的用法及劑量

3.氣管及頸部血管神經(jīng)分離術(shù)

（1)氣管暴露術(shù)

用手術(shù)刀沿頸部正中線從甲狀軟骨處向下至靠近胸骨上緣作一切口（兔的長約4～6cm，狗的長約10cm)；因兔頸部皮膚較松弛亦可用手術(shù)剪沿正中線剪開。切開皮膚后，以氣管為標(biāo)志從正中線用止血鉗鈍性分離頸部正中的肌群和筋膜即可暴露氣管，分離食道與氣管，在氣管下穿過一條粗線備用。

（2)頸總動脈分離術(shù)

正中切開皮膚及皮下筋膜，暴露肌肉。將肌肉層與皮下組織分開。此時清楚可見在頸正中部位有兩層肌肉。一層與氣管平行，覆于氣管上，為胸骨舌骨肌。其上又有一層肌肉呈V字形走行向左右兩側(cè)分開。此層為胸鎖乳突肌。用鑷子輕輕夾住一側(cè)的胸鎖乳突肌，用止血鉗在兩層肌肉的交接處（即V形溝內(nèi))將它分開（注意，切勿在肌肉中分，以防出血)。在溝底部即可見到有搏動的頸總動脈鞘。用眼科鑷子（或紋式止血鉗)細(xì)心剝開鞘膜，避開鞘膜內(nèi)神經(jīng)，分離出長約3～4cm的頸總動脈，在其下穿兩根線備用。

頸動脈竇分離術(shù)：在剝離兩側(cè)頸總動脈基礎(chǔ)上，繼續(xù)小心地沿兩側(cè)上方深處剝離，直至頸總動脈分叉處膨大部分，即為頸動脈竇。剝離時勿損傷附近的血管神經(jīng)。

（3)頸部迷走、交感、減壓神經(jīng)分離術(shù)

于家兔頸部，在找到頸動脈鞘后，將頸總動脈附近的結(jié)締組織薄膜鑷住，并輕拉向外側(cè)使薄膜張開，即可見薄膜上數(shù)條神經(jīng)。根據(jù)各條神經(jīng)的形態(tài)、位置和走向等特點來辨認(rèn)，迷走神經(jīng)最粗，外觀最白，位于頸總動脈外側(cè)，易于識別。交感神經(jīng)比迷走神經(jīng)細(xì)，位于頸總動脈的內(nèi)側(cè)，呈淺灰色；減壓神經(jīng)細(xì)如頭發(fā)，位于迷走神經(jīng)和交感受神經(jīng)之間，在家兔為一獨立的神經(jīng)，沿交感神經(jīng)外側(cè)后行走。但在人、狗此神經(jīng)并不單獨行走，而是行走于迷走、交感干或迷走神經(jīng)中。將神經(jīng)細(xì)心分離2～3厘米長即可，然后各穿細(xì)線備用。

（4)頸外靜脈暴露術(shù)

頸外靜脈淺，位于頸部皮下，其分支為外腭靜脈和內(nèi)腭靜脈，頸部正中切口后，用手指從皮膚外將一側(cè)部組織頂起，在胸鎖乳突肌外緣，即可見很粗而明顯的頸外靜脈。仔細(xì)分離長約3～4cm的頸外靜脈，穿兩線備用。

4.氣管及頸部血管插管術(shù)

在前述分離術(shù)的基礎(chǔ)上，按需要選作下列插管術(shù)。

（1)氣管插管術(shù)

暴露氣管后在氣管中段，于兩軟骨環(huán)之間，剪開氣管口徑之半，在向頭端作一小縱切口呈倒“T”形。用鑷子夾住T形切口的一角，將適當(dāng)口徑的氣管套管由切口向心端插入氣管腔內(nèi)，用粗線扎緊后，再將結(jié)扎線固定于“Y”形氣管插管分叉處，以防氣管套管脫出。

（2)頸總動脈插管術(shù)

頸總動脈主要用于測量頸動脈壓。為此，在插管前需使動物肝素化，并將口徑適宜的充滿抗凝液體（也可用生理鹽水)的動脈套管（也可用塑料管)準(zhǔn)備好，將頸總動脈離心端處結(jié)扎（結(jié)扎點晝向離心端)，近心端動脈夾夾住，另一線打一活扣置于動脈夾與離心端結(jié)扎線之間。插管時以左手拇指及中指拉住離心端的結(jié)扎線頭，食指從血管背后輕扶血管：右手持銳利的眼科剪，使與血管呈45°角，在緊靠離心端結(jié)扎線處向心一剪，剪開動脈壁之周徑1/3左右（若重復(fù)數(shù)剪易造成切緣不齊，當(dāng)插管時易造成動脈內(nèi)膜內(nèi)卷或插入層間而失敗。然后持動脈套管，以其尖端斜面與動脈平均地向心方向插入動脈內(nèi)，用細(xì)線扎緊并在套管分叉處結(jié)扎固定。最后將動脈套管作適當(dāng)固定，以保證測壓時血液進出套管之通暢。

（3)頸外靜脈插管術(shù)

頸外靜脈可用于注射、輸液和中心靜脈壓之測量。血管套管插入方法與股靜脈類似。現(xiàn)將用于中心靜脈壓測量的插管作一簡介：

在插管前先將家兔肝素化，并將聯(lián)接靜脈壓檢壓計的細(xì)塑料管導(dǎo)管充盈含肝素之生理鹽水。在導(dǎo)管上作一長5～8cm的記號。導(dǎo)管準(zhǔn)備好后，先將靜脈遠(yuǎn)心端結(jié)扎，靠近結(jié)扎點的向心端作一剪口，將導(dǎo)管插入剪口，然后一邊拉結(jié)扎線頭使頸外靜脈與頸矢狀面、冠狀面各呈45°角，一邊輕柔地向心端緩慢插入，遇有阻抗即退回改變角度重插，切不可硬插（易插破靜脈進入胸腔)，一般達導(dǎo)管上記號為止，此時可達右心房入口處。若導(dǎo)管插管成功，則可見靜脈壓檢壓計水面或浮漂于中心靜脈壓數(shù)值附近隨呼吸而上下波動。

二、兔、犬腹部手術(shù)：

腹部手術(shù)分上腹部和下腹部手術(shù)。上腹部手術(shù)的目的在于暴露肝、膽、膽總管、胃、十二指腸。下腹部手術(shù)的目的在于暴露輸尿管、膀胱等臟器。

1、  上腹部手術(shù)

按常規(guī)進行麻醉、固定、剪毛。從劍突下正中切口，沿腹白線打開腹腔。根據(jù)不同的實驗動物，切口長約3～5cm。根據(jù)不同的實驗?zāi)康�，分別按各實驗步驟進行。

2、  下腹部手術(shù)

從恥骨聯(lián)合向上沿中線作3～5cm長的切口，沿腹白線打開腹腔。

（1)管插管法：

將膀胱輕拉到腹壁外，暴露膀胱三角，仔細(xì)辨認(rèn)輸尿管，分離其周圍組織，分別用線在兩側(cè)輸尿管近膀胱處作結(jié)扎。在結(jié)扎上方剪一斜口，向腎臟方向分別插入充滿生理鹽水（最好是含肝素的生理鹽水，以防發(fā)生凝血)的細(xì)塑料管，用線結(jié)扎固定，此時可見到有尿液從插管內(nèi)慢慢地滴出，手術(shù)完畢后用38℃左右的溫?zé)嵘�理鹽水紗布蓋住腹部切口處，將兩插管借三通并在一起連到記滴裝置上（也可只插一側(cè)輸尿管，但尿液較少)。

（2)膀胱插管法

作切口方法同上，但只需切2～3cm長。將膀胱移至體外，在膀胱頂部做一荷包縫合，在縫線中心作一小切口，插入膀胱插管（也可用一彎頭滴管代替)，收縮縫線以關(guān)閉膀胱。如膀胱壁松弛而膀胱容積仍較大時，可用粗線將膀胱結(jié)扎掉一部分，使膀胱內(nèi)的貯尿量減至最少。膀胱插管的另一端通過橡皮管與記滴器相連。

三、兔、犬股部手術(shù)：

股部手術(shù)目的在于分離股神經(jīng)、股動、靜脈及進行股動、靜脈插管，以備放血、輸血輸液、注射藥物等用。

狗、兔等動物手術(shù)方法基本相同。以兔為例其基本步驟如下：

1、動物背位固定于兔臺上，腹股溝部剪毛。

2、用手指觸摸股動脈搏動，辨明動脈走向，在該處作局麻并作方向一致長約4～5 cm的切口。用止血鉗小心分離肌肉及深部筋膜，便清楚地暴露出股三角區(qū)。股三角區(qū)上界為鼠蹊韌帶，內(nèi)界為縫匠肌，外界為內(nèi)收長肌。股動脈及神經(jīng)即由此三角區(qū)通過。股神經(jīng)位于外側(cè)，股靜脈位于內(nèi)側(cè)，股動靜位于中間偏后。

3、用止血鉗細(xì)心將股神經(jīng)首先分出，然后分離股動、靜脈間的結(jié)締組織，清楚地暴露股靜脈，如作插管可分離出一段靜脈（約2～2.5cm)，穿兩根細(xì)線備用。再仔細(xì)分離股動脈，將股動脈與其背部的組織分離開，長約2～2.5cm ，切勿傷及股動脈分支。動脈下方穿兩根細(xì)線備用。

圖5—13  

4、股動、靜脈插管，狗血管粗大，插管較易，家兔血管細(xì)，插管較難，因此要細(xì)致耐心和掌握要領(lǐng)。

（1)股動脈插管術(shù)

將股動脈近心端用動脈夾夾住，遠(yuǎn)心端用細(xì)線結(jié)扎，牽引此線在貼近遠(yuǎn)心端結(jié)扎處剪開血管，向心插入動脈套針或塑料管，結(jié)扎固定后備放血或注射用。 

（2)股靜脈插管術(shù)

股靜脈插管術(shù)，除不需用動脈夾外，基本與股動脈插管相同。但因靜脈于遠(yuǎn)心端結(jié)扎后靜脈塌陷呈細(xì)線狀，較難插管，因此可試用靜脈充盈插管法，即：在股靜脈近心端用血管夾夾�。ㄒ部捎镁�提起)，活動肢體使股靜脈充盈，股靜脈遠(yuǎn)心端結(jié)扎線打一活扣，待手術(shù)者剪口插入套針后，再由助手迅速結(jié)扎緊。

(楊君佑)

第六節(jié) 兩棲類動物實驗常用手術(shù)方法

兩棲類動物的一些基本生命活動和生理功能與溫血動物類似，保持其離體組織器官生理活動所需的條件相對來說比較簡單，且易于控制，應(yīng)用手術(shù)方法制備離體組織或器官是機能實驗中常用的實驗操作技術(shù)。

一、  蟾蜍雙毀髓術(shù)

1．枕骨大孔的定位

（1)左手握住軀干及肢體，右手母指與食指握住蟾蜍的唇尖部前后搖動，在其頭部背面可見一明顯的凹陷點即為枕骨大孔處（如圖5—14)。

（2)左手握住蟾蜍軀干及肢體，食指向下壓蟾蜍的頭部，用金屬探針（蛙鉆)由枕骨沿正中線向脊柱端觸劃，當(dāng)觸到凹陷處即枕骨大孔處（如圖5—15)。

2．蟾蜍雙毀髓

金屬探針從枕骨大孔垂直進針后與軀干平行向前折插入顱腔左右攪動搗毀腦組織，再將針尖后退至枕骨大孔與軀干平行向后折刺入脊椎管搗毀脊髓至蟾蜍四肢松軟、呼吸消失（如圖5—16)既可備用。

二、坐骨神經(jīng)干標(biāo)本的制備

操作步驟如下：

1、  蟾蜍雙毀髓

見蟾蜍雙毀髓術(shù)。

2、剪除軀干上部、內(nèi)臟及皮膚

在薦尾關(guān)節(jié)（薦骨與尾骨連接)水平以上（前)lcm處用粗剪刀剪斷脊柱，將前半軀干、內(nèi)臟和皮膚一并拉剝棄之（如圖5—17 A、B、C)，僅保留一段腰背部脊柱及兩后肢，并將其放入盛有任氏液的器皿中備用。

 3、分離兩腿

用鑷子取出標(biāo)本放在蛙板上，用直手術(shù)剪沿脊柱正中線至恥骨聯(lián)合中央將標(biāo)本剪分為兩半，浸放于盛有任氏液的器皿中備用。

4、游離坐骨神經(jīng)干  

取一分離的后肢，腹面向上放在蛙板上，用玻璃分針游離坐骨神經(jīng)腹腔段，并在靠近脊柱處穿線結(jié)扎，線頭保留約1cm。然后換至背惻向上，固定標(biāo)本兩端，用玻璃分針沿坐骨神經(jīng)溝(股二頭肌與半膜肌肌間溝)小心分離出坐骨神經(jīng)的大腿段，用眼科剪剪去神經(jīng)干上各細(xì)小分支（切忌撕扯)，繼續(xù)向下分離至膝關(guān)節(jié)處可見有兩條分支，內(nèi)側(cè)位脛神經(jīng)，外側(cè)為腓神經(jīng)，沿任一分支(腓神經(jīng)較淺易分離)走向繼續(xù)向下分離至踝部，用線結(jié)扎，保留一小段線頭(約1cm)，在結(jié)扎線的外周端剪斷神經(jīng)，神經(jīng)干標(biāo)本全長約大于8厘米，將制備的坐骨神經(jīng)干標(biāo)本浸泡在盛有任氏液的器皿中備用（如圖5—18)。

三、 神經(jīng)肌肉標(biāo)本制備

1．坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本的制備

（1)先行蟾蜍雙毀髓術(shù)（同前)，剪除軀干上部、內(nèi)臟及皮膚（同前)，分離兩腿（同前)。

（2)取一分離的后肢，腹面向上放在蛙板上，用玻璃分針游離坐骨神經(jīng)腹腔段，并在靠近脊柱處穿線結(jié)扎，線頭保留約1cm。然后換至背惻向上，固定標(biāo)本兩端，用玻璃分針沿坐骨神經(jīng)溝(股二頭肌與半膜肌肌間溝)小心分離出坐骨神經(jīng)的大腿段，用眼科剪剪去神經(jīng)干上各細(xì)小分支（切忌撕扯)，用手術(shù)剪將坐骨神經(jīng)中樞連帶一小塊椎骨剪下，游離坐骨神經(jīng)至膝關(guān)節(jié)處。

（3)剪去大腿和膝關(guān)節(jié)周圍的肌肉，用剪刀刮凈股骨上的肌肉，保留膝關(guān)節(jié)端股骨長約1cm，剪去其余部分。

（4)用縫合線結(jié)扎小腿背惻的腓腸肌肌腱并在結(jié)扎處的后端剪斷，游離腓腸肌至膝關(guān)節(jié)處，將膝關(guān)節(jié)以下部分全部剪去，至此所保留的即為坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本（圖5—19A、B、C)

2．坐骨神經(jīng)縫匠肌標(biāo)本的制備

（1)取一分離的后肢，背位固定在蛙板上，找到起自恥骨外惻止于脛骨上端內(nèi)惻的縫匠肌。

（2)用玻璃分針沿縫匠肌內(nèi)惻邊緣（切勿過深)小心劃開肌外膜。將肌恥骨端連帶一小塊骨片切下，夾住骨片輕輕提起，向前向后分離縫匠肌，當(dāng)分離到后1/3段時注意尋找支配縫匠肌的坐骨神經(jīng)分支，然后由外周向中樞方向追蹤分離坐骨神經(jīng)至脊髓，連帶一小塊椎骨剪下。最后將縫匠肌肌脛骨端結(jié)扎、剪斷，游離（如圖3—20A、B、C)

四、蛙心標(biāo)本制備

1、蟾蜍雙毀髓（同前)。

2、暴露蛙心

將雙毀髓的蟾蜍仰臥固定在蛙板上，夾起胸骨后端的腹部皮膚剪一小口，再將手術(shù)剪由切口處伸人皮下向左右兩惻鎖骨外惻方向剪開皮膚，并向頭端掀開。用鑷子提起胸骨后端的腹肌并剪一小口，將手術(shù)剪由切口處伸人腹腔內(nèi)，緊貼胸壁（以免損壞心臟和血管)沿皮膚切口剪開肌肉，剪斷左右鳥骨和鎖骨，使創(chuàng)口呈倒三角形。用眼科鑷提起心包膜并用眼科剪剪開即可暴露心臟（如圖5—21 A、B)。

3、蛙心插管：

在暴露心臟的主動脈干下方引兩根線，一條在主動脈上端結(jié)扎作插管時牽引用，另一根則在動脈圓錐上方，系一松結(jié)用于結(jié)扎固定蛙心插管。左手持左主動脈遠(yuǎn)心端的結(jié)扎線，用眼科剪在松結(jié)上方左主動脈根部剪一小斜口，右手將盛有少許任氏液，大小適宜的蛙心插管由此剪口處插入動脈圓錐，當(dāng)插管頭到達動脈圓錐時，再將插管稍向后退，并轉(zhuǎn)向心室中央方向，在心室收縮期插入心室，判斷蛙心插管是否進入心室可根據(jù)插管內(nèi)的任氏液液面能否隨心室的舒縮而上下波動。如蛙心插管已進入心室，則將預(yù)先準(zhǔn)備好的松結(jié)扎緊，并固定在蛙心插管的側(cè)鉤上以免蛙心插管滑出心室。剪斷主動脈左右分支。輕輕提起蛙心插管以抬高心臟，用一線在靜脈竇與腔靜脈交界處作一結(jié)扎，結(jié)扎線應(yīng)盡量下壓，以免傷及靜脈竇，在結(jié)扎線外側(cè)剪斷所有組織，將蛙心游離出來即可（如圖5—22 A、B)。

  圖5—22

（周太國   劉建芝)

第七節(jié)  實驗動物的血壓、呼吸檢測及記錄方法

1、  器材

PCLAB生物信號采集處理系統(tǒng)，血壓傳感器、呼吸傳感器及水銀檢壓計（為血壓傳感器定標(biāo)用)，動物手術(shù)臺及器械、藥品等。

2、連接實驗裝置

記錄血壓或呼吸的手術(shù)操作詳見第五節(jié)急性動物實驗的常用手術(shù)方法。將血壓傳感器接PCLAB的輸入通道2，呼吸傳感器接輸入通道4。

放大器面板按鈕調(diào)整：

（1)輸入3、輸入4：按下上部小方開關(guān)，置于AC（交流)位置。

（2)SR按鈕：置抬起位置，4通道為正常信號輸入。

（3)輸入2：抬起上部小方開關(guān)，置于DC（直流)位置。

3、軟件設(shè)置：

（1)點擊快捷工具欄上的“采樣條件設(shè)置”快捷按鈕，打開“采樣條件”設(shè)定如下：

顯示模式，連續(xù)記錄，采樣間隔1ms，采樣通選擇：1（或者2)、4通道。

（2)點擊確定。

（3)選定各通道采樣內(nèi)容，第一（或者第二)通道為血壓（mmHg)，第四通道為呼吸（g)。

4、為血壓傳感器定標(biāo)：（注意：本步驟最好在血壓傳感器接入動脈血管前進行)。

（1)按以下方法連接好傳感器與水銀檢壓計。

（2)轉(zhuǎn)動三通開關(guān)至1、2通，使血壓換能器與大氣相通，PCLAB開始采樣并將第二通道基線調(diào)至與零線相重合。然后接上注射器，向管路內(nèi)注射液體，使水銀檢壓計逐漸升至某一固定壓力值（如100mmHg)；保持采樣一小段時間。

（3)用鼠標(biāo)點擊波形曲線上升至平穩(wěn)段的一點，然后移動鼠標(biāo)至第二通道“右顯示控制區(qū)”內(nèi)“血壓（mmHg)” 處, 單擊鼠標(biāo)右鍵,打開定標(biāo)窗口；在新值處填上水銀檢壓計標(biāo)出的壓力值（如100mmHg)，點擊“確定”完成定標(biāo)。

（4)轉(zhuǎn)動三通開關(guān)至2、3通接入動脈血管，即可準(zhǔn)備開始采集動脈血壓信號。

A、開始采樣：點擊“開始”按鈕，系統(tǒng)按記錄儀模式描記血壓、呼吸二道波形曲線。采樣結(jié)束后按“停止”鍵。

注意：在采樣過程中間，如果需要，可暫時停止采樣，再次采樣時數(shù)據(jù)會自動按在上次采樣之后，中間用一黑豎線隔開。如果需要存盤，可點擊“觀察”按鈕，變?yōu)椤按姹P”，將理想波形曲線自動以Temp000.add，Temp001.add等文件各存入硬盤。

B、打標(biāo)記：在需要打標(biāo)記時，可隨時點擊標(biāo)記按鈕為實驗逐一添加標(biāo)記。

C、觀察測量：采樣停止后，按下快捷工具欄中的觀察快捷，用十字光標(biāo)即可測量各點值。也可以按下快捷工具欄中的“測量”快捷鍵，用鼠標(biāo)拖選要測量的曲線段，由測量窗得到各項測量參數(shù)。

D、打印輸出：為將二個波形曲線一次打印輸出，可將鼠標(biāo)移至?xí)r間顯示區(qū)，拖動鼠標(biāo)，選中要計算打印波形曲線，再點擊“文件”中的“打印預(yù)覽”，設(shè)置為“單道顯示”，點擊“打印”即可完成計算打印工作。

（楊君佑  陳 凱)