外來(lái)化合物對(duì)生殖過(guò)程作用的評(píng)定主要通過(guò)生殖毒性試驗(yàn)來(lái)進(jìn)行，過(guò)去也稱為繁殖試驗(yàn)。生殖毒性試驗(yàn)可以全面反映外來(lái)化合物對(duì)性腺功能、發(fā)情周期、交配行為、受孕、妊娠過(guò)程、分娩、授乳以及幼仔斷奶后生長(zhǎng)發(fā)育可能發(fā)生的影響。評(píng)定的主要依據(jù)是交配后母體受孕情況（受孕率)、妊娠過(guò)程情況（正常妊娠率)、子代動(dòng)物分娩出生情況（出生存活率)、授乳哺育情況（哺育成活率)以及斷奶后發(fā)育情況等。此外還可同時(shí)觀察出生幼仔是否有畸形出現(xiàn)，但畸形觀察主要在發(fā)育毒性評(píng)定中進(jìn)行。 （一)試驗(yàn)方法原則 生殖毒性試驗(yàn)多用性成熟大鼠，也可用小鼠或家兔。大鼠自然受孕率較小鼠為高，較為理想。 一般設(shè)三個(gè)劑量組，另設(shè)對(duì)照組。最高劑量組劑量應(yīng)該超過(guò)預(yù)期人類實(shí)際接觸水平，希望能使親代動(dòng)物出現(xiàn)輕度中毒，但不出現(xiàn)死亡或死亡率不超過(guò)10%，也不能完全喪失生育能力。低劑量組的親代動(dòng)物不應(yīng)觀察到任何中毒癥狀。另設(shè)中間劑量組應(yīng)僅能出現(xiàn)極為輕微的中毒癥狀。中間劑量與高劑量和低劑量應(yīng)呈等比級(jí)數(shù)。 最高劑量組輕度中毒的概念是進(jìn)食量顯著減少，體重明顯下降。要求最高劑量組出現(xiàn)輕度中毒的目的是表明在已能引起中毒劑量下，如仍不致影響正常生殖過(guò)程，則表示該受試物確實(shí)不具有生殖毒性作用。反之，如劑量過(guò)低，則難于確定受試物是否確實(shí)不具有生殖毒性，有可能因劑量不足，未達(dá)到最小有作用劑量。 劑量的確定可用少數(shù)動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試，如已進(jìn)行過(guò)亞慢性和急性毒性試驗(yàn)，則最高劑量也可略高于亞慢性毒性試驗(yàn)中最大無(wú)作用劑量，或相當(dāng)于LD50的1/10左右。最低劑量可相當(dāng)于最高劑量的1/30。如經(jīng)多次試驗(yàn)確實(shí)證實(shí)1 000mg／kg體重劑量對(duì)生育力無(wú)損害作用，或最高劑量可引起親代動(dòng)物表現(xiàn)一般毒性作用，但對(duì)生育力無(wú)不利影響，則可不進(jìn)行其它劑量試驗(yàn)。 動(dòng)物接觸受試物的方式應(yīng)參照人類實(shí)際接觸途徑。一般可混入飼料或飲水中，由動(dòng)物攝��；也可采國(guó)家醫(yī)學(xué)考試網(wǎng)用灌胃或膠囊法。試驗(yàn)期間每周應(yīng)根據(jù)動(dòng)物體重并參照進(jìn)食量（大鼠可按每日15～20g，小鼠每日5～10g計(jì)算)和要求的攝入劑量（mg/kg體重／日)調(diào)整飼料中應(yīng)混入受試物的數(shù)量。應(yīng)始終保持達(dá)到動(dòng)物應(yīng)攝入的劑量。 利用大鼠或小鼠進(jìn)行試驗(yàn)時(shí)，每組雌雄各16～20只，或雌性16～20只，雄性8～10只。 （二)試驗(yàn)方法 現(xiàn)以大鼠為例，介紹三代兩窩生殖試驗(yàn)法和兩代一窩生殖試驗(yàn)法： 1. 三代兩窩生殖試驗(yàn) 大鼠斷奶或出生8周后，開(kāi)始喂受試物或以其它方式與受試物接觸，共進(jìn)行8～12周，即直到性發(fā)育成熟，相當(dāng)出生后4個(gè)月左右。每周至少稱體重一次，記錄進(jìn)食量并觀察有無(wú)中毒癥狀或死亡。將雌雄親代動(dòng)物（F0)同籠交配，雌雄比例為1：1或2：1，直到受孕或進(jìn)行3周為止。雌鼠受孕后即單籠飼養(yǎng)，繼續(xù)接觸受試物。交配3周后，如仍未受孕，則停止交配，并進(jìn)行生殖器官病理學(xué)檢查。 確定是否受孕的方法是每日清晨進(jìn)行雌性動(dòng)物陰道涂片，檢查有無(wú)精子；亦可檢查陰道有無(wú)陰栓出現(xiàn)，以確定受精日期。小鼠陰栓可在陰道口存留較長(zhǎng)時(shí)間，但在大鼠極易脫落，次晨檢查時(shí)往往在籠下糞便盤中檢出。發(fā)現(xiàn)陰栓或檢出精子，即為受孕0日，也有作為受孕第1日。 親代動(dòng)物（F0)所生仔鼠為第一代（F1)。出生后應(yīng)檢查每窩幼仔數(shù)、死亡數(shù)以及肉眼可見(jiàn)幼仔畸形。出生后第4天和第21天逐個(gè)稱取重量，仔鼠斷奶后，母鼠休息10天，再與雄鼠交配一次，并生出第二窩仔鼠，親代共生出仔鼠兩窩，分別為F1a 和F1b。F1b出生后，將雄性親鼠淘汰，雌性親鼠繼續(xù)喂受試物，直至F1b出生后21天斷奶為止。F1a斷奶后觀察其發(fā)育情況，不再喂受試物。F1b斷奶后，繼續(xù)接觸受試物8 ～12周，直到性發(fā)育成熟，選出雌雄各16～20只，按前法進(jìn)行交配。F1b所產(chǎn)第一窩幼仔為F2a，F(xiàn)2a 斷奶后，其母鼠F1b休息10天，再次交配，所生幼仔為F2b，F(xiàn)2b 斷奶后，將F1b 淘汰。F2b 交配處理方法與F1b 相同。但F2b 也可只交配一次，所產(chǎn)仔鼠為F3a，不再進(jìn)行第二次交配，試驗(yàn)結(jié)束。 2．兩代一窩和一代一窩生殖試驗(yàn) 近年來(lái)許多國(guó)家與機(jī)構(gòu)多規(guī)定采用兩代一窩或一代一窩試驗(yàn)法，我國(guó)國(guó)家環(huán)境保護(hù)局《化學(xué)品測(cè)試準(zhǔn)則（1990年)》即采用兩代生殖試驗(yàn)或一代生殖試驗(yàn)。兩代一窩生殖試驗(yàn)法基本程序與三代兩窩試驗(yàn)法相同，但只進(jìn)行到第二代F2，每代只交配一窩。 （三)觀察指標(biāo) 在上述各種生殖毒性試驗(yàn)中，根據(jù)哺乳動(dòng)物全部生育繁殖過(guò)程，可觀察下列4個(gè)指標(biāo)： 1．受孕率 反映雌性動(dòng)物生育能力以及雌性動(dòng)物受孕情況。 妊娠雌性動(dòng)物數(shù) 受孕率= ———————— × 100% 交配雌性動(dòng)物數(shù) 2．正常分娩率 反映雌性動(dòng)物妊娠過(guò)程是否受到影響。 正常分娩雌性動(dòng)物數(shù) 正常分娩率= ————————————× 100% 妊娠動(dòng)物數(shù) 3．幼仔出生存活率 反映雌性動(dòng)物分娩過(guò)程是否正常，如分娩過(guò)程受到影響，則幼仔往往在出生4天內(nèi)死亡。 出生后4天存活幼仔數(shù) 幼仔出生存活率= ———————————× 100% 分娩時(shí)出生幼仔數(shù) 4．幼仔哺乳成活率 反映雌性動(dòng)物授乳哺育幼仔的能力。 21天斷奶幼仔存活數(shù) 幼仔哺乳成活率= ———————————× 100% 出生后4天幼仔存活數(shù) | 
