臨床免疫學及檢驗授課教案-理論課教案:金免疫技術

教案

授課內容(章，節(jié))

題 目

第二十二章 金免疫技術

授課教師單位

檢驗系

教研室

臨床免疫

職稱

主管技師

授課方式

大班

授課時數(shù)

2學時

授課對象     年級(系)  班

授課時間

2006  年 月   日

授課地點

12-2A

采用教材版本

中國醫(yī)藥科技出版社

教學目的與要求：

1、掌握膠體金的特性

2、熟悉膠體金及免疫金的制備

3、掌握金免疫測定技術的分類及各種試驗的原理，熟悉金免疫測定技術的臨床應用及評價

4、熟悉免疫金(銀)光鏡染色技術的原理

5、了解金免疫組織化學技術的臨床應用與評價

授課內容(要點)

時間

分配

1、  復習免疫技術、標記免疫技術的概念、特點

2、  簡述金免疫技術的發(fā)展史、分類及應用

3、  重點講述膠體金的特性(膠體性質、光吸收性、呈色性)

4、  講述膠體金的制備：原理、最常用的制備方法、操作要點、制備過程中的注意事項

5、  講述膠體金的鑒定和保存

6、  簡述免疫金的特性及制備原理

7、  免疫金的制備要點

8、  金免疫測定技術的基本原理，特點及分類

9、  斑點免疫滲濾試驗的基本試劑組成

10、  斑點免疫滲濾試驗的基本原理，操作示意

11、  重點講述斑點免疫滲濾試驗的技術類型：原理、質控

12、  斑點金免疫層析試驗的試劑組成、基本原理

13、  重點講述金免疫層析試驗的分類、原理

14、  斑點免疫滲濾試驗與金免疫層析試驗的異同點總結

15、  簡述金標法的優(yōu)勢、劣勢

16、  簡述免疫金(銀)染色法的原理

17、  簡述金免疫組織化學技術的臨床應用

18、  總結

5分鐘

5分鐘

10分鐘

5分鐘

3分鐘

4分鐘

3分鐘

3分鐘

2分鐘

2分鐘

9分鐘

5分鐘

15分鐘

1.5分鐘

3分鐘

1.5分鐘

1.5分鐘

1.5分鐘

講課重點和難點（采用何種方式或方法來解決)

1、  膠體金的特性：動畫示意膠體金的膠體性質，圖表顯示膠體金的吸收性(膠體金的光吸收峰波長隨顆粒的大小而變化)，顏色顯示膠體金的呈色性(不同大小的膠體金呈現(xiàn)不同的顏色)

2、  免疫金制備要點：動畫示意如何進行蛋白質最適標記量的確定

3、  斑點金免疫滲濾試驗的原理：動畫圖示雙抗體夾心法及間接法的原理，并舉例說明

4、  斑點金免疫滲濾試驗的質控：動畫圖示雙抗體夾心法及間接法的質控方式，判斷方式

5、  斑點金免疫層析試驗的原理：動畫圖示雙抗體夾心法、競爭法及間接法的原理，并舉例說明

教學過程設計：（授課中對以下內容采取的措施)

1．加強基礎與臨床的聯(lián)系：

A、臨床上主要用到的金顆粒直徑為5-20nm，呈紅色；2-5nm主要用于組化技術

B、金免疫技術中的金免疫測定技術與臨床關系較為密切，臨床中的許多急診項目，如HCG、HbsAg、HIV抗體等的檢測都是采用金免疫測定技術進行測定

C、講述斑點金免疫滲濾試驗及斑點金免疫層析試驗時，舉例說明，斑點金免疫滲濾試驗檢測抗dsDNA抗體，斑點金免疫層析試驗檢測HbsAg、HCG。

D、講述金標法的優(yōu)勢及劣勢時，重點突出“金標法“為何有“床邊檢驗”之稱，金標法在臨床中的應用優(yōu)勢，在臨床中已開展的項目。

2．啟發(fā)引導學生思維：

A、講解金免疫技術前，先引導學生復習免疫技術及標記免疫技術的概念、特點，和前面的章節(jié)進行比較，使同學對本章節(jié)的內容有一個大概的認識

B、講述斑點金免疫滲濾試驗及斑點金免疫層析試驗的各個類型原理時，引導學生依據(jù)檢測的對象不同，該選用什么檢測方法，推測檢測方法該如何建立，試劑條每個部分包被的成分是什么，整個反應的流程及原理是怎樣的。

3．采用英語專業(yè)詞匯：

金免疫技術(colloidal gold immunoassay)

膠體金(colloidal gold)

免疫金(immunogold)

斑點金免疫滲濾試驗（ dot immunogold filtration assay,DIGFA )

斑點金免疫層析試驗 （ dot immunogold chromatographic assay,DICA )

4．指導學生自學：

金標技術的應用非常廣泛，已應用于臨床的很多領域。由于目前它還是定性分析，故主要用以檢測正常體認中不存在的生物活性物質（如傳染病的抗原及抗體)，以及正常情況下體液中含量很低而在某些疾病中升高的生物活性物質。隨著技術的進展，對某些可確定診斷的、有正常上限值（cutoff)的生物活性物質也可進行檢測。學生可以上網查找金標技術在臨床檢驗中的應用的相關資料。

5．學科進展內容：

1978年，Geobegan等將膠體金標記抗體用于普通光鏡下檢測B淋巴細腦表面膜免疫球蛋白，建立了光鏡水平的免疫金染色(Immunogold staining，IGS)。1981年Danscher用銀顯影方法增強金顆粒的可見度，并提高了靈敏度。1983年，Holgate等又加以改進，將免疫金染色與銀顯影技術相結合，稱為免疫金銀染色法(Immunogold silver staining，IGSS)。由于IGS和IGSS兩種方法具有試劑制備簡便，特異性強，靈敏度高，應用范圍廣，并可用于雙重和多重標記等優(yōu)點，被廣泛應用于醫(yī)學和細胞生物學研究領域，是目前免疫組織化學技術中較常用的敏感方法之一。近年來，膠體金標記技術進一步發(fā)展應用于免疫轉印、流式細胞術(flow cytometry，F(xiàn)CM)、液相免疫測定、固相斑點金／銀染色(dot IGS／IGSS)及斑點金免疫滲濾測定法(dot immunogold filtration assay，DIGFA)等多種標記免疫檢測方法。

課堂提問設計：

1、  什么是免疫技術，什么是標記免疫技術？

2、  斑點免疫滲濾試驗中的質控點如何設計？包被的是什么成分？

3、G區(qū)如果包被的是鼠源性的金標特異性抗體，則C區(qū)包被的是什么物質？醫(yī)學招聘網

教師與學生互動的設計：

  請解各種反應類型的原理時，舉例說明，引導學生依據(jù)檢測對象的種類不同、反應類型的不同、試劑的不同來推理試驗的原理。

教學方法與手段（采用何種直觀教具和數(shù)量)(請打√)

板書設計√

掛圖 投影 √   幻燈 錄像 CAI課件√ 模型

其它：

課時具體安排：

大課講授，共2學時，80分鐘

教學改革措施（授課形式、課堂提問、思考題、復習提綱、測試題)

1、充分多媒體的優(yōu)勢，以動畫的形式將膠體金的特性、各種試驗的反應原理形象地表現(xiàn)出來，學生易于理解

2、密切聯(lián)系臨床，將臨床上常用的檢測項目融合到課堂講授中，如斑點金免疫層析試驗檢測HbsAg，斑點金免疫滲濾試驗檢測抗dSDNA

3、啟發(fā)性教學，適當?shù)靥釂�，引導學生推理檢測的原理，加深印象

4、總結復習，開課前先與同學復習相關知識，使同學了解本章節(jié)與前幾堂課的異同點，便于同學歸納知識點。課堂結束前，將本章節(jié)的重點內容再次強調，例如膠體金的特性，金免疫測定技術的分類等。

輔導的問題與難點：

  斑點金免疫層析試驗間接法的原理：先動畫圖示操作的流程，再動畫圖示反應原理、結果的判斷，采用反流免疫層析法的作用。

備課主要參考資料（圖書、文獻)：

1、免疫膠體金的制備及其在醫(yī)學檢驗中的應用，周友泉

2、膠體金快速斑點結合免疫分析，劉宏偉 

3、免疫學和免疫學檢驗，陶義訓

授課教師對此次授課的自我評價：

教學內容充實，時間安排合理，多媒體課件制備精美，理論結合實際，重點突出。

教學后記（隨筆)：

隨著免疫分析日益廣泛應用于以臨床為主以及非臨床領域的診斷工業(yè)（diagnostic industry)，免疫分析向兩個方向發(fā)展：一類為全自動化的免疫分析；另一類為以硝酸纖維膜為載體的快速免疫分析。前者需要價格昂貴的全自動payment-defi.com/zhuyuan/儀器及與儀器嚴格配套的各種試劑盒，目前只能在醫(yī)療及檢測中心應用，雖也能較快速給出結果，但仍需一定時間，不適合遠離醫(yī)療及檢測中心的地區(qū)，更不能用于“患者床旁檢驗”（real time clinical decision)和普查的需要，在酶免疫分析的基礎上，主要以硝酸纖維素膜為載體的快速診斷方法迅速和廣泛地發(fā)展起來，即快速斑點免疫結合分析（dot immunobinding assay, DIBA)。通過本章的學習，學生了解了金免疫技術的發(fā)展歷史，掌握了膠體金的特性、膠體金和免疫金的制備要點，掌握了各種金免疫測定技術的原理，了解了金免疫技術的優(yōu)勢及其在臨床中的應用。

學生評價：

教學內容充實，重點突出，密切聯(lián)系臨床實際

教研室主任評價：

教學內容充實，邏輯結構安排合理。教學深度適中，時間安排合理，理論板書和臨床實例結合恰當，重點、難點突出，學生易掌握，達到了預期效果。

教案書寫要求：文字通暢，書寫工整或電腦打印。