附2： 廣州醫(yī)科大學第一臨床學院
實驗（含診斷學、外科學總論)帶教教案
| 教研室 | 臨床免疫檢驗 | 課程 名稱 | 免疫學及檢驗 | 學時 | 4 | 檢驗專業(yè)2003 級 1、2、3班 | ||||
| 帶教時間 | 2006 年11 月2日--- 2006 年 11 月 3 日 | 教師 姓名 | 王慧 | 職稱 | 主管技師 | |||||
| 實檢（見習)項目 | 單個核細胞的分離及活性鑒定 | |||||||||
| 本次實驗 （見習) 目的、 要求 | 1．掌握單個核細胞分離的有原理及操作方法，熟悉其意義及應用 2．掌握細胞活性測定的原理及方法，熟悉及意義 | |||||||||
| 內(nèi)容與安排 | 學時 | |||||||||
| 一、介紹本次實驗、見習的重點及安排 （實驗課應包括：1、實驗標本的采集，2、實驗操作步驟， 3、實驗操作過程注意事項，4、實驗結(jié)果的評價及臨床意義) 1、原理 根據(jù)物理學中顆粒沉降原理，不同密度的物質(zhì)顆粒在其沉降運動中可因其比重的差別而處于不同的分布位置。利用此原理可設(shè)計一定比重的液體界面，將外周血中各種不同比重的細胞通過離心沉降而達到使其彼此分離的目的。 本次實驗采用的是Ficoll分層液法： 主要用于分離外周血中的單個核細胞，是一種單次密度梯度離心分離法。聚蔗糖－泛影葡胺是一種較理想的細胞分層液，其主要成分是一種合成的蔗糖聚合物稱聚蔗糖（商品名為Ficoll)，分離人外周淋巴細胞以密度為1.077±0.001的分層液最佳，因為人的紅細胞密度為1.093，粒細胞密度住院醫(yī)師為1.092，單個核細胞在1.076～1.090之間。 2、payment-defi.com器材與試劑 3、單個核細胞分離的操作步驟 4、細胞分離的注意事項：1). 注意分離液與稀釋血的比例，一般以1:2~1:3為宜。 2). 分離時所取的離心速度與時間，因各臺離心機的離心半徑而異，需事先通過預試驗決定。 3). 加入稀釋血時應十分小心，注意保護試管內(nèi)的界面，勿使混淆影響分離效果。 5、細胞計數(shù)及活性鑒定：臺盼蘭染色法，臺盼藍又稱錐藍，是一種陰離子型染料，這種染料不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色，但死亡細胞的細胞膜通透性增加，可使染料通過細胞膜進入細胞內(nèi)，使死細胞著色呈藍色。 6、細胞計數(shù)及活性鑒定的注意事項：3分鐘內(nèi)一定要進行檢測，時間太長，活細胞也會染上顏色。 7、學生分組試驗 二、討論思考題： 1、如所分離的單個核細胞中混有紅細胞，該怎樣處理？ 2、現(xiàn)分離得到5ML淋巴細胞懸液，計數(shù)4大格，計數(shù)為600，若要校正細胞濃度為1*105/ML，如何校正？ 3、密度梯度離心法分離人體外周血單個核細胞的最適比重是多少？為什么？ 三、小結(jié)要點 1、實驗操作情況 2、需掌握顯微鏡的使用情況 四、布置學生作業(yè)內(nèi)容 1、1、書寫實驗報告(包括：實驗目的、原理、器材和試劑、操作步驟、注意事項、方法學評價、實驗結(jié)果、結(jié)果分析及結(jié)論、討論) 2、思考題 五、下次實驗（見習)課預習范圍及后續(xù)程介紹 下次實驗課內(nèi)容為：循環(huán)免疫復合物測定 預習內(nèi)容：什么是循環(huán)免疫復合物？什么是III型變態(tài)反應？ | 4學時 | |||||||||
| 教案制定時間： 2006 年 月 日 帶教老師簽名：王慧 | ||||||||||
| 專業(yè)主任審閱意見； 簽名： 年 月 日 | ||||||||||
