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第2次課 授課時間：2006年 月 日
課程名稱 | 年級 | 05級 | 專業(yè)、層次 | 臨床醫(yī)學(xué)等各專業(yè)本科 | ||||
授課教師 | 鄔于川 | 職稱 | 副教授 | 課型（大、小) | 小 | 學(xué)時 | 3 | |
授課題目 | 小吞噬實驗（二)、自作溶菌酶實驗 | |||||||
基本教材及主要參考書 | 醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實驗指導(dǎo) 鄔于川主編 瀘州醫(yī)學(xué)院印刷廠2002 P1~3 現(xiàn)代免疫學(xué)實驗技術(shù) 沈關(guān)心、周汝麟主編 湖北科學(xué)技術(shù)出版社 1998 | |||||||
目的與要求： 掌握小吞噬實驗的結(jié)果分析； 掌握溶菌酶實驗的原理、方法及結(jié)果分析 | ||||||||
教學(xué)內(nèi)容與時間安排： 一、自作小吞噬實驗（二)---50min 二、溶菌酶實驗--- 20min 三、設(shè)計性試驗：檢測可溶性抗原 方案設(shè)計 10min 教學(xué)方法：講授、板書、示教 | ||||||||
教學(xué)重點及如何突出重點、難點及如何突破難點： 教學(xué)重點 小吞噬實驗的結(jié)果分析；溶菌酶實驗的原理及結(jié)果分析 教學(xué)難點 小吞噬實驗的結(jié)果分析 提示：規(guī)范使用顯微鏡。轉(zhuǎn)換視野，仔細(xì)觀察鏡下標(biāo)本的形態(tài)及染色性，對照示教片，結(jié)合組織胚胎學(xué)中有關(guān)血細(xì)胞形態(tài)染色的知識正確識別中性粒細(xì)胞及被其吞噬的金黃色葡萄球菌。 | ||||||||
教研室審閱意見： 教研室主任簽名： 年 月 日 | ||||||||
基本內(nèi)容 | 教學(xué)手段 | 課堂設(shè)計和時間安排 |
板書提綱 一、自作小吞噬實驗（二) （一)結(jié)果觀察 （二)分析 中性粒細(xì)胞及葡萄球菌 100個中性粒細(xì)胞中吞噬細(xì)胞的中性粒細(xì)胞數(shù) 吞噬百分率= ───────────────×100% 100（中性粒細(xì)胞數(shù)) 100個中性粒細(xì)胞吞噬的細(xì)菌總數(shù) 吞噬指數(shù)= ───────────────── 100（中性粒細(xì)胞數(shù))
二、溶菌酶實驗 （一)原理 革蘭陽性菌 β－1，4糖苷鍵 標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶 （二)材料與方法 生理鹽水 生理鹽水 標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶 唾液 標(biāo)本1 淚液 標(biāo)本2 圖2-1溶菌酶實試驗示意圖 （三)結(jié)果 溶菌環(huán) 標(biāo)準(zhǔn)曲線 教學(xué)進(jìn)程 分組 一 小吞噬實驗（二) 【結(jié)果】 油鏡下見中性粒細(xì)胞核呈深紫紅色，分葉明顯，胞漿呈淡紅色，細(xì)菌被吞入胞漿，呈紫色。隨機(jī)數(shù)100個中性粒細(xì)胞，分別計數(shù)吞噬有細(xì)菌的中性粒細(xì)胞數(shù)和所吞噬的細(xì)菌總數(shù)，按照下列公式，計算出吞噬百分率和吞噬指數(shù)。 100個中性粒細(xì)胞中吞噬細(xì)胞的中性粒細(xì)胞數(shù) 吞噬百分率= ───────────────×100% 100（中性粒細(xì)胞數(shù)) 100個中性粒細(xì)胞吞噬的細(xì)菌總數(shù) 吞噬指數(shù)= ───────────────── 100（中性粒細(xì)胞數(shù)) 【注意事項】 ⒈ 所用器材要潔凈。 ⒉ 愈接近片子末梢細(xì)胞數(shù)愈多，計數(shù)時應(yīng)取片子前、中、后三段計數(shù)，以提高準(zhǔn)確性。 二 溶菌酶實驗（溶菌酶的溶菌作用) 【原理】溶菌酶（lysozyme)主要由吞噬細(xì)胞合成并分泌的一種小分子蛋白質(zhì)，屬乙酰氨基多糖酶。它的等電點高（PH 11.0)，能與細(xì)菌牢固的結(jié)合，并裂解肽聚糖中N-乙酰葡糖胺和N-乙酰胞壁酸之間的β-1，4糖苷鍵，使細(xì)菌溶解死亡。革蘭氏陰性菌肽聚糖層少，又有外膜保護(hù)，故在一般情況下不受溶菌酶的影響。 【意義】溶菌酶廣泛分布于機(jī)體的組織、體液與分泌液，其中淚液含量最高，約血清的100~150倍。臨床慢性支氣管炎，局部免疫功能降低，唾液中溶菌酶低于正常，各種類型的白血病患者血清和尿中溶菌酶含量有所增加。 【材料】 ⒈ 唾液、淚液（或乳汁)、標(biāo)準(zhǔn)溶菌酶（1ng/ml)、生理鹽水、2~5%瓊脂鹽水。 ⒉ 細(xì)球菌（M.lysodeikticus)。 ⒊ 毛細(xì)吸管、打孔器（或濾紙片)、無菌平皿等。 【方法】 ⒈ 取一無菌平皿，傾入5ml細(xì)球菌懸液，再傾入5ml已溶化的2.5%瓊脂鹽水,迅速混勻,平放待凝。 ⒉ 用打孔器按圖2-1 所示打孔，挑去孔內(nèi)瓊脂，用毛細(xì)吸管分別加唾液、淚液（或乳汁)、標(biāo)準(zhǔn)的溶菌酶和生理鹽水（或用無菌圓形濾紙片分別蘸取上述四種液體，按圖2-1所示貼于平皿表面)。 ⒊ 37℃過夜，觀察結(jié)果。 【結(jié)果】 孔周或濾紙片周圍出現(xiàn)的透明圈即為溶菌環(huán)。注意比較溶菌環(huán)的大小。 【注意事項】 ⒈ 加樣時，樣品避免溢出孔外，孔內(nèi)不應(yīng)有氣泡。 ⒉ 作定量檢測時，先要用標(biāo)準(zhǔn)品制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后根據(jù)環(huán)的直徑及標(biāo)準(zhǔn)曲線求出樣品含量。 ⒊ 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制后，每次檢驗樣品時，最好在同一平皿上備有標(biāo)準(zhǔn)品的對照，以資比較。 方案設(shè)計：定量檢測可溶性抗原 清潔 | 講授 觀察 計數(shù)/畫圖 ―――― ---板書、 講授 ---操作 ―――― | 約20min ---約10min ---約30min ---約10min 共約50min ―――――― 約10執(zhí)業(yè)醫(yī)師min 約15min ―――――― 10min 約5min |
小 結(jié) | 1、各種血細(xì)胞的特點 2、陽性結(jié)果確認(rèn) 3、吞噬指數(shù)和吞噬百分率的計算 4、小吞噬實驗意義 5、溶菌酶的作用原理 |
復(fù) 習(xí) 考 題 、 作 業(yè) 題 | 思考題 1、什么是吞噬指數(shù)和百分率？ 2、溶菌酶的溶菌作用有什么生物學(xué)意義？ |
下 次 課 預(yù) 習(xí) 要 點 | 一、凝集反應(yīng) 二、酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA) |
實 施 情 況 及 分 析 |
