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如何提高免疫保護效果一直是疫苗研究的熱點。佐劑對免疫效果有一定的影響,依據(jù)免疫途徑、免疫反應(yīng)類型、免疫持續(xù)時間及抗原質(zhì)量等因素的不同,選擇合適的佐劑[8],可增強疫苗的免疫原性,減少提供保護性免疫所需的抗原或接種次數(shù),優(yōu)化免疫應(yīng)答,是有效提高重組抗原免疫保護力的手段之一。目前已使用的佐劑或增強劑有鋁鹽、礦物油、鈣鹽、胞壁酰肽、生物降解多聚體、微生物片段、多糖、細胞因子和納米佐劑等[9]。弗氏佐劑是常見的一種,但鑒于弗氏不完全佐劑(FCA)毒副作用大及在機體內(nèi)長期殘留等難以解決的缺點,因此研究高效低毒的人用性佐劑不失為血吸蟲免疫預(yù)防的有效途徑[10]。Montanide ISA 206佐劑(人用)是一種水/油/水(W/O/W)型的新型佐劑,當油性佐劑與水相混合后便形成水包油乳劑,具有易乳化、黏性低、易注射等特點,W/O/W型的結(jié)構(gòu)使得包含于外部水相中的抗原表位更突出,因而更容易被機體的免疫系統(tǒng)所識別;內(nèi)部水相中的抗原能顆�；徛尫�,所以它能夠持續(xù)激發(fā)機體的免疫應(yīng)答[11,12]。Montanide ISA 206與抗原乳化的研究表明,這種乳化劑完全可能保持持續(xù)的安全性,乳化物顆粒大小具有良好的可控性,抗原的使用劑量可限制至低量,且在乳化劑中穩(wěn)定存在,可在人體使用。蘇良科等[13]在研制預(yù)防豬鏈球菌病的亞單位疫苗中,經(jīng)比較發(fā)現(xiàn)Montanide ISA 206佐劑的免疫增強作用要高于鋁佐劑和CpG佐劑。因此,選擇合適的佐劑有助于提高疫苗的免疫原性。
本研究在前期成功克隆表達日本血吸蟲HGPRT重組蛋白的基礎(chǔ)上,通過改變免疫方式,分別使用Montanide ISA 206佐劑、弗氏佐劑與重組蛋白一起免疫C57BL/6小鼠,大大提高了重組蛋白的免疫原性,誘導出小鼠體內(nèi)較高水平的特異性IgG。并且重組蛋白加佐劑組誘導的免疫保護力均大大提高,減蟲率、減雌雄合抱率和肝組織減卵率分別達到了53.7%、59.3%、44.9%和43.3%、44.1%、33.0%;減蟲率均超過了40%。其中Montanide ISA 206佐劑與重組蛋白聯(lián)合組免疫保護力更加明顯,減卵率也超過了40%。因此,日本血吸蟲在宿主肝的成熟蟲卵數(shù)量減少,可能主要是血吸蟲細胞中HGPRT分子受到干擾,使得核苷肌苷酸(IMP)或鳥苷酸(GMP)的合成受阻,從而導致雌蟲子宮蟲卵數(shù)、排卵數(shù)減少。而此保護力與其誘導的小鼠體內(nèi)特異性IgG水平的升高有關(guān)。
本研究證實日本血吸蟲HGPRT在抗生長發(fā)育及抗生殖效應(yīng)方面是一個很有希望的疫苗候選分子,如果選用合適佐劑和免疫途徑,可獲得理想的免疫效果。進一步優(yōu)化重組HGPRT抗原的免疫方案,包括理想的佐劑、佐劑使用量以及免疫途徑等,正在進一步研究和驗證中。
作為疫苗,安全性是不可忽略的一個環(huán)節(jié)。動物和人體內(nèi)也存在HGPRT分子,并與血吸蟲HGPRT分子有一定的同源性,如人體內(nèi)HGPRT分子(GENE ID: 3251 HPRT1)與血吸蟲HGPRT分子同源性達67%,是否會引起宿主的自身免疫反應(yīng)?蔡勝藍等[14]以血吸蟲HGPRT的DNA疫苗進行家兔的局部肌肉刺激實驗和豚鼠的全身過敏實驗,結(jié)果肌肉刺激實驗反應(yīng)輕微,未出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)。HGPRT分子作為候選疫苗的安全性值得進一步研究。
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