桂林西瓜霜噴劑—靛玉紅和苦參堿的測(cè)定－薄層掃描法

本方法采用薄層掃描法測(cè)定桂林西瓜霜噴劑中靛玉紅和苦參堿的含量。

本方法適用于中成藥桂林西瓜霜噴劑。

供試品于索氏提取器中經(jīng)氯仿加熱回流，提取液回收，濃縮并揮干溶劑，殘?jiān)�用無水乙醇溶解，制成供試液，點(diǎn)樣、展開，用薄層掃描儀進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λ_S=540nm，λ_R=650nm測(cè)量靛玉紅，在波長(zhǎng)λ_S=510nm，λ_R=650nm測(cè)量苦參堿吸收度積分值，分別計(jì)算其含量。

1.苯

2.丙酮

3.氯仿

4.甲苯

5.乙醇

6.濃氨水

1儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3薄層自動(dòng)鋪板器

1.4定量點(diǎn)樣毛細(xì)管

1.5展開室

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2材料

2.1玻板

用20cm×10cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑

硅膠G

1.對(duì)照品溶液的制備

分別精密稱取靛玉紅和苦參堿對(duì)照品適量。靛玉紅對(duì)照品用氯仿溶解制成濃度為0.081mg/mL溶液；苦參堿對(duì)照品用甲醇溶解制成濃度為1.8mg/mL溶液。

2,對(duì)照藥材溶液的制備

各取青黛、山豆根對(duì)照藥材粉末約1g，置具塞三角燒瓶中。分別加入氯仿50mL（其中山豆根對(duì)照藥材先加入氨水2mL潤(rùn)濕)，冷浸過夜。濾過，濾液水溶液濃縮并揮干溶劑，殘?jiān)�用無水乙醇適量使溶解即得。

3.供試品溶液的制備

精密稱取供試品約2g，加入氯仿100mL于索氏提取器中回流提取至提取液近無色（其中苦參堿含量測(cè)定供試品先加氨水2mL使?jié)櫇?，提取液回收溶劑，濃縮并揮干溶劑，殘?jiān)�用無水乙醇適量使溶解并定容于5mL量瓶中，搖勻，即得。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所稱取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1.薄層板制備

將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動(dòng)涂布器進(jìn)行涂布（厚度為0.25～0.5mm)取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺(tái)上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應(yīng)均勻，平整，無麻點(diǎn)、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預(yù)制板。

2.點(diǎn)樣

2.1對(duì)照品點(diǎn)樣

精密吸取靛玉紅對(duì)照品溶液4.0,6.0,8.0,10.0,12.0μL,點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上。另外精密吸取苦參堿對(duì)照品溶液1.0,2.0,3.0,4.0和5.0μL,點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

2.2供試品點(diǎn)樣

精密吸取供試液10μL，靛玉紅對(duì)照品溶液6μL和8μL，點(diǎn)于同一塊硅膠G薄層板上，；同樣吸取供試品10μL，苦參堿對(duì)照液2μL和3μL，點(diǎn)于另一硅膠G薄層板上。

注：供試品溶液與對(duì)照品溶液應(yīng)分別交叉點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，如用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣到薄層板上，一般為圓點(diǎn)，點(diǎn)樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點(diǎn)直徑一般不大于2mm，點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況，以不影響檢出為宜。點(diǎn)樣時(shí)必須注意勿損傷薄層表面。

3.展開

將點(diǎn)好靛玉紅對(duì)照品溶液和供試品溶液的兩塊薄層板分別放入展開缸的展開劑中，以苯-氯仿-丙酮(5:4:1)為展開劑，展距10cm，取出薄層板，晾干，可見光下檢識(shí)。供試品色譜與青黛對(duì)照藥材和靛玉紅對(duì)照品色譜在相應(yīng)位置上顯相同紫紅色斑點(diǎn)。

同樣將點(diǎn)好苦參堿對(duì)照品和供試品溶液的薄層板分別放入展開缸的展開劑中，以甲苯-丙酮-乙醇-濃氨水(20:20:3:1)為展開劑（雙槽展開缸，預(yù)飽和15min)，展距10cm，碘化鉍鉀試液噴霧顯色，供試品色譜與山豆根對(duì)照藥材和苦參堿對(duì)照品色譜在相應(yīng)位置顯相同橙紅色斑點(diǎn)。

4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

將6.2.1項(xiàng)下的薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λ_S=540nm，λ_R=650nm測(cè)量靛玉紅，在波長(zhǎng)λ_S=510nm，λ_R=650nm測(cè)量苦參堿吸收度積分值，以斑點(diǎn)面積積分值對(duì)點(diǎn)樣量作線性回歸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.供試品溶液的測(cè)定

將6.2.2項(xiàng)下的薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，用雙波長(zhǎng)進(jìn)行掃描，于波長(zhǎng)λ_S=540nm，λ_R=650nm測(cè)量靛玉紅，在波長(zhǎng)λ_S=510nm，λ_R=650nm測(cè)量苦參堿吸收度積分值，分別計(jì)算其含量。

陳勇，甄漢深，石勇新，等.薄層掃描法測(cè)定桂林西瓜霜噴劑中靛玉紅和苦參堿的含量.中成藥，1998，20（7)：13-14