方法名稱(chēng)： |
云南紅豆杉枝葉—紫杉醇和三尖杉寧堿的含量測(cè)定—HPLC-UV |
應(yīng)用范圍： |
用于云南紅豆杉枝葉中紫杉醇和三尖杉寧堿的含量測(cè)定 |
方法原理： |
本品粉末用乙酸乙酯:丙酮 (1∶1) 超聲提取，濃縮，石油醚脫脂，過(guò)氧化鋁柱后，經(jīng)液相色譜儀分離，在227nm處測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。 |
儀器設(shè)備及實(shí)驗(yàn)條件： |
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儀器設(shè)備 Agilent1100高效液相色譜儀；G1314A紫外檢測(cè)器。 | 色譜條件 色譜柱：Angilent Hypersil ODS2柱 (4.6mm×250mm×5μm)；柱溫：30 ℃；流動(dòng)相：甲醇-乙腈-水 ( 20∶30∶50) ；流量：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：227nm；進(jìn)樣量: 10μL。 |
試樣制備： |
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對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱(chēng)取紫杉醇、 三尖杉寧堿對(duì)照品適量，各加甲醇制成每毫升約含 0.2 mg的溶液，作為對(duì)照品貯備液。 | 供試品溶液的制備 云南紅豆杉枝葉自然干燥，粉碎，過(guò)60～80目篩，40℃減壓干燥至恒重。稱(chēng)取藥材約2.00g，精確稱(chēng)定，置磨口具塞三角瓶中，加入乙酸乙酯:丙酮 (1∶1) (30ml×2次 )，25℃ 超聲振蕩提取40min，濾過(guò)，上清液合并，減壓蒸干，殘?jiān)尤胝麴s水10ml，石油醚 (60～90℃)萃取 ( 10ml×3次 )，石油醚層棄去，水液再用三氯甲烷萃取 (10ml×3次 )，合并各次三氯甲烷萃取液，用適量無(wú)水硫酸鈉脫水后，減壓蒸干，殘?jiān)舆m量三氯甲烷溶解，加于氧化鋁柱 (中性，4 g，內(nèi)徑 0.8 cm)上，用三氯甲烷洗去未被吸附的雜質(zhì)，再用1%的 CH3OH∶CHCl 3 (V /V )淋洗，最后用5% CH3OH∶CHCl 3 50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)眉状既芙�，定容�?ml，甲醇液經(jīng) 0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，作為供試品溶液。 |
操作步驟： |
精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，依上述色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算含量。 |
附件： |
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備注： |
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參考文獻(xiàn)： |
劉莉，羅佳波.云南紅豆杉枝葉中紫杉醇和三尖杉寧堿含量的測(cè)定.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥 .2006，17（5)：754～755 |
