血漿脂蛋白和脂質測定是臨床生化檢驗的常規(guī)測定項目，其臨床意義主要是：早期發(fā)現(xiàn)與診斷高脂蛋白血癥；協(xié)助診斷動脈粥樣硬化癥；評價動脈粥樣硬化疾患如冠心病和腦梗塞等危險度；監(jiān)測評價飲食與藥物治療效果。
⒈超速離心分離純化法超速離心法是根據(jù)血漿中各種脂蛋白的比重（密度)的差異，在強大離心力作用下進行分離純化的一種方法。
血漿在不同密度鹽溶液中經(jīng)過超速離心，各種脂蛋白可按密度大小漂浮于不同鹽溶液介質中。脂蛋白漂浮的衡量單位是漂浮率(Sf)。Gofman等于1950年確定，血漿脂蛋白在比重為1.063的NaCl溶液中（26℃)，每秒每達因（ldyn=10-5N)克離心力的作用下的漂浮速度，稱為1個Svedbery單位（10-13s)。Sf越大，脂蛋白密度越低。
一般操作方法是將血漿置于已準備好的不同密度梯度的鹽溶媒介質中，在強大離心作用下，各脂蛋白依其自身的Sf不同，分散于離心管中的密度梯度溶媒層，達到分離純化的目的。
超速離心法是分離純化脂蛋白的有效技術，目前廣泛應用于脂蛋白、載脂蛋白代謝的研究中。
⒉電泳分離法不同脂蛋白因蛋白質含量不同、其電荷量不同，故可用電泳方法進行分離，并根據(jù)血漿脂蛋白電泳遷移率不同予以判斷確認。電泳支持物一般常用醋酸纖維薄膜、瓊脂糖凝膠或聚丙酰胺凝膠。由于醋酸纖維薄膜要預處理，很繁雜，外加電泳時間過長，目前已很少使用。臨床檢驗中主要采用瓊脂糖凝膠電泳進行分離，快而較為準確，儀器設備要求不高，被廣泛采用。聚丙烯酰胺凝膠作為支持物分離脂蛋白，值得推薦給臨床使用。
電泳分離法不論用何種支持物，血漿脂蛋白需用親脂染料如蘇丹黑B等進行預染再電泳，電泳完畢，脂蛋白根據(jù)電荷量不同，移動在不同的位置，再置于光密度計內進行掃描，計算出各種脂蛋白的百分比，該數(shù)值乘以血漿總脂量，即可求出α-脂蛋白、β-脂蛋白和前β-脂蛋白含量，乳糜微粒停留在原點，無法測出其含量，正�？崭�12h后，血漿中無CM存在。也可將電泳畢的瓊脂糖凝膠脂蛋白區(qū)帶切割置于試管中，加水溶解，進行比色，測出各自百分比，這一手工半定量法無法測準，屬淘汰之列。
⒊沉淀分離法由于脂蛋白的組成及理化性質不同，在不同的聚陰離子和2價不同金屬離子（Mn2+、Mg2+、Ca2+、Ni2+、Co2+)以及不同pH值條件下，使脂蛋白與聚陰離子結合形成復合物沉淀，以達到分離定量各種脂蛋白的目的。
如肝素錳沉淀血清中VLDL和LDL，離心沉淀，HDL則留在上清液，再定量HDL量，即為血漿HDL的量。也可采用聚乙烯硫酸鹽沉淀LDL，離心去上清液留沉淀，再定量沉淀其中的LDL，即血漿的LDL量。脂蛋白是一種既有蛋白質又有膽固醇，還有磷脂的復合體，如何定量，尚無一種較為理想的方法。目前僅以測定脂蛋白中膽固醇總量的方法作為脂蛋白的定量依據(jù)，即測定HDL、LDL或VLDL中的膽固醇，并分別稱為高密度脂蛋白-膽固醇（HDL-C)、低密度脂蛋白-膽固醇（LDL-C)或極低密度脂蛋白-膽固醇（VLDL-C)。這類測定方法是目前臨床廣泛使用的方法，快速并較為準確。
⒋遮蔽直接測定法利用脂蛋白中某種特異抗體等物質，先將血漿中LDL和VLDL包裹保護，不受測定膽固醇試劑的影響，而直接測定未被包裹的HDL中的膽固醇，在不離心分離條件下，測定出HDL的膽固醇含量，快速準確，是近年來發(fā)展的新技術，值得推廣應用。
血清總脂質主要包括FC、CE、PL和TG等。血清總膽質測定除作為脂質代謝紊亂及有關疾患的協(xié)助診斷外，還可用于血總脂增加的原發(fā)性膽汁酸肝硬化、腎病綜合征或急慢性肝炎以及血總脂減少的重癥肝炎、肝硬化等的嚴重肝實質性損害、惡液質、甲狀腺功能亢進和吸收不良綜合征等疾患的協(xié)助診斷。
血總脂一般隨年齡增加而升高，40歲以上者顯著增加，65-70歲者反而降低。測定方法不同，正常參考值有一定的差異。
測定方法分兩大類：一類是抽提法，將血清脂質通過脂質抽提劑提入某一介質中，再進行定量；另一類是直接測定法，即無需抽提。
⒈脂質抽提法脂質存在于血清脂蛋白中，利用甲醇或乙醇使其與蛋白結合的脂質分離，再利用甲醇或乙醇的非極性有機溶媒使脂質溶于其中。Bloor溶劑（醚：醇為1：3，V/V)或FovCh溶劑（氯仿：甲醇為2：1，v/V)的醚氯仿等非極性溶劑的混合液，可提高切斷脂質與蛋白質的結合的能力，達到抽提的目的。血清脂質抽提入有機溶液后，蒸發(fā)干固，除去有機溶液，通過加熱氧化，再顯色定量。
⒉脂質直接測定法如Sulfo-phospho-Vanillin法是加濃硫酸入血清加熱，冷卻后，加試劑顯色（即SPV反應)直接測定出血清總脂質。
血清中膽固醇包括CE和FC，酯型的CE占70％，游離型FC占30％。FC中的C3的-OH在LACT作用下，可分別與亞油酸（43％)、油酸（24％)、軟脂酸（10％)、亞麻油酸（6％)、花生四烯酸（6５)、硬脂酸（3％)等脂肪酸結合而成。血清中膽固醇在LDL中最多，其次是HDL和VLDL，CM最少。血清總膽固醇測定方法分為化學法和酶法兩大類。
⒈化學法化學法一般包括：①抽提；②皂化；③毛地黃皂苷沉淀純化；④顯色比色四個階段。代表性的方法有Sperry-Webb法，包括①到④步驟操作過程，常規(guī)操作中多省去了②、③�；蛘哂檬∪ア�、③步驟的Zak-Henly法及省去③步驟的Abell-Kendall法，現(xiàn)將此法作為標準參考方法予以利用。
⒉酶法測定CE在膽固醇酯酶（cholesterolesterase,CHE)作用下水解成FC和FFA，F(xiàn)C再經(jīng)膽固醇氧化酶（cholesteroloxidase，COD)氧化成△4膽甾烯酮和H2O2，再分別定量O2的消耗或者H2O2的生成量，或者△4膽甾烯酮生成量，以作為FC的定量依據(jù)。該法是目前常規(guī)應用方法，快速準確，標本用量少，便于自動生化分析器作批量測定。
甘油三酯又稱中性脂肪，由于其甘油骨架上分別結合了3分子脂肪酸、2分子脂肪酸或1分子脂肪酸，所以分別存在有甘油三酯（TG)、甘油二酯（DG)和甘油一酯（MG)。血清中90％～95％是TG，TG中結合的脂肪酸分別為油酸（44％)、軟脂酸（26％)，亞油酸（16％)和棕櫚油酸（7％)。
血清TG測定方法一般分為物理化學法、化學法及酶法三大類。
血清中TG的化學組成并不單一，準確求其分子量較為困難。因標準不同，測定結果存在差異�；瘜W法多采用三棕櫚精（軟脂精)（分子量807.3)、三油精（分子量895.4)，按摩爾濃度計算。酶法測定以三油精為標準物進行換算。
⒈化學法化學測定法包括：①TG的抽提分離；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲撐顯色定量等四個階段。操作較為繁雜，影響測定因素太多，共法準確性差，一般很少用。
⒉酶法測定酶法測定包括：①TG的抽提與皂化；②加水分解生成甘油糖定量兩個階段。目前常規(guī)檢測應用的方法有甘油激酶（glycerolkinase，GK)法和甘油氧化酶（glyceroloxidase,glyod,GOD)法。操作簡便，快速準確，并能在自動化生化分析儀上進行批量測定。
磷脂（PL)并非單一的化合物，而是含有磷酸基和多種脂質的一類物質的總稱。
血清中PL包括：①卵磷脂（60％)和溶血卵磷脂（2％-10％)；②磷脂酰乙醇胺等（2％)；③鞘磷脂（20％)。
血清PL定量方法包括測定無機磷化學法和酶法兩大類。
⒈化學測定法包括①抽提分離；②灰化；③顯色、比色三個階段。
⒉酶測定法可分別利用磷脂酶A、B、C、D等4種酶作用，加水分解，測定其產(chǎn)物，對PL進行定量，一般多采用磷脂酶D(PL-D)。PL-D可作用于含有卵磷脂、溶血卵磷脂和鞘磷脂以及膽堿的磷脂，這三種磷脂約占血清總磷脂的95％。該法快速準確，便于自動化儀器進行批量檢測。
臨床上將C10以上的脂肪酸稱為游離脂肪酸（FFA)。正常血清中含有油酸（C18:１)占54％，軟脂酸（C16:1)占34％，硬脂酸（C18:1)占6％，是其主要的FFA。另外還有月桂酸（C12:0)、肉豆蔻酸（C14:0)和花生四烯酸（C20:1)等含量很少的脂肪酸。與其他脂質比較，F(xiàn)FA在血中濃度很低，其含量水平極易受脂代謝、糖代謝和內分泌功能等因素影響，血中FFA半壽期為1-2min，極短。血清中的FFA是與清蛋白結合進行運輸，屬于一種極簡單的脂蛋白。
測定血清FFA法有滴定法、比色法、原子分光光度法、高效液相層極法和酶法等。一般多以酶法測定。作FFA測定的標本一定要注意在4℃條件下分離血清并進行測定。因為血中有各種脂肪酶存在，極易也極快速使血中TG和PL的酯型脂肪酸分解成非酯化的FFA，使血中FFA值上升。貯存的標本僅限于24h內，若保存三天，其值約升高30％，使結果不準確。
⒈非酶法確定非酶法測定包括滴定法、比色法、原子吸收分光光度法和高效液相層析法。前三種方法準確性差，高效液相層析法儀器太昂貴，不便于批量操作。
⒉酶測定法血清中主要用脂肪酶測定�？煞謩e測定產(chǎn)物乙酰CoA、AMP或輔酶A(CoA)，進行定量。酶法測定結果準確可靠快速，易于批量檢測。
血清載脂蛋白（Apo)包括ApoAⅠ、AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ、E和（a)，已屬常規(guī)檢測項目。血清中載脂蛋白均結合于脂蛋白中，測定時要加用解鏈劑，使脂蛋白中Apo暴露再進行測定。
目前測定血清中Apo的含量的方法是利用相應特異抗體試劑進行測定�，F(xiàn)有羊抗人ApoAⅠ、AⅡ、B100、CⅡ、CⅢ、E和(a)等抗體試劑。測定原理是將某一特異抗體加到待測人血清中，即與血清中相應抗原形成抗原抗體復合物，根據(jù)復合物的量，即可測出血清中某一Apo含量。例如在人血清中加入抗人ApoAⅠ抗體，即與血清中ApoAⅠ（抗原)結合形成復合物，再定量即可測出血清中ApoAⅠ含量。
⒈免疫擴散法先制備含Apo抗體的瓊脂糖凝膠，間隔等距離打孔，加入待測人血清，水平置于溫箱（37℃)保溫24或48h，抗原從孔中間向周圍擴散，因凝膠板中有相應抗體，經(jīng)一定時間擴散后，最后在凝膠孔周圍形成一圓型沉淀圈，測量其圓直徑，以圓的面積大小計算血清中Apo含量。該法要求在測量圓周大小時，一定要精確到0.1mm。這一測定方法可適用于以抗體為試劑販所有微量蛋白的測定，但易受多種因素的影響，難以測準，有淘汰的趨勢。
⒉免疫火箭電泳先制備含某一Apo抗體的瓊脂糖凝膠，靠近陰極端打孔，加入待測血清，進行電泳。血清中Apo抗原往正極移動，一定時間（約3h)后，即可形成類似火箭的payment-defi.com/job/沉淀峰，根據(jù)火箭峰高度或面積的大小計算血清中Apo含量。在嚴格掌握電泳條件下，本法是一種較為簡便、試劑用量少的好方法。
⒊免疫比濁法免疫比濁法分為免疫透射比濁法和免疫散射比濁法。
Apo的特異抗體與血清中相應的抗原結合形成抗原抗體免疫復合物，并形成微細顆粒，混懸于溶液介質中，光線通過這種渾濁介質溶液時被吸收一部分，吸收的多少與混濁顆粒的量成正比。在抗體量一定的條件下，抗原越多，抗原抗體復合物越多，溶液越渾濁，吸收光越多，以此對抗原進行定量，這種通過測定光吸收量的方法稱為透射比濁法。該法是目前使用最為廣泛的方法，快速準確，可在自動生化分析儀上作批量檢測。
當光線通過含抗原體復合物的渾濁介質溶液的混懸顆粒時，出現(xiàn)光散射作用，散射光強度與溶液中混懸顆粒的量成正比，這種測定光散射強度的方法稱為免疫散射比濁法。該法的進行，需要有具備測定散射光的儀器如散射比濁儀等。
免疫比濁時，由于抗原與抗體結合的過程中，payment-defi.com/Article/吸收度與濃度之間不呈線性關系，一般是三次方程曲線關系。若要將抗原與抗體兩個變量之間的變動特征恰當?shù)胤从吵鰜�，需要�?jīng)過三次方程擬合成近似直線化的曲線方程，再進行運算。免疫比濁的實際操作過程中，可采用終點法或速率法，用五點或七點不同濃度進行定標，經(jīng)三次曲線方程擬合求出一條能反映真實情況的濃度與吸光度的關系曲線方程，作為定量的工作曲線。如果以單一標準濃度定標，以一次方程直線回歸運算，所測結果僅在標準濃度上下波動，真正的過低和過高值無法測準。
免疫比濁法所用抗體應是單價、特異并且高效價的，尤其是抗體若非單一而混有少量其他蛋白抗體，在血清中形成的復合物將是一種大雜燴，非單一蛋白的復合物，測出結果偏高而不準確。
