研究表明，幽門(mén)螺桿菌（Helicobacterpylori,Hp)與胃炎、消化性潰瘍等胃部疾患密切相關(guān)，為此，我們對(duì)某些實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Wistar大鼠經(jīng)口感染Hp，可導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)性感染。從其胃組織中檢查到并分離出Hp，粘膜組織亦顯示某些病理變化。從而為研究Hp實(shí)驗(yàn)性感染提供較為合適的一種動(dòng)物模型。
1 材料和方法
1.1 菌株 幽門(mén)螺桿菌Hp379及Hp404株，系北京市積水潭醫(yī)院消化內(nèi)科就診的胃病患者，經(jīng)由內(nèi)窺鏡取得的胃粘膜進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)分離到的。經(jīng)過(guò)鑒定，由本室傳代保存。
1.2 動(dòng)物 Wistar大鼠，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所。新西蘭種家兔，C57和BALB/小鼠，由本所動(dòng)物室供給。
1.3 感染方法 Wistar大鼠的實(shí)驗(yàn)分2次進(jìn)行。第1次用出生5個(gè)月（體重175g～254g)的成年鼠，第2次用出生兩個(gè)月（體重152g～174g)的幼齡鼠。動(dòng)物先禁食12h～14h，用胃管喂以5%Na2HCO32ml,15min后用胃管注入Hp379或Hp404株的菌液1.5ml(1010CFU/ml,30min后給食。每周感染1次，共4次。對(duì)照組動(dòng)物不感染Hp，飼養(yǎng)條件與實(shí)驗(yàn)組相同。用以感染的家兔為幼齡兔（體重1200g～1500payment-defi.com/pharm/g)。C57小鼠為4周齡幼鼠（10g～12g)，BABL/C用成年鼠（18g～20g)。感染方法同大鼠，家兔每次感染量為2ml，小鼠為0.5ml(1010CFU/ ml)，每周感染1次，共5次。動(dòng)物在最后1次感染后的第7d～10d，禁食12h～14h后，乙醚麻醉處死，無(wú)菌操作取出胃，用滅菌PBS洗去胃內(nèi)容物，從靠近幽門(mén)端的不同部位剪取胃粘膜3～4小塊，加含10%小牛血清的布氏肉湯2ml，用組織研磨器制成漿，用以做尿素酶試驗(yàn)，直接涂片檢菌和細(xì)菌培養(yǎng)。其余的胃組織用10%甲醛（PBS配制)固定，供病理學(xué)檢查。
1.4 細(xì)菌學(xué)檢查�、倌蛩孛冈囼�(yàn)基本參考Morris等的方法。②胃粘膜直接涂片檢菌法：取粘膜勻漿滴推成涂片，用甲醇固定10min，0.3%堿性復(fù)紅染色，鏡檢Hp菌。③Hp菌培養(yǎng)：以布氏瓊脂為基礎(chǔ)，加入6%脫纖維羊血及脫氧胸苷酸（TMP)5mg/L，萬(wàn)古霉素6mg/L，兩性霉素2mg/L，制成血平板后，置4°C保存?zhèn)溆�。取胃粘膜勻漿0.2ml于血平板后，涂勻后放入含10%CO2、5%O2及85%N2的混合氣體培養(yǎng)箱中，57°C培養(yǎng)72h后觀察結(jié)果。
1.5 病理學(xué)檢查 甲醛固定的胃組織,石蠟包埋，切成6μm厚的組織切片。分別用蘇木素-伊紅和Warthin-Starry鍍銀染色，觀察病理改變和檢查組織切片中的Hp。
2 結(jié)果
2.1 尿素酶試驗(yàn) 經(jīng)口感染Hp的8只大鼠，其胃粘膜做尿素酶試驗(yàn)，多數(shù)在4h內(nèi)，個(gè)別的24h出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)照組大鼠的胃粘膜呈陰性反應(yīng)。經(jīng)哭喊Hp的家兔、C57和BALA/C小鼠的胃粘膜，均呈陰性反應(yīng)。
2.2 涂片細(xì)菌檢查 感染Hp的8只大鼠的胃粘膜勻漿，制成涂片染色后鏡檢，均檢查到Hp。未感染的大鼠胃粘膜涂片未找到Hp。感染Hp的兔、C57和BALB/C小鼠的胃粘膜涂片亦未檢查到Hp。
2.3 細(xì)菌培養(yǎng) 各組動(dòng)物的胃粘膜組織都做了Hp培養(yǎng)，結(jié)果只有感染Hp的大鼠胃組織，分離出Hp。其他各組均款培養(yǎng)出Hp。
2.4 組織切片細(xì)菌檢查 胃粘膜組織切片用Warthin-Starry染色，背景為淡黃色，Hp染色成黑色。感染Hp的大鼠，無(wú)論是幼齡鼠或是成年鼠，其胃粘膜切片中均可找到Hp，它們主要分布于粘液層。粘膜上皮細(xì)胞的表面和粘膜的隱窩處。切片中的Hp形成呈半圓、S或螺旋狀，未感染Hp的正常大鼠，胃組織中未找到Hp。感染Hp 的家兔、C57和BALB/C小鼠的胃切片中，亦未檢到Hp。
2.5 病理組織學(xué)檢查 感染Hp大鼠的胃組織切片中，可見(jiàn)粘膜上皮細(xì)胞變性病灶，細(xì)胞腫脹而變得不規(guī)則，payment-defi.com/shiti/胞漿內(nèi)結(jié)構(gòu)不清或消失。粘膜層見(jiàn)有單個(gè)核細(xì)胞浸潤(rùn)病灶。
3 討論
上述結(jié)果表明Wistar大鼠對(duì)Hp易感。經(jīng)口感染Hp，可從其胃粘膜中檢查到并分離出Hp，胃粘膜亦出現(xiàn)病變。與之相反，家兔、C57和BALB/C小鼠，示能引起Hp的實(shí)驗(yàn)性感染。Ehler曾用Lewis大鼠，C57BL/6和BALB/C小鼠做實(shí)驗(yàn)，試圖建立Hp的動(dòng)物模型，未獲成功。他們的小鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果與我們的結(jié)果相同，都是陰性。但大鼠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同�？赡苁且�?yàn)閷?shí)驗(yàn)條件不同的緣故。
自從1983年首先從人胃中分離到Hp以后，相繼從水貂和恒河猴的胃組織中分離出Hp樣細(xì)菌。那么，我們從感染的Wistar大鼠胃組織中分離到的Hp是否亦是自然存在的呢？看來(lái)，這種可能性不大。因?yàn)�，如前所述，未感染的�?duì)照組大鼠，用各種方法檢測(cè)，都沒(méi)有檢查到Hp菌
最近報(bào)道悉生仔豬經(jīng)口感染Hp，可從胃組織中分離出Hp。但用悉生仔豬做實(shí)驗(yàn)，不但費(fèi)用昂貴，而且不方便。根據(jù)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為Wistar大鼠，尤其是幼齡鼠，是研究Hp菌較為理想的動(dòng)物模型。但是，多次感染是必要的。
