二、肝硬變免疫細(xì)胞化學(xué)
肝硬變或稱肝硬化（liver cirrhosis)是多種原因引起的慢性肝臟疾病，其中原因之一是和HBV慢性感染有關(guān)，特別在中國(guó)HBV可能是引起肝硬變的主要原因。HBV感染引起乙型肝炎，部分病例變成慢性活動(dòng)性肝炎，進(jìn)而轉(zhuǎn)變成肝硬變。其中大部分為門脈性肝硬變（小結(jié)節(jié) 型肝硬變)，小部分為壞死后性肝硬變（大結(jié)節(jié) 型肝硬變)。近年來(lái)在我國(guó)通過(guò)臨床、病理及免疫病理的研究證明，HBV感染與肝硬變的發(fā)生有十分密切關(guān)系，在肝硬變內(nèi)HBsAg檢出率為70%～90%。世界其它一些國(guó)家和地區(qū)，如日本、印度、非州、香港等也有類似的報(bào)道。肝硬變的發(fā)生可能是由于機(jī)體免疫機(jī)能不足，不能將HBV完全殺滅和排除。在機(jī)體內(nèi)HBV不斷復(fù)制繁殖，并通過(guò)免疫機(jī)制使肝細(xì)胞反復(fù)遭受破壞，以及肝細(xì)胞結(jié)節(jié) 狀再生，纖維組織不斷增生，形成纖維隔，致使正常的肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，最后形成肝硬變。下面用免疫細(xì)胞化學(xué)（PAP)，親合免疫細(xì)胞化學(xué)（ABC)等方法對(duì)HBV抗原、纖維結(jié)合蛋白（FN)、III型膠原和細(xì)胞角蛋白在肝硬變組織內(nèi)定位及分布進(jìn)行描述。
（一)肝硬變組織內(nèi)HBV抗原的定位及分布
用免疫細(xì)胞化學(xué)（PAP)及免疫親合素（ABC)方法在肝硬變組織內(nèi)對(duì)HBV抗原（HBsAg ,pre –S1,pre-S2,HBcAg HBxAg)進(jìn)行了檢測(cè)，觀察了它們?cè)诟渭?xì)胞，kupffer 細(xì)胞內(nèi)等定位和其分布狀態(tài)。
1．HBsAg 、pre –S1和pre-S2在肝細(xì)胞內(nèi)分布HBsAg在肝硬變組織中檢測(cè)率為70%～80%，其中86%伴有肝細(xì)胞不典型增生；pre –S1和pre-S2的檢出率為60%～70%，其中84%伴有肝細(xì)胞不典型增生。HBsAg 、pre –S1和pre-S2抗原經(jīng)常出現(xiàn)于肝硬變組織的同一部位，甚至同一細(xì)胞內(nèi)。少數(shù)情況下，HBsAg陽(yáng)性,而pre –S1或pre-S2陰性，反之，HBsAg 陰性,而pre –S1或pre-S2陽(yáng)性。HBsAg 、pre –S1和pre-S2抗原主要位于肝細(xì)胞漿內(nèi)，部分位于膜上，少數(shù)位于核內(nèi)。在部分肝硬變病例中，HBsAg 、pre –S1和pre-S2在也見(jiàn)于kupffer細(xì)胞內(nèi)及肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞內(nèi)。醫(yī).學(xué).全.在.線.網(wǎng).站.提供
2．HBcAg 在肝細(xì)胞內(nèi)的分布HBcAg 在肝硬變組織內(nèi)的檢出率為20%左右，其中82%伴有肝細(xì)胞不典型增生。HBcAg 陽(yáng)性檢出率明顯低于HBsAg 、pre –S1和pre-S2，這可能是由于HBcAg 和抗-HBc在核內(nèi)形成免疫復(fù)合物，以至HBcAg 被封閉之故。HBcAg 主要位于肝細(xì)胞核內(nèi)的形態(tài)表現(xiàn)為分布與肝炎的相似。在少數(shù)病例HBcAg 陽(yáng)性物質(zhì)也見(jiàn)于匯管區(qū)的纖維組織內(nèi)及肝竇壁上。
3．HBxAg 在肝細(xì)胞內(nèi)的分布HBxAg在硬變組織的檢出率為80%左右，其中85%伴有肝細(xì)胞不典型增生。HBxAg的檢出率和HBsAg相似。HBxAg陽(yáng)性物質(zhì)呈細(xì)顆粒狀。主要位于肝細(xì)胞漿內(nèi)，少數(shù)位于胞核內(nèi)及胞膜上。HBxAg在肝細(xì)胞內(nèi)的形態(tài)表現(xiàn)及陽(yáng)性細(xì)胞的分布狀態(tài)與HBsAg相似。有部分病例HBxAg沿著肝硬變的纖維隔分布。HBxAg陽(yáng)性物質(zhì)也見(jiàn)于肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞及kupper細(xì)胞內(nèi)。
4．IgG(抗—HBc )在肝細(xì)胞內(nèi)的分布在肝硬變組織內(nèi)可觀察到抗-HBc的存在，其陽(yáng)性率與HBcAg相似。該抗體經(jīng)常和HBcAg以復(fù)合物的形式存在于肝細(xì)胞核內(nèi)，少數(shù)也見(jiàn)于胞漿內(nèi)及膜上。抗-HBc陽(yáng)性物質(zhì)在肝硬變細(xì)胞內(nèi)的存在和陽(yáng)性細(xì)胞的分布狀態(tài)與HBcAg相同。
�。ǘ�)肝硬變組織內(nèi)纖維結(jié)合蛋白（FN)的定位及分布
纖維結(jié)合蛋白（fibronectin, FN)是一個(gè)非膠原性的大分子糖蛋白。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)它與損傷修復(fù)及器官硬化有密切關(guān)系。在肝硬變及慢活肝的組織內(nèi)FN沉積增加，可能與肝硬變時(shí)纖維組織隔形成有關(guān)系。在肝硬變組織內(nèi)，F(xiàn)N陽(yáng)性物質(zhì)位于肝細(xì)胞內(nèi)及kupffer細(xì)胞內(nèi)，其陽(yáng)率分別為59%、65%。FN陽(yáng)性物質(zhì)彌漫分布于胞漿內(nèi)，陽(yáng)性細(xì)胞多呈三五成群地分布于假小葉邊緣、中央靜脈旁及肝實(shí)質(zhì)內(nèi)灶（片)狀杯死區(qū)域的附近。匯管區(qū)及纖維隔內(nèi)可見(jiàn)數(shù)量不等的FN陽(yáng)性的組織細(xì)胞和纖維母細(xì)胞。此外。有的病例肝竇壁、血管內(nèi)皮及小膽管基底膜也呈陽(yáng)性反應(yīng)。FN陽(yáng)性檢出率和HBsAg陽(yáng)性呈正相關(guān)，在FN陽(yáng)性病例中有80%HBsAg陽(yáng)性。而活動(dòng)性肝硬變FN陽(yáng)性明顯高于非活動(dòng)性肝硬變（P<0.01)。上述結(jié)果表明，在由HBV感染引起的肝硬變過(guò)程中，F(xiàn)N參與了肝硬變的形成。
�。ㄈ�)肝硬變組織內(nèi)III型膠原的定位及分布
在肝硬變時(shí)，I、III型膠原增加，這與肝纖維化有密切關(guān)系。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，在慚性遷延性肝炎→慢性活動(dòng)性肝炎→肝硬變之間，Ⅰ、Ⅲ型膠原的分布呈逐漸增加的趨勢(shì)。除匯管區(qū)Ⅰ、Ⅲ型膠原增多外，中央靜脈周圍及小葉內(nèi)壞死區(qū)、炎癥區(qū)也增多，形成小葉內(nèi)纖維化與從匯管伸向小葉內(nèi)纖維組織相連形成纖維隔。在部分肝硬變病例，肝細(xì)胞內(nèi)有Ⅲ型膠原陽(yáng)性反應(yīng)。在纖維隔及假小葉的竇壁上Ⅲ型膠原陽(yáng)性率為100%，在肝細(xì)胞內(nèi)為34%。Ⅲ型膠原在寬大纖維隔內(nèi)呈彌漫密集分布，在竇壁上為連續(xù)線狀分布，在肝細(xì)胞漿內(nèi)呈彌漫分布。陽(yáng)性肝細(xì)胞主要位于小葉邊緣或近纖維隔處。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明Ⅰ、Ⅲ膠原是由肝細(xì)胞合成產(chǎn)生的，并參與肝硬變的形成。
（四)肝硬變組織內(nèi)角蛋白定位及分布
在正常肝臟中肝細(xì)胞和膽管上皮細(xì)胞各有其特征性的細(xì)胞角蛋白（CK)組型，它們是各自形態(tài)發(fā)生的過(guò)程中建立的。研究結(jié)果表明在肝硬變組織中有81%呈角蛋白陽(yáng)性反應(yīng)，但陽(yáng)性反應(yīng)程度各病例是不相同的。CK陽(yáng)性的肝細(xì)胞主要位于匯管區(qū)周圍。尤其是碎屑狀肝細(xì)胞壞死附近，并常伴有肝細(xì)胞小管狀化生、弧立肝細(xì)胞團(tuán)塊形成及膽管或膽小管增生，它們之間在細(xì)胞形態(tài)和陽(yáng)性強(qiáng)度上有移行關(guān)系，有的病例整個(gè)假小葉CK陽(yáng)性。部分肝小多角型細(xì)胞也呈陽(yáng)性反應(yīng)。在肝硬變組織內(nèi)CK陽(yáng)性反應(yīng)與HBsAg陽(yáng)性呈正相關(guān)。CK陽(yáng)性的肝硬變中絕大多數(shù)HBsAg也陽(yáng)性，這一結(jié)果HBV感染所致的慢性肝臟病變可引起CK的異常表達(dá)。
