一、免疫熒光或免疫酶標(biāo)技術(shù)在腎臟疾病中的應(yīng)用的意義
�。ㄒ�)腎小球疾病發(fā)病機(jī)制的研究
應(yīng)用免疫熒光或免疫酶標(biāo)技術(shù)，可對腎小球內(nèi)免疫復(fù)合物沉積的機(jī)制、補(bǔ)體系統(tǒng)的激活途徑、凝血機(jī)制的啟動等進(jìn)行研究，茲分述如下：
1．免疫復(fù)合物的形成及沉積的機(jī)制 有下列三種情況：
（1)抗原及抗體在血液循環(huán)中結(jié)合形成循環(huán)免疫復(fù)合物沉積于腎小球：常見于毛細(xì)血管內(nèi)增生性腎小球腎炎，抗原（如鏈球菌、葡萄球菌等)侵入人體后，免疫系統(tǒng)產(chǎn)生相應(yīng)抗體�？乖c抗體在血液循環(huán)中形成免疫復(fù)合物，經(jīng)血液流至腎臟而沉積于腎小球內(nèi)。熒光顯微鏡可見IgG沿腎小球毛細(xì)血管壁有彌漫性不連續(xù)的顆粒狀熒光，一般其分布不太均勻，大小亦不太一致。
（2)腎小球抗原導(dǎo)致的原位免疫復(fù)合物形成：在感染或某些因素作用下，腎小球基底膜的結(jié)構(gòu)成分了生改變而具有抗原性，可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)而產(chǎn)生抗基底膜抗體，可與腎小球基底膜結(jié)合而形成原位免疫復(fù)合物。在熒光顯微鏡下可見IgG沿腎小球毛細(xì)血管壁呈連續(xù)線狀熒光。常見于Goodpasture 綜合征。
（3)非腎小球抗原導(dǎo)致的原位免疫復(fù)合物形成：外源性抗原在一定條件下可先植入腎小球基底膜，抗原刺激免疫系統(tǒng)可產(chǎn)生相應(yīng)抗體而出現(xiàn)于血液中，這種循環(huán)抗體當(dāng)流經(jīng)腎小球時(shí)與原先植入腎小球基底膜的抗原在原位結(jié)合而形成原位免疫復(fù)合物。在熒光顯微鏡下可見IgG沿腎小球毛細(xì)血管壁呈大小一致的、分布均勻的顆粒狀熒光。常見于膜性腎小球腎炎。
2．補(bǔ)體系統(tǒng)激活的途徑 補(bǔ)體系統(tǒng)一方面參與機(jī)體的正常防御功能，另一方面又可參與變態(tài)反應(yīng)而引起組織損傷。補(bǔ)體的成分既可直接破壞靶細(xì)胞，又可產(chǎn)生炎癥介質(zhì)（如過敏毒素和趨化因子)而促發(fā)炎癥反應(yīng)，并可啟動凝血機(jī)制，故在腎小球腎炎的發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用。補(bǔ)體的激活途徑有二，即經(jīng)典途徑和旁路途徑。
�。�1)經(jīng)典途徑：抗原與抗體結(jié)合形成免疫復(fù)合物后，抗體的Fc 段被激活，暴露其補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)，可與補(bǔ)體C1q結(jié)合，進(jìn)一步使C1r、C1s活化， 再依次活化C4及C2，而使C3活化，繼之C5、C6、C7、C8、C9相繼活化。醫(yī)學(xué).全.在線.網(wǎng).站.提供
�。�2)旁路途徑：細(xì)菌內(nèi)毒素或脂多糖可使血清中C3激活劑前體（C3PA)轉(zhuǎn)化酶被激活，在備解素作用下，使C3PA（又稱B因子)轉(zhuǎn)化為C3A（C3激活劑)，而使補(bǔ)體C3激活，然后依次激活C5至C9。
在多數(shù)腎小球疾病，補(bǔ)體之激活皆為通過旁路途徑：僅少數(shù)腎小球疾病，如狼瘡性腎炎、Wegener’s內(nèi)芽腫等，其補(bǔ)體之激活為通過經(jīng)典途徑。因此，了解腎小球疾病時(shí)補(bǔ)體系統(tǒng)激活的途徑有重要的鑒別診斷意義。例如在腎小球系膜區(qū)有多量IgA沉積時(shí)，同時(shí)有備解素B因子顯示陽性，即其補(bǔ)體激活為旁路途徑，此時(shí)則可診斷為IgA腎病。但如C1q、C4、C2顯示陽性，即其補(bǔ)體激活為經(jīng)典途徑，則應(yīng)診斷為狼瘡性腎炎。
3．凝血機(jī)制的啟動 在腎小球腎炎時(shí)，由于炎癥造成腎小球毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷，毛細(xì)血管基底膜的暴露，以及補(bǔ)體C3b的免疫粘附作用使血小板聚集，而激活凝血因子Ⅲ、凝血因子ⅩⅠⅠ和血小板因子3，啟動了凝血機(jī)制，結(jié)果使血漿中的纖維蛋白元轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維蛋白（即纖維素)而于腎小球毛細(xì)血管內(nèi)形成微血栓。如果炎癥嚴(yán)重而發(fā)生滲出時(shí)，腎小球毛細(xì)血管內(nèi)的纖維蛋白元也可滲出至球囊腔內(nèi)，進(jìn)一步轉(zhuǎn)變?yōu)槔w維素。球囊腔內(nèi)的纖維素可刺激球囊壁層上皮細(xì)胞增生而形成新月體，使病變逐漸惡化。因此，對纖維蛋白相關(guān)抗原（FRA)的免疫熒光或酶標(biāo)染色觀察有重要的意義。
�。ǘ�)判斷腎臟疾病是否為免疫性疾病
在腎小球或腎小管如發(fā)現(xiàn)有免疫球蛋白或補(bǔ)體沉積時(shí)，一般皆為免疫性疾病，說明體液免疫參與其發(fā)病機(jī)制。其表現(xiàn)多種多樣，已如前述。如未能發(fā)現(xiàn)有免疫球蛋白及補(bǔ)體沉積時(shí)，一般提示為非免疫性疾病，如Alport綜合征、Fabry’s綜合征及良性復(fù)發(fā)性血尿等。但慢性硬化性腎小球腎炎時(shí)，往往不能發(fā)現(xiàn)有免疫球蛋白或補(bǔ)體的沉積，有時(shí)偶可發(fā)現(xiàn)不規(guī)則而稀疏的免疫球蛋白散在性分布，這是由于硬化的腎小球病變陳舊，已無免疫反應(yīng)參與。又如微小病變腎病，臨床表現(xiàn)有嚴(yán)重的腎病綜合征，但其腎穿刺標(biāo)本熒光顯微鏡檢查為陽性，無任何免疫球蛋白及補(bǔ)體沉積，這僅能說明體液免疫未參與其發(fā)病機(jī)制�，F(xiàn)已證明本病為細(xì)胞免疫球蛋白及補(bǔ)體沉積，這僅能說明體液免疫未參與其發(fā)病機(jī)制�，F(xiàn)已證明本病為細(xì)胞免疫異常所致，故仍為免疫性疾病。此外，在糖尿病性腎小球硬化時(shí)，�？梢姷侥I小球內(nèi)有IgG沿毛細(xì)血管壁呈連續(xù)線形沉積，這種現(xiàn)象目前認(rèn)為是IgG的非特異性沉積，不能認(rèn)為是免疫性疾病。
�。ㄈ�)有助于某些腎小球疾病的確診
某些腎小球疾病，雖然其臨床表現(xiàn)多種多樣，但其腎穿刺組織檢查有其免疫熒光或酶標(biāo)染色的特征性表現(xiàn)，往往有助于腎小球疾病的確診，甚至在光鏡觀察及電鏡觀察之前即可作出診斷。例如IgA腎病在臨床上除表現(xiàn)為反復(fù)發(fā)作性血尿外，也可表現(xiàn)為蛋白尿、高血壓、腎病綜合征等。但如熒光顯微鏡發(fā)現(xiàn)腎小球系膜區(qū)有IgA沉積，并有備解素或B因子顯示為旁路途徑激活補(bǔ)體時(shí)，即可確診為IgA腎病。如同時(shí)伴有皮膚紫癜、腹痛或關(guān)節(jié) 疼痛時(shí)，即可確診為紫癜性腎炎。又如IgM腎病之診斷依賴于腎小球系膜區(qū)的IgM大量沉積；膜性腎小球腎炎之診斷則可根據(jù)沿腎小球毛細(xì)血管壁均勻一致的顆粒狀熒光；局灶性節(jié) 段性腎小球硬化的診斷有賴于IgM在部分腎小球的節(jié) 段性沉積。又如腎小球內(nèi)有多種免疫蛋白沉積，并伴隨有C1q、C4或C2的沉積，顯示補(bǔ)體系統(tǒng)為經(jīng)典途徑激活，即可確診為狼瘡性腎炎。因此，熒光顯微鏡的觀察在診斷上占有很重要的地位。
