�。ㄋ�)磁性分離法
1975年，Hersh報(bào)道了用磁化分離技術(shù)分離血清狄高辛放免測定的B、F后，受到了廣泛的重視。近年來國內(nèi)外許多學(xué)者對磁化顆粒的制備進(jìn)行了系統(tǒng)地研究，應(yīng)用于B與F的分離，并取得了引人注目的進(jìn)展，使放免的B、F分離不再使用離心，縮短了放免操作時(shí)間，便于放免自動(dòng)化測量。磁性分離的具體原理為血清樣品與標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原與磁顆粒上的一定量的抗體反應(yīng)，產(chǎn)生的抗原抗體磁性顆粒復(fù)合物，在磁場作用下沉降，使結(jié)合部分與游離部分分離。在磁性分離器上棄上清，進(jìn)行測量。優(yōu)點(diǎn)是簡化了操作程序，B、F分離也較完全，穩(wěn)定性好。
目前常用的磁性分離技術(shù)除磁性固相抗體外，還有磁化活性炭吸附分離劑。
�。ㄎ�)固相包被分離法
近年來由于固相技術(shù)的研究使其固相所被（埋)技術(shù)發(fā)展迅速，再有固相包被具有簡便、快速、穩(wěn)定、不需離心等優(yōu)點(diǎn)，有逐漸取代液相法的趨勢。
1990年，Causse報(bào)告了活化塑料管新技術(shù)及生物素結(jié)合抗體、親和素標(biāo)記物的應(yīng)用，使放免技術(shù)對多數(shù)微量物質(zhì)的檢測可達(dá)到10-15g級水平，大大提高了放免測定的精確度、靈敏度。
抗體包被：物理吸附法—方法簡便，但包被量低。
價(jià)鍵結(jié)合法—需要纖維素、瓊脂等固相載體，操作復(fù)雜。
Causse活化塑料管新技術(shù)，提高了包被量，主要特點(diǎn)是將順丁烯二酸酐和苯乙烯的共聚體涂布試管，在試管壁形成一層活性薄膜（這種方法操作簡便)。
�。�)雙抗體+PEG的分離法
這種分離方法利用雙抗體特異性強(qiáng)、PEG沉淀簡便快速的優(yōu)點(diǎn)，從而克服了雙抗體時(shí)間長、PEG方法非特異結(jié)合高的缺點(diǎn)。這一方面是當(dāng)前分離技術(shù)中較理想的一種方法。
這種聯(lián)合方法分離方法減少了第二抗體的用量，PEG的最終濃度也只需2～4%，成本較低。這種方法既適用于蛋白質(zhì)、酶、大分子物質(zhì)，又適用于小分子肽等半抗原物質(zhì)。
1991年，北京中國同位素公司北方免疫試劑所采用80年代法國廣泛應(yīng)用的雙抗體+PEG、再加一定劑量的γ球蛋白（免疫第二抗體時(shí)應(yīng)用的γ球蛋白)的分離劑，溶解于磷酸緩沖液中，pH在7.4左右。這種分離劑推廣應(yīng)用產(chǎn)生了很好的效果。沉淀完全，牢固，而非特異性結(jié)合低，時(shí)間短（加入分離劑15min后即可離心)，受溫度影響小，受到用戶的廣泛好評。
以上方法，要依據(jù)反應(yīng)液中反應(yīng)物分子量大小，酸堿度等特點(diǎn)，選擇合適的分離方法及分離劑。
