藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)-第二篇 機(jī)能實(shí)驗(yàn):第十三章 神經(jīng)系統(tǒng)

第十三章  神經(jīng)系統(tǒng)

第一節(jié)  神經(jīng)干動(dòng)作電位及其傳導(dǎo)速度的測(cè)定

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>】

 (1) 掌握動(dòng)作電位（actionnpotential ,AP)測(cè)定原理以及傳導(dǎo)速度的測(cè)定與計(jì)算方法.

(2)觀察、識(shí)別蟾蜍坐骨神經(jīng)干雙相和單相AP。

（3)分析低溫、局麻藥和機(jī)械損傷等因素對(duì)神經(jīng)干AP及其傳導(dǎo)速度的影響機(jī)理。

【實(shí)驗(yàn)原理】

神經(jīng)干受有效剌激興奮后 , 產(chǎn)生的AP以脈沖的形式按一定的速度向遠(yuǎn)處擴(kuò)布傳導(dǎo)。不同類型的神經(jīng)纖維其傳導(dǎo)興奮的速度是不相同的，直徑粗的神經(jīng)纖維傳導(dǎo)速度快 , 直徑相同的纖維，有髓纖維比無髓纖維傳導(dǎo)快。蛙類的坐骨神經(jīng)干屬于混合性神經(jīng) , 其中包含有粗細(xì)不等的各種纖維 , 其中直徑最粗的有髓纖維 , 傳導(dǎo)速度在正常室溫下大約為 35~40m/s。測(cè)定神經(jīng)纖維興奮的傳導(dǎo)速度時(shí), 在遠(yuǎn)離刺激點(diǎn)的不同距離處分別引導(dǎo)其AP , 兩引導(dǎo)點(diǎn)之間的距離為 d , 在兩引導(dǎo)點(diǎn)分別引導(dǎo)出的動(dòng)作電位的時(shí)相差為 T�？砂凑展�式（V =d/T)計(jì)算其傳導(dǎo)速度。此外，神經(jīng)纖維在一次興奮過程中 , 其興奮性可發(fā)生周期性變化 , 包括絕對(duì)不應(yīng)期、相對(duì)不應(yīng)期、超常期和低常期。

本實(shí)驗(yàn)要求學(xué)生通過離體神經(jīng)干AP的細(xì)胞外記錄法及其基本波形的判斷和測(cè)量，掌握神經(jīng)干AP及其傳導(dǎo)速度的測(cè)定方法 ,通過調(diào)整刺激條件改變離體神經(jīng)干的興奮性及其AP波形，并分析其機(jī)理。

【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】

 蟾蜍或青蛙。 

【實(shí)驗(yàn)藥品與器材】

1.藥品

任氏液

2.器材

BL-420E型生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)一套、神經(jīng)標(biāo)本盒、蛙類手術(shù)器械、濾紙、縫合線、、燒杯、滴管等。

【實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)】

 蟾蜍或青蛙坐骨神經(jīng)干雙相、單相AP及其傳導(dǎo)速度

【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】

(1)坐骨神經(jīng)干標(biāo)本制備

按第五章第六節(jié)兩棲類動(dòng)物實(shí)驗(yàn)常用手術(shù)方法分離制備坐骨神經(jīng)干，將制備好的坐骨神經(jīng)干浸泡于任氏液的燒杯中備用。

（2)連接實(shí)驗(yàn)裝置

將引導(dǎo)電極、刺激輸出電極分別插入生物信號(hào)采集處理儀輸入通道2和刺激輸出通道并與神經(jīng)標(biāo)本盒相應(yīng)電極相連（實(shí)驗(yàn)裝置圖13-1中S₁  S₂:刺激電極；R₁ R₂：引導(dǎo)電極)。鑷子夾住神經(jīng)干標(biāo)本兩端的線頭，將標(biāo)本近心端放在刺激電極上，遠(yuǎn)心端放在引導(dǎo)電極上。

 圖13-1 實(shí)驗(yàn)裝置示意圖

（3)觀察坐骨神經(jīng)干雙相動(dòng)作電位

雙擊BL-420E圖標(biāo)進(jìn)入生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)軟件界面，在實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目欄中調(diào)出動(dòng)作電位檢測(cè)模塊，點(diǎn)擊“刺激”按鈕，系統(tǒng)開始采樣，適當(dāng)調(diào)整各通道放大倍數(shù)及X、Y軸壓縮比，即可產(chǎn)生雙向動(dòng)作電位。如改刺激參數(shù)為刺激個(gè)數(shù)為2，并適當(dāng)增加時(shí)間間隔至1秒，即可觀察到神經(jīng)干的2個(gè)雙向AP。

（4)測(cè)定神經(jīng)興奮傳導(dǎo)速度

先用直尺測(cè)量?jī)蓪?duì)引導(dǎo)電極之間的距離（距離d=R₁ 與R₂之間的距離)，啟動(dòng)“刺激”鍵，觀察神經(jīng)干AP波形變化，點(diǎn)擊測(cè)量圖標(biāo)，即可手動(dòng)測(cè)量?jī)蓚�(gè)AP之間的時(shí)間（時(shí)間T=兩個(gè)AP起點(diǎn)的間隔時(shí)間)。按公式V= d/T計(jì)算AP傳導(dǎo)速度。

①測(cè)量正常AP傳導(dǎo)速度。

②將標(biāo)本置于4℃任氏液中浸泡5分鐘后，觀察AP變化,測(cè)定其傳導(dǎo)速度。

③調(diào)換標(biāo)本方向，觀察AP有無變化。

④保持刺激電極與引導(dǎo)電極間距離不變，改變兩引導(dǎo)電極（R₁與 R₂)間距離觀察雙相AP變化。

⑤對(duì)調(diào)兩引導(dǎo)電極的位置，觀察雙相AP變化。

⑥在兩引導(dǎo)電極之間滴一滴普魯卡因，觀察AP波形變化。

⑦用鑷子將兩引導(dǎo)電極之間的神經(jīng)夾傷，觀察AP波形的改變。

⑧實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，選取“文件”下的打印，打印實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

（5)測(cè)定神經(jīng)興奮不應(yīng)期

另取一根制備好的坐骨神經(jīng)干標(biāo)本置于神經(jīng)標(biāo)本盒電極上，在“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目”下拉菜單中點(diǎn)擊“神經(jīng)干不應(yīng)期”項(xiàng)，系統(tǒng)自動(dòng)彈出刺激方式對(duì)話框，選擇“程控”，設(shè)兩次刺激初始間隔為30ms,依次遞減間隔步長(zhǎng)為2ms。當(dāng)兩次刺激間隔時(shí)間越來越短時(shí)，第二個(gè)AP波形開始減小，表明第二個(gè)刺激落入第一次興奮后的相對(duì)不應(yīng)期。當(dāng)兩次刺激間隔時(shí)間縮短為1～2ms時(shí)，第二個(gè)AP完全消失，說明第二個(gè)刺激落入到第一次興奮后的絕對(duì)不應(yīng)期。

【注意事項(xiàng)】

（1)實(shí)驗(yàn)前和實(shí)驗(yàn)后，必須用任氏液棉球擦拭干凈神經(jīng)標(biāo)本盒全部電極，使電極保持良好的導(dǎo)電性能。

（2)神經(jīng)干應(yīng)盡可能分離得長(zhǎng)一些，全長(zhǎng)須在8cm以上。

（3)神經(jīng)干分離過程中勿損傷神經(jīng)組織，以免影響實(shí)驗(yàn)效果。

（4)神經(jīng)標(biāo)本盒保持接地，實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)蓋上神經(jīng)標(biāo)本盒的盒蓋，以防干擾與神經(jīng)干燥。

【思考題】

（1)本實(shí)驗(yàn)采用的方法是細(xì)胞外記錄AP，此外還有何種方法記錄AP？

（2)神經(jīng)干AP與單一神經(jīng)纖維的AP有何區(qū)別?

（3)為什么一般情況下記錄到的雙相動(dòng)作電位的波形是不對(duì)稱的?

（4)神經(jīng)干雙相和單相AP產(chǎn)生、傳導(dǎo)和引導(dǎo)原理如何?

（5)絕對(duì)不應(yīng)期內(nèi)，為什么神經(jīng)對(duì)任何強(qiáng)度的刺激都不再發(fā)生反應(yīng)？

（6)低溫、標(biāo)本倒向、改變兩引導(dǎo)電極間距離、對(duì)調(diào)兩引導(dǎo)電極的位置、改變刺激電極和引導(dǎo)電極間的距離、用藥物阻斷或機(jī)械損傷等分別對(duì)神經(jīng)干AP的波形、傳導(dǎo)速度有何影響？為什么？

   （金海燕、韓偉)

第二節(jié) 主動(dòng)脈神經(jīng)放電與動(dòng)脈血壓的調(diào)節(jié)

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>】

（1)學(xué)習(xí)哺乳類動(dòng)物在體神經(jīng)干動(dòng)作電位的引導(dǎo)和血壓直接測(cè)量方法，觀察機(jī)械刺激、電刺激、藥物及神經(jīng)體液因素對(duì)家兔血壓的影響。

（2)分析動(dòng)脈血壓與主動(dòng)脈神經(jīng)放電的電壓、頻率、聲音變化的相互關(guān)系。

【基本原理】

    正常生理情況下，人和哺乳類動(dòng)物的動(dòng)脈血壓相對(duì)穩(wěn)定性是通過神經(jīng)和體液因素調(diào)節(jié)實(shí)現(xiàn)的，其中主動(dòng)脈弓一頸動(dòng)脈竇壓力感受性反射（減壓反射)尤為重要。此反射既可使升高的血壓下降，又可使降低的血壓升高，起著血壓波動(dòng)緩沖的作用。主動(dòng)脈神經(jīng)是主動(dòng)脈弓壓力感受器的傳入纖維，當(dāng)動(dòng)脈血壓升高或降低時(shí) , 主動(dòng)脈弓壓力感受器經(jīng)主動(dòng)脈神經(jīng)傳入沖動(dòng)也隨之增強(qiáng)或減弱, 使壓力感受性反射相應(yīng)增強(qiáng)或減弱 ,使血壓相應(yīng)降低或升高， 以保持動(dòng)脈血壓相對(duì)穩(wěn)定。多數(shù)哺乳動(dòng)物的主動(dòng)脈神經(jīng)在頸部混入迷走神經(jīng)，而家兔的主動(dòng)脈神經(jīng)在解剖上獨(dú)成一支，又稱為減壓神經(jīng)，易于分離，可用于觀察動(dòng)脈血壓變化對(duì)主動(dòng)脈神經(jīng)沖動(dòng)強(qiáng)弱的影響。

    本實(shí)驗(yàn)通過測(cè)定動(dòng)脈血壓波動(dòng)和檢測(cè)主動(dòng)脈神經(jīng)放電強(qiáng)度并分析其變化的相互關(guān)系，以加深對(duì)減壓反射生理意義的理解。

【實(shí)驗(yàn)動(dòng)物】 

家兔，體重2-3kg，性別不拘。

【實(shí)驗(yàn)藥品與器材】

1.藥品

25％氨基甲酸乙酯（或3%戊巴比妥鈉)，1：10000去甲腎上腺素溶液、1：10000乙酰膽堿溶液、利血平注射液、生理鹽水、肝素生理鹽水，液體石蠟(加溫38—40℃)。

2.器材

生物信號(hào)采集與處理系統(tǒng)一套、血壓換能器1個(gè)、手術(shù)器械一套、動(dòng)脈插管1個(gè)、雙極銀絲引導(dǎo)電極1根、鐵支柱2個(gè)、試管夾、雙凹夾2個(gè)、1支（或等藥)、50ml注射器1個(gè)、1ml注射器2個(gè)、10ml注射器1個(gè)、等。

【實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)】

（1)兔動(dòng)脈血壓。

（2)兔減壓神經(jīng)放電頻率、幅度。

（3)監(jiān)聽放電聲音。

【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】

（1)麻醉與固定  

用20％氨基甲酸乙酯（5ml／kg)耳緣靜脈緩慢注射，待動(dòng)物麻醉后，將其仰臥位固定于兔手術(shù)臺(tái)上。

（2)分離減壓神經(jīng)、血管、氣管

 頸前部備皮后，頸部正中切開4-6 cm，用止血鉗分離皮下組織，分開胸舌骨肌，暴露氣管，在氣管外側(cè)找到與氣管平行的血管神經(jīng)鞘，鞘內(nèi)有頸總動(dòng)脈、迷走神經(jīng)(最粗)、交感神經(jīng)(次之)和減壓神經(jīng)(最細(xì))。用玻璃分針將減壓神經(jīng)從血管神經(jīng)束中分離出來1.5 -2cm，動(dòng)作要輕柔細(xì)致，其下方穿一根浸濕的細(xì)絲線備用。用同樣方法依次分離交感神經(jīng)、迷走神經(jīng)、氣管、頸總動(dòng)脈，分別穿線備用。

（3)行氣管插管、左頸總動(dòng)脈插管術(shù)

氣管插管：在甲狀軟骨下2—3cm，做倒“T”形切口，向下插入氣管插管，結(jié)扎固定好插管，便于保證呼吸通暢。

動(dòng)脈插管：結(jié)扎左頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端，動(dòng)脈夾夾閉近心端阻斷血流，動(dòng)脈夾與結(jié)扎線之間應(yīng)相距3cm左右。在靠近遠(yuǎn)心端結(jié)扎部位用眼科剪作1/2斜切口，向心臟方向插入灌滿肝素生理鹽水并與血壓傳感器相連接的動(dòng)脈插管，扎緊插管尖端并固定于其側(cè)管，以防插管滑出，松開動(dòng)脈夾觀察插管內(nèi)是否有血液博出。

（4)安置引導(dǎo)電極

將引導(dǎo)電極固定于支架上，調(diào)節(jié)好引導(dǎo)電極于合適的位置，用玻璃分針輕輕挑起減壓神經(jīng)放置于引導(dǎo)電極上，使電極與神經(jīng)良好接觸，電極不能與周圍組織接觸，但又不過度牽拉神經(jīng)。

（5)實(shí)驗(yàn)裝置與儀器準(zhǔn)備

將血壓傳感器、生物電引導(dǎo)電極與生物信息采集處理系統(tǒng)相連接。雙擊生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)圖標(biāo)。在“實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目”欄中調(diào)出“減壓神經(jīng)放電”項(xiàng)，點(diǎn)擊開始圖標(biāo)，適當(dāng)調(diào)整各通道放大倍數(shù)，直至觀察到理想的波形曲線。①動(dòng)脈血壓：辨認(rèn)血壓波形曲線的一級(jí)波和二級(jí)波，有時(shí)可見三級(jí)波。②減壓神經(jīng)放電波形與聲音：放電頻率和電壓呈遞減的三角波為減壓神經(jīng)放電波形的主要特點(diǎn)，其聲音類似于火車行駛的轟隆聲，如聲音太小不清楚，可調(diào)節(jié)音箱音量旋鈕，放大音量，或加大信號(hào)通道的放大倍數(shù)。

（6)實(shí)驗(yàn)步驟

（1)動(dòng)脈夾夾閉右頸總動(dòng)脈遠(yuǎn)心端5—10秒，觀察減壓神經(jīng)放電頻率、幅度、聲音與血壓變化相互關(guān)系。

（2)從耳緣靜脈注射1：10000去甲腎上腺素0．2 -0．3m1，觀察減壓神經(jīng)放電的頻率、幅度、聲音與血壓變化相互關(guān)系。

（3)從兔耳緣靜脈注射1：10000乙先膽堿0.3 m1，觀察減壓神經(jīng)放電頻率、幅度聲音與血壓變化相互關(guān)系。

（4)電刺激減壓神經(jīng)

剪斷對(duì)側(cè)減壓神經(jīng)，分別刺激中樞端與外周端（刺激電壓：1—2v，刺激時(shí)間：5-10s)，觀察減壓神經(jīng)放電頻率、幅度聲音與血壓變化相互關(guān)系。

（5)電刺激迷走神經(jīng)

剪斷迷走神經(jīng)，分別刺激中樞端與外周端（刺激電壓：1—2v，刺激時(shí)間：5-10s)，觀察血壓的變化。

【注意事項(xiàng)】 

（1)減壓神經(jīng)纖細(xì)，分離時(shí)，動(dòng)作要輕柔細(xì)致，切勿盲目牽拉，以免損傷。

（2)引導(dǎo)電極與減壓神經(jīng)干須緊密接觸并懸空，避免觸碰周圍組織，影響電信號(hào)的引導(dǎo)。

（3)實(shí)驗(yàn)過程中，可滴少量生理鹽水防止減壓神經(jīng)干燥。

（4)引導(dǎo)電極兩極間距為2mm左右，以防短路。

（5)實(shí)驗(yàn)步驟1～5，均必須待減壓神經(jīng)放電及血壓恢復(fù)正常后，方可進(jìn)行下一步驟。

【思考題】

（1)觀察心縮期與心舒期血壓和減壓神經(jīng)放電的變化，分析減壓神經(jīng)放電與血壓的相互關(guān)系。

（2)試述夾閉頸總動(dòng)脈后，減壓神經(jīng)放電、血壓發(fā)生變化的機(jī)理。

（3)試述注射去甲腎上腺素和乙酰膽堿后，減壓神經(jīng)放電、血壓發(fā)生變化的機(jī)理。

（4)根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析減壓神經(jīng)是傳入神經(jīng)還是傳出神經(jīng)，闡述減壓反射調(diào)節(jié)的生理意義。

（5)本實(shí)驗(yàn)采用的動(dòng)脈血壓測(cè)量法是屬直接測(cè)量法，還是屬間接測(cè)量法？

 （金海燕、韓偉)

第三節(jié)  香煙的毒性作用

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>】

觀察煙對(duì)小鼠的毒性作用，以明確吸煙對(duì)人體的危害。

【實(shí)驗(yàn)原理】

煙堿（nicotine，尼古丁)是煙葉（tobacco)的重要成分，具有N膽堿能受體激動(dòng)作用，可興奮自主神經(jīng)節(jié)和神經(jīng)肌接頭的N膽堿受體，其對(duì)神經(jīng)節(jié)N受體和神經(jīng)肌接頭N受體的作用呈雙相性，即小劑量激動(dòng)N受體，大劑量阻斷N受體。

本實(shí)驗(yàn)用煙堿提取器制備煙堿溶液，給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腹腔注射煙堿溶液，觀察煙堿吸收過程中N受體由激動(dòng)至阻斷時(shí)的動(dòng)物興奮性的變化。

【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】

小鼠。

【實(shí)驗(yàn)藥品與器材】

水煙斗、火柴、1.0ml注射器、10.0m1量筒，香煙、生理鹽水。

【實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)】

小鼠的肌肉活動(dòng)、呼吸、末梢循環(huán)情況，最后是否死亡。

【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】

（1)量筒量取生理鹽水4.0m1置于煙斗內(nèi)，搖勻后，先用注射器抽取1.0ml液體(對(duì)照組用)，然后，將香煙插于水煙斗上并點(diǎn)燃，于煙斗嘴處用洗耳球抽吸促使繼續(xù)燃燒，使煙霧經(jīng)煙斗內(nèi)溶液過濾，此時(shí)，煙霧內(nèi)部分水溶性毒物如尼古丁(煙堿)等，即溶于水中。

（2)取小鼠2只，觀察正常情況后，甲鼠腹腔注射煙過濾液0.5m1，乙鼠則腹腔注射吸煙前煙斗內(nèi)溶液0.5m1做對(duì)照，逐步觀察并比較兩小鼠的表現(xiàn)(肌肉活動(dòng)、呼吸、末梢循環(huán))。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入表13-1中：

表13-1  香煙濾液對(duì)小鼠的毒性作用

【實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)】

（1)在煙斗嘴處用洗耳球抽吸促使香煙繼續(xù)燃燒的過程要緩慢，使尼古丁充分溶解于生理鹽水中。

（2)腹腔注射煙過濾液0.5m1后如果毒性反應(yīng)不明顯，可酌情增加劑量。

【思考題】

含有尼古丁的煙過濾液為什么可使小鼠出現(xiàn)一系列中毒表現(xiàn)?

（陳臨溪  廖端芳)

第四節(jié)  有機(jī)磷酸酯類的中毒與解救

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>

（1)觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在有機(jī)磷酸酯類農(nóng)藥­——敵百蟲中毒時(shí)的中毒癥狀，以及中毒時(shí)血液膽堿酯酶活力的抑制情況。

（2)根據(jù)阿托品、解磷定對(duì)有機(jī)磷酸酯類中毒的解救效果及對(duì)血液膽堿酯酶活力的影響，分析兩藥的解毒原理。

（3)熟悉血液膽堿酯酶活性的檢查方法。

【實(shí)驗(yàn)原理】

有機(jī)磷酸酯類通過多種途徑吸收后，與膽堿酯酶呈難逆性結(jié)合，抑制膽堿酯酶活性，使其喪失水解乙酰膽堿的能力，造成膽堿能神經(jīng)末梢釋放的乙酰膽堿大量堆積，產(chǎn)生一系列急性擬膽堿中毒癥狀。

阿托品為選擇性的M膽堿受體阻斷劑，很大劑量時(shí)還可阻斷N_l受體，可與乙酰膽堿競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合M、N_l受體，阻斷乙酰膽堿對(duì)這些受體的激動(dòng)作用， 因而可以有效地解除有機(jī)磷酸酯類中毒的M樣癥狀和N_l樣癥狀，是解救有機(jī)磷酸酯類中毒的對(duì)癥治療藥物。

碘解磷定 (pyraloxime iodide，PAM) 是有機(jī)磷酸酯類中毒的特效解救藥，因其可使膽堿酯酶復(fù)活，恢復(fù)膽堿酯酶水解乙酷膽堿的能力，因而能徹底解除有機(jī)磷酸酯類農(nóng)藥急性中毒的癥狀和體征，但其對(duì)循環(huán)和呼吸的解救作用起效較慢，臨床上常需配合阿托品類藥物一起使用。是解救有機(jī)磷酸酯類中毒的對(duì)因治療藥物。

本實(shí)驗(yàn)給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物家兔腹腔注射有機(jī)磷酸酯類敵百蟲溶液后，觀察家兔出現(xiàn)敵百蟲中毒時(shí)的中毒癥狀和血液膽堿酯酶活力的抑制情況；觀察比較阿托品、碘解磷定對(duì)有機(jī)磷酸酯類中毒的解救效果及對(duì)血液膽堿酯酶活力的影響，并分析兩藥的解毒原理。

【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】

家兔2只，雌雄不拘。

【實(shí)驗(yàn)藥品與器材】

3％精制敵百蟲溶液、0.2％硫酸阿托品溶液、2.5％碘解磷定溶液、二甲苯。家兔固定箱、注射器、預(yù)先加草酸鉀的試管、試管架、刀片、干棉球、瞳孔尺與木夾。

【實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)】

瞳孔大小、唾液分泌情況、呼吸、大小便、肌張力、肌震顫及最后結(jié)果。

【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】

  （1)編號(hào)，稱重，觀察一般情況

取家兔2只，編號(hào)、稱重后，觀察動(dòng)物的活動(dòng)情況和呼吸狀況(頻率、幅度、是否困難等)，以及瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌張力、有無肌震顫等，分別加以記錄并填入下表。

   （2) 測(cè)定血液膽堿酯酶活力

將2只家兔分別固定于箱內(nèi)，以蘸有二甲苯的棉球涂擦耳殼，使血管擴(kuò)張。當(dāng)充血明顯后，用刀片切割耳靜脈(切口不宜過大、過深)，讓血液自然流出，滴入預(yù)先裝有少量草酸鉀結(jié)晶的試管中，立即搖勻，用于測(cè)定血液膽堿酯酶活力，如取血后切口流血不止，可用干棉球按壓止血。

   （3)腹腔注射敵百蟲，觀察中毒癥狀，并取血再次測(cè)定血液膽堿酯酶活力

將2只家兔，分別腹腔注射3％敵百蟲3 ml/ kg，密切觀察給藥后家兔各項(xiàng)生理指標(biāo)的變化，記錄并填入下表，待中毒癥狀明顯后，再按上述方法取血，供測(cè)定血液膽堿酯酶活力之用。

   （4) 給予特殊解救藥，觀察、比較解救效果

當(dāng)家兔中毒癥狀明顯后，立即給甲兔由耳緣靜脈注射0.2％硫酸阿托品溶液1.0 ml／kg，給乙兔由耳緣靜脈注射2.5％碘解磷定2.0 ml／kg，然后每隔5 min，再檢查各項(xiàng)生理指標(biāo)1次，觀察2只家兔的情況有無好轉(zhuǎn)，特別注意甲兔和乙兔的區(qū)別。待有關(guān)中毒癥狀明顯消減以后，再由2只家兔的靜脈取血，測(cè)定血液膽堿酯酶活力。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果按表13-2的內(nèi)容逐項(xiàng)填寫。

表13-2 有機(jī)磷酸酯類中毒與解救的實(shí)驗(yàn)結(jié)果

【實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)】

(1) 敵百蟲屬于劇毒類殺蟲劑，且可從皮膚吸收，如與手等接觸后，應(yīng)立即用水清洗。

(2) 給家兔實(shí)施腹腔注射敵百蟲后，15min時(shí)仍未出現(xiàn)中毒癥狀，可再追加1／3劑量的敵百蟲溶液。

(3) 預(yù)先暴露好耳緣靜脈，抽好阿托品與碘解磷定，以便急救。

（4)阿托品給藥宜快，碘解磷定給藥宜慢。

（5)本實(shí)驗(yàn)為分析阿托品和碘解磷定的作用機(jī)制而設(shè)。應(yīng)切記，在臨床實(shí)際中，須將阿托品與解磷定配合使用，才能獲得最好的解毒效果。

【思考題】

1. 試驗(yàn)中阿托品和碘解磷定給藥時(shí)間過早則動(dòng)物中毒癥狀觀察不完全，而給藥過晚則易導(dǎo)致動(dòng)物因搶救不及時(shí)而死亡，步驟（4)中該如何把握上述解藥的給藥時(shí)間？

2. 試根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果，分析有機(jī)磷酸酯類的中毒機(jī)制及阿托品和解磷定的解毒原理。

【附】比色法測(cè)定血液膽堿酯酶活力

【實(shí)驗(yàn)原理】

血液的膽堿酯酶能催化乙酰膽堿水解而產(chǎn)生乙酸與膽堿。在一定的溫度、pH和時(shí)間等條件下，水解的乙酰膽堿量與膽堿酯酶的活性成正比。因此在一定量的血液中加入一定量的乙酰膽堿，使之反應(yīng)一段時(shí)間后，測(cè)定血液中剩余的乙酰膽堿量，便可計(jì)算出已水解的乙酰膽堿量，進(jìn)而測(cè)出膽堿酯酶的活力。

醫(yī)學(xué)全.在線payment-defi.com剩余乙酰膽堿的測(cè)定是利用乙酰膽堿與羥胺作用生成羥肟酸，后者在酸性條件下進(jìn)一步與三價(jià)鐵離子作用，生成紅棕色的羥肟酸鐵絡(luò)合物，因此顏色的深淺即可反映乙酰膽堿含量的多少。

【實(shí)驗(yàn)藥品與器材】

吸管、試管、試管架、恒溫水浴、光電比色計(jì)。

0.133mol／L磷酸氫二鈉溶液：稱取Na₂HPO₄·12H₂O 23.87 g，用蒸餾水溶解并稀釋至500m1。

0.133mol／L 磷酸二氫鉀溶液：稱取KH₂P0₄  9.08 g，用蒸餾水溶解并稀釋至500 ml。

pH7.2磷酸鹽緩沖液：取0.133mol／L磷酸氫二鈉溶液72 ml，與0.133mol／L磷酸二氫鉀溶液28 ml混和即成100 ml pH7.2磷酸鹽緩沖液。

0.001mol／L pH4.5醋酸鹽緩沖液：先用每升含冰醋酸5.78 m1的水溶液28 ml和每升含醋酸鈉(不含結(jié)晶水)8.20 g的水溶液22ml混和，配成0.1 mol／L pH4.5的醋酸鹽緩沖液，再用蒸餾水稀釋100倍。

0.07mol/L乙酰膽堿底物貯存液：快速稱取氯化乙酰膽堿0.127 g(或溴化乙酰膽堿0.158 g)，溶于0.001 mol／L PH4.5醋酸鹽緩沖液10 m1中。4℃下保存（可保存4周)。

0.007 mol／L乙酰膽堿底物應(yīng)用液：試驗(yàn)前取0.07 mol／L乙酰膽堿底物貯存液，用pH7.2磷酸鹽緩沖液稀釋10倍。

堿性羥胺溶液：臨用前20分鐘內(nèi)取等量的14％氫氧化鈉溶液和14％鹽酸羥胺溶液，混和即成。

33.3％(V／V)鹽酸溶液：取比重為1.18的鹽酸50 ml，加蒸餾水100ml。

10％三氯化鐵溶液：稱取FeCl₃·6H₂O 10 g，用0.1 mol／L 鹽酸溶解，使成100 ml。

【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】

按表13-3進(jìn)行操作，每加一種試劑后均須充分搖勻后再加入下一種試劑，水浴的溫度和時(shí)間須按要求嚴(yán)格控制。

表13-3  比色測(cè)定法的實(shí)驗(yàn)操作步驟

濾紙過濾，15 min內(nèi)用721型分光光度計(jì)比色，測(cè)定在525 nm處的吸光度，以空白管校正光密度到0點(diǎn)，讀取各管吸光度進(jìn)行計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)管吸光度

注：以1 m1血液在規(guī)定條件下能分解l μmo1乙酰膽堿為1個(gè)膽堿酯酶活力單位。

(雷小勇 廖端芳)

第五節(jié) 藥物的鎮(zhèn)痛作用

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?/b>

1.了解評(píng)價(jià)藥物鎮(zhèn)痛作用的常見藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法

2.比較臨床常用的兩類不同的鎮(zhèn)痛藥鎮(zhèn)痛作用有何不同。

【實(shí)驗(yàn)原理】

在動(dòng)物的皮膚、內(nèi)臟等多處部位分布有初級(jí)傳入神經(jīng)元，可以感受溫度、酸堿，機(jī)械及化學(xué)物質(zhì)等在內(nèi)的多種有害或傷害性刺激，產(chǎn)生的生物信號(hào)通過傳入神經(jīng)纖維經(jīng)脊髓最后上傳入大腦皮層感覺中樞，經(jīng)過信號(hào)的調(diào)制，最終形成痛覺。

中樞神經(jīng)系統(tǒng)存在一些內(nèi)源性阿片肽，作為一種神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)質(zhì)或神經(jīng)激素，通過選擇性作用于其特異性受體——阿片受體，對(duì)痛覺的產(chǎn)生或傳導(dǎo)起著重要的調(diào)節(jié)作用。目前已知的阿片受體主要分三型——μ、δ、κ。噴他佐辛（又名鎮(zhèn)痛新)為阿片受體的部分激動(dòng)劑，通過激動(dòng)κ受體產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用，但作用僅為嗎啡的1/3，同時(shí)由于有輕度的μ受體拮抗作用，成癮性小，藥政管理上屬非麻醉品，臨床上主要用于各種慢性劇痛。

阿司匹林為非甾體類抗炎藥的典型代表藥，主要通過抑制外周前列腺素類物質(zhì)的合成進(jìn)而使局部痛覺感受器敏感性降低，產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。該類藥物僅有中等強(qiáng)度鎮(zhèn)痛作用，但無成癮性，臨床上主要各類慢性鈍痛，而對(duì)急性銳痛、平滑肌絞痛效果較差。

【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】

健康雌性小鼠10～12只。

【實(shí)驗(yàn)藥品與器材】

0.1％鹽酸噴他佐辛溶液，4％阿司匹林溶液，0.6%醋酸溶液，生理鹽水

鼠籠，熱板儀，天平，1ml注射器

【實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)】  

小鼠出現(xiàn)痛反應(yīng)——熱板法：扭體反應(yīng)或抬后足、舔后足并回頭；扭體法：表現(xiàn)為腹部收縮，軀體扭曲，臀部抬高，后肢伸展，蠕行——所需時(shí)間。

【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】

實(shí)驗(yàn)一（熱板法)

1.  動(dòng)物的選擇：將熱板儀溫度調(diào)到55℃0.5℃，把小鼠放在熱板儀上，測(cè)定各小鼠的正常痛反應(yīng)（包括抬后足或舔后足并回頭)出現(xiàn)所需時(shí)間，重復(fù)一次，每次間隔5分鐘，取均數(shù)，平均時(shí)間超過30秒的小鼠棄去不用，如是選出3只，編號(hào)、稱重后待用。

2.  將3只小鼠分為3組，其中甲鼠給予腹腔注射0.1％鹽酸噴他佐辛0.1ml/10g (0.15mg/10g),同時(shí)給乙鼠腹腔注射4％阿司匹林溶液 0.15ml/10g(6mg/10g),給丙鼠腹腔注射等量生理鹽水0.15ml/10g。

3.  給藥后15、30、45、60分鐘按步驟1觀測(cè)并記錄小鼠出現(xiàn)痛反應(yīng)所需時(shí)間，如小鼠在熱板儀上超過60秒還不出現(xiàn)痛反應(yīng)，則痛反應(yīng)時(shí)間按60秒計(jì)算。

4.  按下列公式計(jì)算小鼠痛閾提高的百分率：

   用藥后痛反應(yīng)出現(xiàn)時(shí)間－用藥前痛反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間

   痛閾提高百分率＝  ╳ 100%

用藥前痛反應(yīng)出現(xiàn)的時(shí)間

實(shí)驗(yàn)二（扭體法)

1.  取小鼠9只，稱重、編號(hào)后待用。

2. 將9只小鼠分為3組，其中甲組小鼠給予腹腔注射0.1％鹽酸噴他佐辛0.1ml/10g (0.15mg/10g),同時(shí)給乙組小鼠腹腔注射4％阿司匹林溶液 0.15ml/10g(6mg/10g)，給丙組小鼠腹腔注射等量生理鹽水0.15ml/10g，注射30分鐘后，每只小鼠分別腹腔注射0.6%醋酸溶液：0.2ml/只，觀察15分鐘內(nèi)各組中發(fā)生疼痛陽(yáng)性反應(yīng)——扭體反應(yīng)（腹部收縮，軀體扭曲，臀部抬高，后肢伸展，蠕行)的小鼠數(shù)目，集中全實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，按下列格式計(jì)算藥物鎮(zhèn)痛作用的百分率。

用藥組無扭體反應(yīng)鼠數(shù)－生理鹽水組無扭體反應(yīng)鼠數(shù)

 藥物鎮(zhèn)痛作用的百分率＝╳ 100%

生理鹽水組無扭體反應(yīng)鼠數(shù)

【實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)】

1.   實(shí)驗(yàn)中應(yīng)選用雌性小鼠，因雄性小鼠受熱后陰囊會(huì)下墜而接觸電熱板，而陰囊皮膚對(duì)熱刺激敏感，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)測(cè)定的痛反應(yīng)時(shí)間不準(zhǔn)。

2.   測(cè)定小鼠疼痛反應(yīng)時(shí)一旦小鼠出現(xiàn)典型疼痛反應(yīng)即立即移開電熱板，即使60秒鐘無疼痛反應(yīng)也應(yīng)立即移開，以免導(dǎo)致小鼠嚴(yán)重燙傷。

3.   實(shí)驗(yàn)室室溫以15～20℃為宜，過高小鼠過于敏感，且易于導(dǎo)致小鼠蹦跳，而溫度過低則小鼠反應(yīng)遲鈍，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

4.   實(shí)驗(yàn)過程中小鼠在熱板上15秒內(nèi)出現(xiàn)不安：舉前足、舔前足、踢后肢、跳躍等均不作為痛反應(yīng)指標(biāo)，只有出現(xiàn)抬后足或舔后足才是疼痛指標(biāo)。

5.   0.6%醋酸溶液應(yīng)新鮮配制。

【思考題】

噴他佐辛和阿司匹林鎮(zhèn)痛作用有何不同？

覃麗  謝志忠

第六節(jié)  藥物對(duì)抗中樞興奮藥驚厥的作用

【實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/b>】

① 學(xué)習(xí)抗驚厥實(shí)驗(yàn)方法，了解實(shí)驗(yàn)性癲癇動(dòng)物模型的制備方法；

② 觀察抗癲癇藥對(duì)戊四氮驚厥的作用。

【實(shí)驗(yàn)原理】

 基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)常用電刺激、聲刺激或化學(xué)法等方法建立實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物驚厥模型，用來篩選抗癲癇藥物�；瘜W(xué)法指使用大劑量的某些化學(xué)藥品引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物驚厥發(fā)作，以觀察事先給予受試藥物對(duì)癲癇的防止效果，是一種操作簡(jiǎn)便、不需要特殊儀器裝置的抗驚厥實(shí)驗(yàn)方法。常用的化學(xué)藥品有戊四氮、氨基脲、尼可剎米等。戊四氮為主要興奮延髓的中樞神經(jīng)興奮藥，過量可興奮大腦和脊髓，表現(xiàn)為強(qiáng)烈的陣攣性驚厥，繼續(xù)發(fā)展可引起強(qiáng)直性驚厥，其致驚的主要作用部位在腦干和大腦，發(fā)生機(jī)理可能是增加中樞神經(jīng)細(xì)胞對(duì)K⁺的通透性，提高細(xì)胞外K⁺濃度，使細(xì)胞膜部分去極化而提高其興奮性，增強(qiáng)了興奮性突觸的易化過程，也可能與戊四氮阻止腦內(nèi)主要的抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸（GABA)的自發(fā)釋放有關(guān)。戊四氮在閾劑量時(shí)，引起頭部及前肢抽搐，但不影響翻正反射，此為戊四氮發(fā)作閾值實(shí)驗(yàn)（Metrazol seizure threshold test, MST)，屬癲癇小發(fā)作模型；大劑量戊四氮?jiǎng)t可引起全身性陣攣性驚厥，繼而發(fā)展成強(qiáng)直性驚厥，甚至可引起死亡，此稱為戊四氮最大發(fā)作實(shí)驗(yàn)（Metrazol maximalseizure test, MMS),屬癲癇大發(fā)作模型。

巴比妥（barbital)類抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)，隨著劑量的由小到大，中樞抑制作用的程度由淺入深。當(dāng)劑量大于催眠劑量時(shí)有抗驚厥payment-defi.com/sanji/作用。臨床上常利用barbital類這一機(jī)制將其用于小兒高熱、破傷風(fēng)、子癇、腦炎等及中樞興奮藥中毒引起的驚厥。 

【實(shí)驗(yàn)對(duì)象】  

小白鼠，體重18～22g。

【實(shí)驗(yàn)藥品與器材】 

生理鹽水（NS)、0.5% 苯巴比妥鈉（sodium phenobarbital)，0.02%地西泮，0.5%戊四氮，小鼠籠、粗天平、1.0ml注射器。生理鹽水。

【實(shí)驗(yàn)觀察指標(biāo)】

觀察每組發(fā)生驚厥的動(dòng)物數(shù)，計(jì)算驚厥百分率，比較給藥組與對(duì)照組百分率的差異，以判斷受試藥物有無抗驚厥活性。

小鼠強(qiáng)直性驚厥指標(biāo)：大多數(shù)小鼠給予戊四氮后5～15分鐘內(nèi)出現(xiàn)陣攣性抽搐，或出現(xiàn)興奮性跳躍，隨后出現(xiàn)前肢屈曲，后肢強(qiáng)直，呈角弓反張狀，以其后肢僵直作為驚厥指標(biāo)。

【實(shí)驗(yàn)方法與步驟】

①隨機(jī)分組：取6只小鼠，稱重、編號(hào)，隨機(jī)分成3組，每組2只。

②給藥：實(shí)驗(yàn)組ip（腹腔注射)給予0.5%苯巴比妥納0.1ml/10g，地西泮2mg/kg，對(duì)照組ip NS 0.1ml/10g。10分鐘后，各組小鼠均ip戊四氮100mg/kg。

③觀察：觀察30min內(nèi)各組小鼠驚厥發(fā)生情況（以后肢伸直為指標(biāo))。

【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】 將盡可能多的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（全班或更多班級(jí)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果)匯總起來列表。

將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入表13-4，計(jì)算出驚厥發(fā)生率。

【注意事項(xiàng)】

①給藥劑量必須準(zhǔn)確并確認(rèn)注射在腹腔內(nèi)。

②戊四氮ip劑量一般為100mg/kg，最大也可用至150mg/kg。

③觀察指標(biāo)以強(qiáng)直性驚厥出現(xiàn)與否為準(zhǔn)，細(xì)微震顫不作為驚厥指標(biāo)。

【思考題】

①中樞興奮藥有哪些？醫(yī)學(xué)研究中常用哪類中樞神經(jīng)興奮藥制造驚厥模型？為什么？

②苯巴比妥鈉屬于哪類藥物？有哪些藥理作用？

唐圣松  黃紅林