臨床免疫學(xué)及檢驗(yàn)授課教案-實(shí)驗(yàn)課教案:雙擴(kuò)試驗(yàn)

教研室

臨床免疫檢驗(yàn)

課程

名稱

免疫學(xué)及檢驗(yàn)

學(xué)時(shí)

4

檢驗(yàn)專業(yè)2003 級   1、2、3班

帶教時(shí)間

2006 年9 月28日---2006   年 9 月 29 日

教師

姓名

王慧

職稱

主管技師

實(shí)檢（見習(xí))項(xiàng)目

雙擴(kuò)試驗(yàn)

本次實(shí)驗(yàn)

（見習(xí))

目的、

要求

1．掌握凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)的基本原理。

2．熟悉凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)類型及特點(diǎn)。

3．熟悉體外抗原抗體反應(yīng)臨床檢測意義。

內(nèi)容與安排

學(xué)時(shí)

一、介紹本次實(shí)驗(yàn)、見習(xí)的重點(diǎn)及安排

（實(shí)驗(yàn)課應(yīng)包括：1、實(shí)驗(yàn)標(biāo)本的采集，2、實(shí)驗(yàn)操作步驟，

3、實(shí)驗(yàn)操作過程注意事項(xiàng)，4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果的評價(jià)及臨床意義)

1、原理：將抗原和抗體分別加到瓊脂凝膠板上的小孔中，使兩者相互擴(kuò)散，經(jīng)一定時(shí)間后，若兩者特異性結(jié)合，在瓊脂孔間形成白色沉淀線。

2、器材與試劑

3、操作步驟：澆板→制備打孔器→打孔→固定、封底→加樣→溫育→觀察結(jié)果(24小時(shí)后)

4、注意事項(xiàng)

1)． 掌握好瓊脂的溫度

2)澆板時(shí)，瓊脂面要鋪平、無氣泡；澆好后要放置２分鐘凝固。

3)． 打孔時(shí)避免出現(xiàn)裂縫

4)加樣時(shí)避免樣品溢出孔外

5、結(jié)果的判斷:置室溫或37℃18～24h后，凝膠中各自擴(kuò)散的抗原和抗體可在濃度比例適當(dāng)處形成可見的沉淀線。根據(jù)沉淀線的形態(tài)和位置等進(jìn)行分析判斷。

6、檢測的臨床意義：

1)應(yīng)用于疾病的payment-defi.com/Article/診斷及普查；

2)用于抗原抗體的免疫學(xué)分析：抗原或抗體的存在與否及其相對含量的估計(jì)沉淀線的形成是根據(jù)抗原抗體兩者比例所致；抗原或抗體相對分子量的分析抗原或抗體在瓊脂內(nèi)自由擴(kuò)散，其速度受分子量的影響。分子量小者擴(kuò)散快，反之則較慢；用于抗原性質(zhì)的分析兩種受檢抗原的性質(zhì)完全相同、部分相同或完全不同；用于抗體效價(jià)的滴定雙向擴(kuò)散技術(shù)是抗血清抗體效價(jià)滴定的常規(guī)方法。

7、方法學(xué)評價(jià)：操作簡便易行，特異性好;但敏感性較低。

8、學(xué)生分組試驗(yàn)

二、討論思考題：

1、檢測抗血清效價(jià)的方法有哪些？

2、瓊脂雙擴(kuò)散試驗(yàn)主要可用于哪些方面？

3、試從不同角度分析瓊脂雙擴(kuò)散試驗(yàn)與單擴(kuò)散試驗(yàn)的區(qū)別？

三、小結(jié)要點(diǎn)

1、實(shí)驗(yàn)操作情況

2、注意制板時(shí)瓊脂的溫度及澆板的動作要果斷迅速；打孔時(shí)避免瓊脂層脫離玻片底部，避免出現(xiàn)裂縫。

3、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后于第二于下午觀察試驗(yàn)結(jié)果

四、布置學(xué)生作業(yè)內(nèi)容

1、書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告(包括：實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、原理、器材和試劑、操作步驟、注意事項(xiàng)、、方法學(xué)評價(jià)、實(shí)驗(yàn)結(jié)果、結(jié)果分析及結(jié)論、討論)

2、思考題

五、下次實(shí)驗(yàn)（見習(xí))課預(yù)習(xí)范圍及后續(xù)程介紹

下次實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容為：ELISA檢測乙型肝炎病毒標(biāo)志物

預(yù)習(xí)內(nèi)容：什么是ELISA？ELISA試驗(yàn)可有哪些類型？

4學(xué)時(shí)

教案制定時(shí)間： 2006   年 月 日   帶教老師簽名：王慧

專業(yè)主任審閱意見；

   簽名：  年   月   日