醫(yī)學(xué)免費(fèi)論文:黃芩苷對(duì)人牙周膜細(xì)胞RANKL OPG表達(dá)的影響及其作用機(jī)制

KEY WORDS: transforming growth factor βⅡ receptor (TGF�拨翿Ⅱ); small interfering RNA(siRNA); receptor activator of nuclear factor�拨蔅 ligand (RANKL); osteoprotegerin (OPG); periodontal ligament cells (PDLC)

骨保護(hù)素(osteoprotegerin, OPG)及其配體核因子�拨蔅受體激活物配基(receptor activator of nuclear factor�拨蔅 ligand, RANKL)是調(diào)控破骨細(xì)胞生成和活化的關(guān)鍵因子，在調(diào)節(jié)骨質(zhì)吸收中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)OPG�睷ANKL能在人牙周膜成纖維細(xì)胞(periodontal ligament cell, PDLC)表達(dá)，并受多種因素調(diào)節(jié)[1��3]。在口腔局部微環(huán)境中,眾多因素通過作用于牙周組織，使OPG與RANKL的濃度增加或減少來調(diào)控局部骨組織代謝。

細(xì)菌激發(fā)的訴諸免疫炎癥反應(yīng)是造成和影響牙周組織破壞的主要原因。黃芩苷的抗炎作用則決定了其在牙周病的防治中可能起到重要作用。有研究證實(shí)，黃芩苷、淫羊霍苷和大黃素組合時(shí)可抑制內(nèi)毒素(LPS)刺激下人牙齦成纖維細(xì)胞中前列腺素E2(PGE2)的產(chǎn)生，亦可抑制實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙槽骨吸收[4]。本研究的第一個(gè)目的，即擬通過觀察黃芩苷對(duì)PDLC上OPG�睷ANKL表達(dá)的影響，從而證實(shí)黃芩苷對(duì)牙槽骨的吸收的調(diào)節(jié)作用醫(yī).學(xué).全.在.線payment-defi.com。

牙周炎時(shí)，T細(xì)胞的數(shù)量、活性增高，導(dǎo)致炎癥細(xì)胞因子分泌增加，加重牙周炎癥和骨吸收。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factor β, TGF�拨�)可以抑制T細(xì)胞的活性和增殖[5��6]。黃芩苷抗炎作用的機(jī)制也與抑制白介素��1(IL��1)、腫瘤壞死因子α(TNF�拨�)等炎性因子的過度產(chǎn)生有關(guān)[7��8]，因而設(shè)想黃芩苷的抗炎抗骨吸收作用可能是通過TGF�拨聦�(shí)現(xiàn)的。本研究的第二個(gè)目的，即黃芩苷是否通過增強(qiáng)TGF�拨聦�(duì)T細(xì)胞的抑制作用，引起T細(xì)胞活性降低、數(shù)量減少，導(dǎo)致T細(xì)胞在內(nèi)毒素作用下分泌TNF�拨恋妊装Y因子減少，繼而影響OPG�睷ANKL，降低破骨細(xì)胞形成，從而減少骨丟失。

為達(dá)到以上兩個(gè)研究目的，本實(shí)驗(yàn)首先構(gòu)建了靶向轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βⅡ型受體(transforming growth factor βⅡreceptor, TGF�拨垄騌)的小干擾RNA (small interfering RNA, siRNA)真核表達(dá)載體，并將其轉(zhuǎn)染T細(xì)胞，隨后將正常PDLC與轉(zhuǎn)染或未轉(zhuǎn)染siRNA的T細(xì)胞置于加有內(nèi)毒素和黃芩苷的培養(yǎng)液中，觀察黃芩苷對(duì)正常PDLC上OPG�睷ANKL表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1 TGF�拨垄騌靶向siRNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建 根據(jù)GenBank中報(bào)道的TGF�拨垄騌核苷酸序列，參考siRNA的設(shè)計(jì)原則，按照pSilencer3.1H1載體的設(shè)計(jì)要求，設(shè)計(jì)2條siRNA序列。TGF�拨垄騌 siRNA轉(zhuǎn)錄模板由北京華大公司合成，RNAi TGF�拨垄騌目標(biāo)序列依次為：5′�睪ATCCGCAGCAT��

GTGTATAGCTGAATTCAAGAGATTCAGCTA��

TACACATGCTGCTTTTTTGGAAA��3′和5′�睪A��

TCCGCCAGCCATTGCTCATAGATTCAAGAG��

ATCTATGAGCAATGGCTGGCTTTTTTGGAA��

A��3′，分別命名為siRNA1和siRNA2。兩個(gè)片段直接與經(jīng)BamHⅠ和HindⅢ酶切的pSilencer3.1H1載體連接。將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，搖菌培養(yǎng)后提取質(zhì)粒，送北京華大公司進(jìn)行序列測(cè)定。將測(cè)序正確的克隆分別命名為siRNA1和siRNA2。

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