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LIU等[10]實(shí)驗(yàn)顯示，RANKL mRNA在重度牙周炎中的表達(dá)顯著高于中度牙周炎和正常人群,而OPG mRNA在重度及中度牙周炎中表達(dá)則低于正常人群，RANKL mRNA/OPG mRNA比值為重度牙周炎>中度牙周炎>正常人群，從而認(rèn)為，RANKL/OPG比值的升高可能是牙周炎進(jìn)展的一個(gè)危險(xiǎn)因素。TENG等[1112]亦證明,活化的T細(xì)胞表達(dá)高水平的RANKL,牙槽骨明顯吸收;抑制T細(xì)胞的RANKL的表達(dá),牙槽骨的吸收明顯減少，且RANKL/OPG之比降低90%，表明RANKL/OPG比值的升高可能是牙槽骨吸收的關(guān)鍵因素。故本實(shí)驗(yàn)采用RANKL/OPG的比值來評(píng)估黃芩苷對(duì)PDLC OPGRANKL的影響醫(yī).學(xué).全.在.線payment-defi.com。
WANG等[4]研究證實(shí)，黃芩苷0.01mg/L、淫羊霍苷0.01mg/L、大黃素10mg/L組合時(shí)抑制LPS刺激下人牙齦成纖維細(xì)胞中PGE2產(chǎn)生的作用最強(qiáng)，亦可抑制實(shí)驗(yàn)性牙周炎牙槽骨吸收。本實(shí)驗(yàn)希望觀察黃芩苷單獨(dú)作用于PDLC時(shí)的表現(xiàn)，故將黃芩苷的濃度適當(dāng)增大10倍和100倍,即0.01mg/L、0.1mg/L和1.0mg/L作為檢測濃度。在前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，我們證實(shí)1.0mg/L的黃芩苷抑制實(shí)驗(yàn)性牙槽骨吸收的作用最強(qiáng)，于是在本實(shí)驗(yàn)中選擇1.0mg/L黃芩苷作為檢測濃度。
LPS是革蘭氏陰性菌所獨(dú)有的一種致病物質(zhì),對(duì)牙周組織具有很高的毒性,被稱為是牙周炎癥的主要病因之一。通過牙齦局部注射LPS來建立牙周炎動(dòng)物模型的方法已由SUNY Stony Brook動(dòng)物委員會(huì)認(rèn)可[1314]。文獻(xiàn)報(bào)道，1.0g/L的LPS用于建立牙周炎動(dòng)物模型有良好的效果。在我們前期的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也證實(shí)了這一結(jié)論。故在本次實(shí)驗(yàn)中選擇1.0g/L的LPS作為一個(gè)重要的影響因素。
PDLC是牙周組織中最重要的一種細(xì)胞。PDLC位于牙槽骨和牙骨質(zhì)之間,其分泌的OPG在抵御炎癥組織中RANKL介導(dǎo)的骨吸收中發(fā)揮一定的防御功能。在本研究中，實(shí)驗(yàn)組⑥中RANKL和OPG的表達(dá)證實(shí)PDLC能夠產(chǎn)生RANKL、OPG，且OPG的量大于RANKL，與以往的文獻(xiàn)報(bào)道相符[1 ]。RANKL/OPG比值在實(shí)驗(yàn)組⑤低于實(shí)驗(yàn)組⑥(P<0.05)，表明黃芩苷可以直接作用于PDLC，使PDLC表面的RANKL/OPG比值略有降低。RANKL/OPG比值在實(shí)驗(yàn)組④顯著高于實(shí)驗(yàn)組⑥，這一結(jié)論也證實(shí)了以往的研究。比較實(shí)驗(yàn)組③和實(shí)驗(yàn)組④中RANKL/OPG比值，發(fā)現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)組④中加入黃芩苷后，PDLC表面的RANKL/OPG明顯下降。說明在TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)正常時(shí)，黃芩苷可以顯著降低PDLC表面的RANKL/OPG比值，從而使牙槽骨吸收、牙周炎進(jìn)展的危險(xiǎn)因素降低。
那么，當(dāng)TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)被阻斷時(shí)，黃芩苷是否還會(huì)降低PDLC表面的RANKL/OPG比值呢?分析實(shí)驗(yàn)組①和實(shí)驗(yàn)組③中RANKL/OPG比值，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組①高于實(shí)驗(yàn)組③，即當(dāng)T細(xì)胞表面的TGFβⅡR被沉默，TGFβ的信號(hào)傳導(dǎo)被阻斷的情況下，黃芩苷降低PDLC表面的RANKL/OPG比值的作用明顯減弱，說明TGFβ的信號(hào)傳導(dǎo)在黃芩苷影響PDLC表面的RANKL/OPG比值的過程中起到重要作用。分析認(rèn)為黃芩苷可能通過增強(qiáng)TGFβ對(duì)T細(xì)胞的抑制作用，引起T細(xì)胞活性降低、數(shù)量減少，導(dǎo)致T細(xì)胞在內(nèi)毒素作用下分泌的TNFα等炎癥因子減少，降低RANKL/OPG比值，進(jìn)而降低破骨細(xì)胞形成，減少骨丟失。
既然TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)的阻斷使黃芩苷發(fā)揮降低RANKL/OPG比值的作用明顯減弱，那么黃芩苷的這種作用是否被完全阻斷了呢?將黃芩苷從實(shí)驗(yàn)組①中去掉，比較實(shí)驗(yàn)組①和實(shí)驗(yàn)組②中RANKL/OPG比值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組①中RANKL/OPG比值較低，也就是說，即便T細(xì)胞表面的TGFβⅡR基因沉默，TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)被阻斷后，黃芩苷依然可以降低PDLC表面RANKL/OPG比值。這說明黃芩苷并非只通過TGFβ來影響PDLC表面的RANKL/OPG比值，而是亦通過其他通路對(duì)PDLC表面的RANKL/OPG進(jìn)行調(diào)控。
綜上所述，本研究證實(shí)黃芩苷可以降低PDLC表面RANKL/OPG比值;TGFβ信號(hào)傳導(dǎo)在黃芩苷影響PDLC表面RANKL/OPG比值的過程中起著重要作用;黃芩苷并非只通過TGFβ途徑，而亦可能通過其他通路對(duì)PDLC表面的RANKL/OPG進(jìn)行調(diào)控。至于黃芩苷是如何增強(qiáng)TGFβ對(duì)T細(xì)胞的抑制作用的，對(duì)分泌TGFβ的巨噬細(xì)胞等作用怎樣，及黃芩苷還通過什么樣的通路來影響PDLC表面RANKL/OPG比值，這些問題都有待于進(jìn)一步研究。
