六、泌尿系統(tǒng)藥理實(shí)驗(yàn)中的選擇與應(yīng)用
（一)利尿藥及腎功能測(cè)定實(shí)驗(yàn)中動(dòng)物的選擇應(yīng)用
1．利尿藥及抗利尿藥篩選實(shí)驗(yàn)：要判斷所試藥物是否有利尿作用，可選用大白鼠、小白鼠、貓或狗進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其中以大白鼠較為常用。對(duì)人體有利尿作用的藥物均可在大白鼠實(shí)驗(yàn)中獲得較好的利尿效果，但汞撒利的作用較差。因此篩選利尿藥實(shí)驗(yàn)的首選動(dòng)物雖多采用大白鼠，必要時(shí)還應(yīng)再選用另一種動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，加以驗(yàn)證。
收集動(dòng)物尿液的方法可分為兩大類：一是用代謝籠收集較小動(dòng)物24小時(shí)以內(nèi)的尿液量，稱為“代謝籠實(shí)驗(yàn)法”，適用于大白鼠及小白鼠。為了防止尿液的蒸發(fā)和糞便的污染，可選用特別的集尿裝置或用濾紙吸導(dǎo)尿液加以稱重，用此類方法時(shí)，實(shí)驗(yàn)環(huán)境（氣溫和濕度)的影響較大，應(yīng)予控制，室溫以20℃左右為宜。二是直接自輸尿管或膀胱收集尿滴，適用于貓、狗、家兔和大白鼠，實(shí)驗(yàn)可在較短時(shí)間內(nèi)完成，受外界環(huán)境影響也較少，但動(dòng)物處于麻醉狀態(tài)下，與清醒動(dòng)物還有區(qū)別。欲進(jìn)行清醒動(dòng)物的利尿?qū)嶒?yàn)，可采用膀胱瘺法，即預(yù)選給狗或貓進(jìn)行膀胱瘺手術(shù)，二周后切口愈合，再將動(dòng)物固定于特制支架上收集尿液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在利尿藥篩選實(shí)驗(yàn)中，家兔不是首選動(dòng)物，但因其價(jià)廉易得，某些初篩實(shí)驗(yàn)也可用家兔代替家犬進(jìn)行直接集尿的實(shí)驗(yàn)．過去曾用膀胱套管法，由膀胱做切口插入套管，再做荷包縫合，但方法復(fù)雜，套管內(nèi)的尿液往往不能順利流出，不如用聚乙烯塑料套管直接插入輸尿管為好。常選用2kg以上健康雄性家兔作實(shí)驗(yàn)。
2．腎清除率測(cè)定實(shí)驗(yàn)：腎清除率是檢查腎功能的一項(xiàng)重要方法。它表示腎臟對(duì)血液里某物質(zhì)的清除能力，還可以了解腎血流量，游離水的生成和重吸收等方面的情況。狗和大鼠均可用來作清除率試驗(yàn)。大鼠較易獲得，較易飼養(yǎng)，成本低，實(shí)驗(yàn)時(shí)藥品消耗少，在急性實(shí)驗(yàn)時(shí)較易在清醒狀態(tài)下作清除率測(cè)定。
菊糠清除率實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠進(jìn)行。清除率是指每毫升血漿“清除”物質(zhì)的比例。血漿里物質(zhì)大多能被腎小球?yàn)V過，又能被腎小管細(xì)胞分泌或重吸收。唯獨(dú)菊糖僅被腎小球?yàn)V過，而不被腎小管細(xì)胞分泌重吸收，故它的清除率就是腎小球?yàn)V過率。
游離水清除率實(shí)驗(yàn)常選用健康成年狗進(jìn)行，游離水清除率實(shí)驗(yàn)，是一種測(cè)定尿中游離水生成的方法。利用這種方法可以衡量腎臟對(duì)尿液濃縮和稀釋的能力，分析利尿藥對(duì)尿濃縮和稀釋機(jī)制的影響，從而推測(cè)利尿藥的作用部位。
對(duì)氨基馬尿酸清除率實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠或狗，但以大白鼠更為常用。對(duì)氨基馬尿酸的清除率可作為有將腎血漿流量的客觀指標(biāo)。
3．截流分析實(shí)驗(yàn)：截流分析實(shí)驗(yàn)常選用10kg以上健康狗做實(shí)驗(yàn)。截流技術(shù)系一種分析腎小管各段運(yùn)轉(zhuǎn)功能的方法，利用這種方法可對(duì)利尿藥作用部位進(jìn)行初步分析。
4．腎小管微穿刺實(shí)驗(yàn)：腎小管微穿刺（Micropuncture)技術(shù)，于1941年開始應(yīng)用于哺乳動(dòng)物腎臟研究，近年來更獲得很大進(jìn)展，發(fā)展了微量注射，微量灌流等技術(shù)，對(duì)離子及其他物質(zhì)在腎小管的不同節(jié)段中的轉(zhuǎn)動(dòng)過程，作了精確的闡明；用于利尿劑的研究，則可探測(cè)對(duì)單個(gè)腎單位功能的影響以及藥物的作用部位。該實(shí)驗(yàn)常選用大白鼠或狗進(jìn)行。如欲穿刺集合管，可用幼年大白鼠或金地鼠；如欲穿刺腎小球，常用Munich-Wistar大白鼠，因其腎小球位置表淺，易于穿刺。大鼠體重一般采用200～250g較好。
�。ǘ�)泌尿系統(tǒng)疾病的動(dòng)物模型
1．腎炎
�、拍I小球腎炎：Masugi型腎炎動(dòng)物模型是選用羊抗兔腎血清引起兔或大白鼠的腎小球腎炎。羊抗兔血清制備是選用體重2kg左右健康兔處死后取出腎臟，插入導(dǎo)管，反復(fù)用生理鹽水沖洗，然后將皮質(zhì)與髓質(zhì)分開，用腎皮質(zhì)5g研成勻漿與弗氏完全佐劑混勻成10ml，再加生理鹽水使總量達(dá)30ml。此混懸液給綿羊皮下或肌肉多處注射共4次，每2周1次，于末次注射后2周采羊血分離出血清，用等量兔紅細(xì)胞吸附，置于4℃一整夜以吸去血清中可能存在的抗兔血細(xì)胞抗體，經(jīng)離心，取上清液置于56℃水浴中半小時(shí)滅活。通過上述處理的血清給健康兔靜脈注射，每次0.5～2.0ml，隔半小時(shí)一次，約連續(xù)注射3～5次出現(xiàn)蛋白尿?yàn)闃?biāo)志，可認(rèn)為已形成了嚴(yán)重的腎小球腎炎。
�、�慢性腎小球腎炎：動(dòng)物模型是用異種動(dòng)物（兔、大白鼠、狗)腎小球基底膜和弗氏佐劑，給綿羊或獼猴注射，可復(fù)制成慢性腎小球腎炎。獼猴以選用2.2～4,5kg體重的健康猴較好。
�、钱惙N蛋白引起的腎炎：可先由靜脈注入異種蛋白以使動(dòng)物致敏，然后將蛋白直接從動(dòng)脈作決定性注射，以引起急性腎炎。兔耳靜脈注入不稀釋的雞蛋白1～6ml，每次間隔4～5天，共注射4～5次，末次致敏注射后6～12天手術(shù)，在無菌條件下，打開腹腔分離出腎動(dòng)脈，經(jīng)由套在注射器上特殊玻璃小管，向一側(cè)或兩側(cè)注入不稀釋的雞蛋白1～3ml，作為決定性的攻擊。在注入蛋白后，用手指壓迫和用線結(jié)扎腎動(dòng)脈約5～6分鐘。經(jīng)上述處理的動(dòng)物大多數(shù)皆能造成典型的腎炎病變。給狗腹腔注射馬血清，每次5ml，6天1次，共注射13次，于第14次向腎動(dòng)脈注入5ml馬血清也可引起實(shí)驗(yàn)性腎炎。本法造成的腎炎病變，與人類腎炎的病理改變很相似。
�、菶CHO9病毒引起腎小球腎炎：選用出生6天的HAM/ICR系小鼠，每只用含ECHO9病毒的腎組織培養(yǎng)液0.1ml腹腔注射，注射6天后，幼鼠腎組織學(xué)改變類似于急性腎小球腎炎。腎小球細(xì)胞增生，腎小管內(nèi)有透明管型。注射2～3周，幼鼠腎小球損害可達(dá)高峰，6周后減輕甚至消失。
2．自身免疫腎小管間質(zhì)性腎炎
腎臟含有特殊的抗原，它僅存在于小腎皮質(zhì)。用兔腎皮質(zhì)中腎小管的基底膜與弗氏完全佐劑免疫豚鼠，可造成自身免疫腎小管間質(zhì)腎炎。在無菌條件下，取出新西蘭兔的腎臟，用等滲的氯化鈉溶液灌注，置于－25℃冰箱中過夜,而后取出緩慢地融化。去掉腎髓質(zhì)部分，將皮質(zhì)搗碎，通過150目金屬篩后，盛于冷容器中，先用鹽水清洗，接著用pH7.1的磷酸緩沖液反復(fù)清洗，再經(jīng)過1500轉(zhuǎn)/分離心5分鐘。因腎小球較腎小管沉淀得快，經(jīng)顯微鏡證實(shí)，棄去細(xì)胞殘?jiān)瑢⒑胸S富腎小管的上層液與弗氏完全佐劑制成腎小管基底膜的乳化劑（TBM乳劑)，這種制劑中含有腎小管約90%和少量腎小球。每毫升含和TBM濕重15mg。選用體重400～500g的雄性豚鼠，每2周在背部皮膚分別選6個(gè)點(diǎn)作皮下注射，每點(diǎn)注乳劑0.1ml。經(jīng)32天后處死動(dòng)物�？梢娔I臟腫脹，表面有小瘀斑。組織學(xué)檢查可見有典型的間質(zhì)性腎性病變。
3．腎病
�。�1)升汞中毒性腎病：用不同濃度的升汞溶液給狗、家兔和大白鼠皮下或肌肉注射，可造成基本病變相似的壞死性腎病。給實(shí)驗(yàn)前造成輸尿管瘺或膀胱瘺的狗。用2%升汞溶液按20mg/kg的劑量由腹部皮下注射。1～2小時(shí)后，尿量急劇增多，為原來的5～10倍，比重由1.007降至1.001。數(shù)小時(shí)后，尿量開始下降，第二天發(fā)展為少尿或無尿，比重增高1.045～1.049，有少量蛋白。家兔用1%升汞溶液皮下注射，每次0.75～0.80ml，每天1次，5天可致腎病發(fā)生。大白鼠、小白鼠按6～15mg/kg的劑量皮下注射。小白鼠對(duì)升汞敏感性個(gè)體差異大，但也能發(fā)生明顯的壞死性腎病。適用體重190～250g大白鼠按12mg/kg的升汞劑量肌肉注射。24小時(shí)內(nèi)動(dòng)物腎功能受損，腎小球?yàn)V過率進(jìn)行性減少，近曲小管水的重吸收減少以及管內(nèi)壓降低，尿量可少于3ml/24小時(shí)。
�。�2)藏紅花紅O造成的腎病：選用家兔作實(shí)驗(yàn)。用加熱37℃的任-洛氏液配制成1%藏紅花紅O溶液，由兔耳緣靜脈注入，總量為30mg，分2次注入，間隔3小時(shí)。注后24小時(shí)動(dòng)物血清尿素氮顯著增高，血清鉀、鈉也升高，伴有不同程度代謝性酸中毒。藏紅花紅O可選擇性地引起近端和遠(yuǎn)端明曲管上皮廣泛壞死，造成的模型與臨床表現(xiàn)較一致，故在國內(nèi)較為常用。
在動(dòng)物身上復(fù)制泌尿系統(tǒng)的結(jié)石是比較困難的，也不能復(fù)制人體結(jié)石形成的全部復(fù)雜過程。一般是以異物移植入膀胱內(nèi)，也有用維生素A的食物飼養(yǎng)動(dòng)物或清注細(xì)菌等方法造成。有文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)，用乙二醇（Ethylene Glycol)和乙醛酸鈉（Sodium Glyoxylate)中毒時(shí)，在腎內(nèi)形成草酸鈣結(jié)晶，有利于結(jié)石的發(fā)生。
（1)植入異物造成膀胱結(jié)石：選用大白鼠，無菌手術(shù)切開膀胱，植入異物后縫合，術(shù)后加強(qiáng)護(hù)理，經(jīng)4～10周后，多數(shù)動(dòng)物可形成結(jié)石。異物可選用石臘、人的泌尿道結(jié)石碎塊、鉛、鋅、磷等，使其大小不得超過3～4mm直徑，金屬異物應(yīng)是均勻一致的圓形物，平均重疊約2.5mg。
�。�2)食餌性的泌尿系結(jié)石：選用大白鼠（也可用小白鼠、豚鼠或家兔)飼喂維生素A缺乏的食物而引起。最好選用出生一個(gè)月左右的幼年雄性大白鼠（雄性動(dòng)物體內(nèi)維生素較雌性少，且生長較快)，每3天稱重1次，用維生素A缺乏的食物飼養(yǎng)，經(jīng)過10～14天后動(dòng)物體重下降，生長停滯，有干眼病表現(xiàn)。在30～60天中14%動(dòng)物發(fā)生了膀胱結(jié)石，經(jīng)180～250天后，膀胱結(jié)石發(fā)生率可達(dá)88%，腎結(jié)石為41%。
