第八章 血液系統(tǒng)
第一節(jié) 家兔的體外血凝、促凝和抗凝
【實驗目的】
（1)學習用玻片法測定凝血時間。
（2)以凝血時間為指標,觀察家兔體外血液凝固以及組織因子和肝素對血液凝固的影響，并分析其機理制。
【實驗原理】
血液凝固可通過內(nèi)源性凝血系統(tǒng)與外源性凝血系統(tǒng)兩條途徑。內(nèi)源性凝血系統(tǒng)是指參與血液凝固過程的凝血因子全部存在于血漿中,而外源性凝血系統(tǒng)是指在組織因子的參與下血液凝固的過程。本實驗直接從動脈取血,由于血液幾乎沒有與組織因子接觸,其凝血過程主要由內(nèi)源性凝血系統(tǒng)所至。肺組織含有豐富的組織因子,本實驗利用肺組織浸出液，觀察外源性凝血系統(tǒng)的作用。血液凝固受諸多因素,如pH、溫度、與血液接觸的物體表面的光滑程度、凝血物質(zhì)濃度等多種因素的影響,從而導致血液凝固的時間發(fā)生改變，因此，可以血液凝固的時間為指標,觀察不同因素對血液凝固的影響。
【實驗動物】
家兔，體重2.0～2.5kg/只，雌雄不拘。
【實驗藥品與器材】
1． 藥品
蒸餾水、生理鹽水、20%氨基甲酸乙酯或3%戊巴比妥鈉溶液、125單位/ml的低分子量肝素鈉溶液（臨用時配制)、肺組織浸液（含組織因子)。
肺組織浸液制備方法：取新鮮兔肺，剪成小塊，洗凈血液。磨成糊狀。加入3～4倍的生理鹽水，搖勻放冰箱中過夜，濾紙過濾后，即可得肺組織浸液，保存冰箱備用。
2．器材
兔常用手術(shù)器械一套，尼龍動脈插管1根，大頭針4個，玻片3塊，滴管5支，標記筆1支，多功能秒表1個，取血硅化試管1支，恒溫箱1臺。
【實驗觀察指標】
凝血時間測定（小時： 分鐘： 秒： )
【實驗方法與步驟】
1．實驗前的準備
（1)打開恒溫箱，灌入適量的自來水至試管架的平面，恒溫37 ℃。待用。
（2)取干凈、干燥的玻片3塊，編號。
（3)動物準備：兔稱重后，用20%氨基甲酸乙酯4ml/kg或3%戊巴比妥鈉溶液1ml/kg麻醉，注射速度要慢；背位固定，行頸總動脈分離術(shù)和尼龍管插管術(shù)（暫不放血)。
（4)按表8-1中實驗的項目在玻片上分別用不同的滴管加入相應的試劑（注意不要混淆)。然后將玻片放入恒溫箱內(nèi)的玻片架上，加溫至37 ℃。
表8-1家兔的體外血凝、抗凝和促凝因素對凝血時間的影響
| 凝血時間（小時： 分鐘： 秒： ) |
| 1號玻片上加入生理鹽水2滴： 2號玻片上加入肺組織浸液2滴： 3號玻片上加入肝素溶液2滴： |
（5) 取干凈、干燥的硅化試管1支，迅速放入動脈血2ml（注意：經(jīng)尼龍動脈插管取放血時，應先棄掉前面1ml血液)；
2．凝血時間測定
（2)取血后，立即用滴管注射器吸取血液樣本，并在每塊玻片的試劑上加入等量的2滴血液，立刻計時，同時手指輕彈玻片將試劑和血液混勻。
（3) 每隔2秒鐘，用大頭針對各玻片的血液樣本由外向里朝一個方向挑血絲（纖維蛋白絲)，見到第一根血絲時，立即終止計時。從開始計時到終止計時的一段時間即為玻片法的凝血時間。將該時間記錄到表8-1中。
【注意事項】
（1)所用玻璃器皿要求干凈、干燥。
（2)專用試劑、大頭針和滴管不能混淆，以免影響實驗結(jié)果。
（3)計時要仔細和準確、因為第一凝血絲的出現(xiàn)是瞬間的。
【思考題】
（1)比較表8-1中各凝血時間，為什么時間有長短？
（2)在肺組織浸液促進血凝塊出現(xiàn)后立即加入肝素溶液2滴，仔細觀察兔凝血塊是否能溶解？為什么？
（金海燕)
第二節(jié) 急性彌散性血管內(nèi)凝血（DIC)
【實驗目的】
（1)觀察家兔體內(nèi)腸系膜微循環(huán)的血液流動特點。
（2)了解復制 DIC 動物模型的方法。
（3)觀察組織因子在家兔體內(nèi)促凝過程并分析其作用機制。
（4)觀察肝素預防血液凝固的作用。
（5)了解與血液凝固有關(guān)的實驗室檢查及原理。
【實驗原理】
DIC 是指在某些致病因素作用下 , 凝血因子和血小板被激活、 大量促凝物質(zhì)入血 , 引起以凝血功能障礙為主要特征的病理過程。臨床上主要表現(xiàn)為出血、全身微血管內(nèi)微血栓形成、溶血甚至休克。同時還可導致腎臟、肺、肝臟等各個器官發(fā)生功能障礙 , 嚴重或持續(xù)時間較長則可導致受累臟器功能衰竭。
【實驗動物】
家兔，體重2.0～2.5kg/只，雌雄不拘。
【實驗藥品與器材】
1．藥品
20%氨基甲酸乙酯或3%戊巴比妥鈉溶液、蒸餾水、生理鹽水、低分子量肝素鈉溶液（臨用時，一支肝素溶液用生理鹽水稀釋10倍)、肺組織浸液。
2．器材
Compact-X型全自動血液凝集分析儀，BL-2000型微循環(huán)觀察儀；手術(shù)器械一套、尼龍動脈插管，5ml注射器3個、1ml注射器1個，計時鐘1臺。
【實驗觀察指標】
（1)腸系膜微循環(huán)凝血時間測定（小時： 分鐘： 秒： )，計時從注射試劑開始到血流停止為止。凝血酶原時間(PT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)、 凝血酶時間(TT)/ 爬蟲酶時間、 纖維蛋白原(FIB)、凝血因子濃度(Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ)、抗Ⅹa因子肝素檢測、D二聚體。
（2)腸系膜微循環(huán)固定視野內(nèi)毛細血管數(shù)、管腔直徑和血流速度。
（3)呼吸頻率、嘴唇、黏膜的發(fā)紺情況。
【實驗方法與步驟】
1.勁總動脈動插管取血
家兔稱重后，用20%氨基甲酸乙酯5ml/kg或3%戊巴比妥鈉溶液1ml/kg麻醉，背位固定后，行頸總動脈分離術(shù)和尼龍管插管術(shù)。取血2ml做血凝指標檢測。
2.家兔腸系膜微循環(huán)暴露手術(shù)
在兔右腹側(cè)部（近兔臺處)作一平行于兔身體縱軸的約2cm長的切口，打開腹腔，輕輕拿出一小段小腸，找出腸系膜的透明部分，將其置于低倍顯微鏡下，找到微循環(huán)血液流速很快的部分，并在高倍鏡下進一步找到含有數(shù)根僅有單個細胞通過的毛payment-defi.com/hushi/細血管的腸系膜，固定該視野，以便觀察其變化。（用濕潤的生理鹽水紗布輕輕蓋在腸系膜上)
3．三只家兔，分別編號1、2、3。做以下實驗：
（1) 注射生理鹽水組：在2分鐘內(nèi)給1號兔緩慢靜脈注射生理鹽水 4 ml；
（2) 肺組織浸液促凝組：在2分鐘內(nèi)給2號兔緩慢靜脈注射生理鹽水 2 ml和肺組織浸液2ml；
（3) 肝素溶液抗凝組： 在2分鐘內(nèi)給3號兔緩慢靜脈注射肝素溶液2ml和肺組織浸液2ml 。
表8-2家兔的體內(nèi)血凝、促凝和抗凝因素對凝血時間、呼吸及發(fā)紺的影響
| 凝血時間（小時： 分鐘： 秒payment-defi.com： ) | 呼吸（次/分)、發(fā)紺
|
| 生理鹽水組 肺組織浸液組 肝素溶液組 |
4. 腸系膜微循環(huán)觀察
仔細觀察固定視野內(nèi)毛細血管數(shù)、管腔直徑和血流速度。實驗結(jié)果經(jīng)BL-2000醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)記錄和打�。ㄒ姷谌碌谌�(jié))。
【注意事項】
（1)手術(shù)中要注意及時止血。
（2)固定選好的微循環(huán)觀察視野，如視野發(fā)生移動，應及時找回，以保證實驗結(jié)果的前后對比。
【思考題】
（1)比較三組的微循環(huán)情況，是否都有凝血？為什么？
（2)在肺組織浸液組，微循環(huán)發(fā)生凝血后立即緩慢注射注射肝素溶液2ml，仔細觀察兔腸系膜微循環(huán)凝血情況是否能改善？為什么？
（3)在肺組織浸液組，微循環(huán)發(fā)凝血后若兔繼續(xù)存活，仔細觀察1～3小時后兔腸系膜微循環(huán)是否發(fā)生多處毛細血管壁破裂、出血現(xiàn)象即彌漫性血管內(nèi)凝血（DIC)現(xiàn)象。
（4)如何預防DIC的發(fā)生？
（金海燕、韓偉)
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凝血前 凝血后