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1 材料和方法
1.1 藥品與試劑
牛膝由泰山醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院購進(jìn)，經(jīng)本院生藥學(xué)教研室鑒定為懷牛膝;聯(lián)苯雙酯滴丸，德州德藥制藥公司，批號(hào)061005 ;無水乙醇，分析純，天津市廣成化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為080215;0.9%氯化鈉注射液(normal NS)，山東省泰安制藥廠，批號(hào)07033102;GPT、SOD、MDA試劑盒，南京建成生物工程研究所;卡介苗，上海生物制品研究所;脂多糖，Sigma公司產(chǎn)品。
1.2 儀器
BT815A自動(dòng)生化測(cè)試分析系統(tǒng)，上海三科儀器有限公司;電子分析天平AR2140，奧豪斯(上海)公司;LXJIIB型低速大容量離心機(jī)，上海安亨科學(xué)儀器廠。
1.3 動(dòng)物
昆明種小鼠，18～22 g，雌雄兼用，由泰山醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。
1.4 方法
1.4.1 牛膝多糖的提取純化和含量測(cè)定[2] 取粉碎至適當(dāng)顆粒的牛膝藥材40 g，置1000 ml容量瓶中加80%乙醇200 ml浸泡14 h，微沸回流脫脂2次，每次2 h。殘?jiān)鼮V干置1000 ml圓底燒瓶中按料液比1︰15加水600 ml，80℃，提取兩次，每次3 h。合并兩次提取的濾液，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮至約100 ml。Savage試劑法脫蛋白，加入3倍的Savage試劑充分震蕩混勻，5000 r/min離心15 min，取上清液重復(fù)脫蛋白操作2次，至不再出現(xiàn)蛋白。將所得溶液按1︰5加入無水乙醇進(jìn)行醇沉，靜置一夜，5000 r/min離心15 min，所得粉末用CCl4洗滌2次，乙醚洗滌2次，每次洗滌后離心。干燥的白色粉末即為牛膝多糖，用苯酚—硫酸法測(cè)定所提取牛膝多糖含量為74.28%醫(yī).學(xué)全.在.線網(wǎng)站payment-defi.com。
1.4.2 動(dòng)物分組與給藥 取小鼠60只，雌雄各半，按性別和體重隨機(jī)分為5組。①生理鹽水對(duì)照組;②模型對(duì)照組;③聯(lián)苯雙酯150 mg·kg-1·d-1陽性對(duì)照組;④⑤分別為牛膝多糖150 mg·kg-1·d-1、300 mg·kg-1·d-1實(shí)驗(yàn)組。③組灌胃聯(lián)苯雙酯150 mg·kg-1·d-1，④⑤組分別灌胃牛膝多糖150 mg·kg-1·d-1、300 mg·kg-1·d-1，①②組分別灌胃等容量生理鹽水，連續(xù)給藥10天。參照文獻(xiàn)[3]，制作小鼠免疫性肝損傷模型，即由尾靜脈注射0.2 ml內(nèi)含2.0 mg BCG的生理鹽水溶液，10 d后每鼠尾靜脈注射7.5 μg LPS。12 h后小鼠摘眼球取血，4000 r/min離心15 min分離血清，測(cè)定血清中ALT的含量。上述取血后處死小鼠剖取出肝臟、胸腺、脾臟。肝臟置生理鹽水中洗凈血液，拭干稱取0.5 g用冷生理鹽水制成10%肝勻漿，3500 r/min離心10 min，取上清測(cè)定ALT、 MDA、SOD的含量。胸腺、脾臟稱其質(zhì)量，計(jì)算臟器指數(shù)[臟器指數(shù)=臟器重(mg)/體重(g)]。
